一种新的多肽--人严谨因子23和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人严谨因子２３，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如由于细胞基因转录紊乱而导致的各种肿瘤等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人严谨因子２３的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人严谨因子23，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。{技术背景}当细菌在不良的营养条件下生长时，由于缺乏足够的氨基酸，蛋白质合成受到抑制，并由此影响到细胞的许多生理生化活性，代谢水平下降，生长速度变慢。这种反应叫做“严谨反应”。严谨反应不仅调控蛋白质的合成，而且也调控基因转录、DNA复制等许多细胞生理过程，使细胞渡过困难时期。严谨反应的触发器是位于核糖体A位的无负载的tRNA。当这种无负载的tRNA进入A位后，无法形成新的肽链，而GTP却在不断的消耗。这时，细胞体内出现鸟苷-5’-二磷酸-3’二磷酸(ppGpp)和鸟苷-5’-三磷酸-3’-二磷酸(pppGpp)。这两种高磷酸化鸟苷调控转录产生严谨反应。在大肠杆菌中，(p)ppGpp的合成是由relA/spoT基因调控的。relA基因编码的蛋白称为严谨因子。在正常情况下，relA基因表达很少，当氨基酸饥饿时，relA基因的表达才增加。而spoT的基因产物同时具有合成和降解(p)ppGpp的双重作用。对spoT的分析发现，其前203个氨基酸具有焦磷酸水解酶的活性，而64-374氨基酸残基具有(p)ppGpp合成酶的活性。在碳源缺乏的时候，(p)ppGpp的聚集主要是spoT的基因产物所引起的。对relA和spoT的基因序列的比较发现二者关系非常密切。可能二者是由于基因复制而产生的，在进化过程中relA具有了(p)ppGpp合成的活性，而spoT则更倾向于(p)ppGpp的降解。现在在其他种类的细菌中也发现了类似relA/spoT的基因结构，例如在链球菌S.coelicolor中发现的Rel蛋白同时具有RelA和SpoT的活性。在真核生物中也发现了类似的调控通路。这表明由于营养条件恶劣而产生的严谨反应具有普遍性，新的严谨因子的发现对于理解基因转录的调控具有重要意义。同时，严谨因子的出现也是细胞周围营养环境不良的信号，新的严谨因子的发现有助于寻找易于操作的方法以检测细胞的营养环境。严谨因子本身也是基因转录的调控因子，将其应用于药物生产中可以治疗或预防由于基因转录紊乱而导致的疾病，例如各种肿瘤等。1997年，Fujimura T等人在研究高表达葡萄球菌2,6二甲氧基苯青霉素抗性突变体时发现这一突变是由于基因组中的一段2.5kb的片段缺失而导致的。对这一2.5kb的片段的分析发现它包括3个开放读框，其中的第一个开放读框与大肠杆菌的relA基因和spoT基因有很高的同源性。本专利技术的基因在蛋白水平上与上述基因有43％的同一性和59％的相似性。因此认为该新蛋白为一新的严谨因子，具有与RelA和SpoT相似的功能，并命名为人Rel23。应用本专利技术是一种严谨因子，在细胞周围营养环境恶劣时高表达。因此，本专利技术人Rel23可以作为一种检测信号来检测细胞的营养状态。本专利技术人Rel23本身是基因转录的调控因子，本专利技术的多肽或其片段可以用来治疗或预防由于细胞基因转录紊乱而导致的各种肿瘤，包括但不限于各种上皮组织、非造血系统间叶组织(如纤维组织、脂肪组织、软骨组织、平滑肌组织、血管和淋巴管内批组织等等)、早血组织(如B细胞、T细胞、组织细胞等)、中枢神经组织、周围神经组织、内分泌组织、性腺组织、特殊组织(如牙组织等)来源的肿瘤。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人严谨因子23以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人严谨因子23的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人严谨因子23的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人严谨因子23的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人严谨因子23的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人严谨因子23的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人严谨因子23异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的人严谨因子23，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少75％相同性(a)编码上述人严谨因子23的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中{49-6 78}位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中{1-1219}位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的人严谨因子23”是指人严谨因子23基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化人严谨因子23。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。人严谨因子23多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多肽——人严谨因子23，其基本上是由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括人严谨因子23的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的人严谨因子23相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(Ⅰ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(Ⅱ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(Ⅲ)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(Ⅳ)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有SEQ ID NO:2氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人严谨因子２３，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]