从软骨鱼类分离的蛋白多糖及其制造方法技术

本发明专利技术提供一种蛋白多糖，它来源于软骨鱼类的软骨的水提取物且主成分具有５００ｋＤａ以上的分子量；还提供含有上述蛋白多糖的组合物；还提供含有上述蛋白多糖作为有效成分的药物组合物；以及还提供蛋白多糖的制造方法，包括将来源于软骨鱼类的软骨粉碎成平均粒径为１００μｍ以下的粉碎物的工序、向上述粉碎物中添加水来提取水溶性成分的工序、分离含有上述被提取的水溶性成分的水相的工序以及向上述水相中添加醇得到沉淀物的工序。由此本发明专利技术提供即使摄取少量也能够发挥效果且效果的作用机制明确的软骨提取物及其制造方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种。具体地说，涉及一种维持健康、提高生活质量而且在医药领域有用的蛋白多糖及其制造方法。
技术介绍
癌是苦恼人类的共同的疾病，其治疗正在成为全世界的课题。在日本，主要的死亡原因正在从感染性疾病向生活习惯关联性疾病移行，特别是癌已经成为日本人死亡原因的第1位，作为疾病对策上的最重要课题，研究正在进行之中。癌能够在所有的脏器、组织中发生，所以因体质、性别、年龄、地域和生活习惯不同而异。另外，以转移或增殖能力为主的所有的性质根据癌的种类而不同，所以至今还没有确立具有决定性的治疗方法。癌细胞的特征是伴随血管新生来确保营养成分，进行无规则的自主性增殖、通过转移和浸润在身体的各部位产生新的癌组织。在此基础上，癌性恶液质会导致宿主衰弱至死。作为目前正在进行的癌的治疗方法，有切除或使用抗癌药、免疫疗法、温热疗法、放射线照射等，而疗效因癌的种类而不同，或者因原发灶部位而不能利用，进而宿主在副作用的作用下变得衰弱。因此，抑制固体癌中共通的血管新生或转移、浸润的治疗方法正受到注意(Folkman J.，Nat.Med.127-31，1995)。已知在癌细胞转移或浸润、血管新生时，为了破坏包围细胞的细胞外基质或基底膜，主要使用Matrix Metallo Protease(MMP)。以上述为基础，作为目前癌治疗的新目标，使用通过阻碍MMP来阻碍癌的转移、浸润和血管新生以抑制癌的进展的方法，还开发有各种合成的MMP抑制剂(IkiK.等、Carcinogenesis，1999 Jul；20(7)1323-9、RasmussenA.H.等、International Business Communications(1997)、Naito K.等、Int J Cancer1994 Sep 1；58(5)730-5)。但是，作为副作用，报道有骨髓毒性、细胞毒性、关节痛，在实用中存在问题。另一方面，作为相对于天然物的最近的趋势，在中药或食品中发现有在各种疾病的预防、进展中有效的成分，其中的一部分被厚生劳动省确认作为特定保健用食品而显示出有效。即使在癌治疗中，来源于食品的成分也被关注，各种食品中的成分的抑癌效果正在研究中。其中，由于没有在软骨组织中形成血管，所以认为在软骨组织中含有血管新生抑制活性物质。事实上，在将软骨提取物注入到肿瘤的周边的实验中，可见抑制肿瘤的增殖或血管新生(Lee A.等、Science 1983Sep 16；221(4616)1185-7)。作为鲨鱼软骨的血管新生抑制功能之一，可以举出MMP的抑制，有报道在活体外(in vitro)可见MMP的抑制(Moses，M.A.等、J.Cell.Biochem.47230-235，1991；Gingras D.等、Anticancer.Res.200119(1-2)83-6)，另外，即使在向动物经口投放的实验中亦可见血管新生的抑制(Davis PF.等、Microvasc Res 1997 Sep；54(2)178-82)。以这些观点为基础，鲨鱼是软骨鱼类，可以比硬骨动物更多地采集品质良好的软骨，所以鲨鱼软骨粉有希望推迟或抑制癌的进展，癌患者经口使用的替代疗法和临床研究正在进行中(Ernst E.、Lancet 351298 1998)。但是，通过鲨鱼软骨的经口摄取的体内的鲨鱼软骨的肿瘤抑制效果的构造几乎不清楚，另外，也未能得出通过鲨鱼软骨的经口摄取而鲨鱼软骨在组织中抑制MMP的观点。作为从鲨鱼软骨得到有效成分的方法，已知有使鲨鱼软骨成为微粉末状而直接用作有效成分的方法(特开2001-48795号公报)或者粉碎鲨鱼的软骨而进行水提取得到的冻结干燥物的制造方法(特表平9-512563号公报，美国专利第4473551号说明书)。
技术实现思路
但是，为了取得效果，在上述方法中得到的来源于鲨鱼软骨的成分必须通过过量摄取或者通过与其它有效成分并用，才能发挥抗肿瘤活性或抗炎症活性，其效果的作用机制尚没有得到证明。因此，本专利技术的目的在于，提供一种少量摄取即能发挥效果而且效果的作用机制明确的软骨提取物和其制造方法。本专利技术人等为了达到上述目的，对有效地从软骨提取有效成分的条件和有效成分的特性进行了潜心研究，结果发现通过满足下述条件的成分和其制造方法可以达到需要的目的，以至完成本专利技术。即，本专利技术的分离的蛋白多糖的特征在于，来源于软骨鱼类的软骨的水提取物且主成分的分子量为500kDa以上。上述蛋白多糖优选不溶于醇。上述蛋白多糖优选葡糖氨基葡聚糖部分以硫酸软骨素(chondroitinsulfate)C为主成分。上述蛋白多糖优选相对于Matrix Metallo Protease具有抑制活性。在上述Matrix Metallo Protease为MMP-9的情况下，上述抑制活性优选是使已摄取0.4重量％添加饵料的载癌动物的血清中的MMP-9抑制活性的减少得到恢复的作用，或者使已摄取0.4重量％添加饵料的载癌动物的血清中的MMP-9抑制活性至少增加5％的作用。上述蛋白多糖优选通过有效量的生体内摄取而具有使相对于组织蛋白酶B的抑制活性上升的作用。上述蛋白多糖优选通过有效量的生体内摄取而具有使血清中的结合珠蛋白量增大的活性。本专利技术的组合物的特征在于，含有上述蛋白多糖。上述组合物优选用于提高生活质量。本专利技术的药物组合物的特征在于，含有上述蛋白多糖作为有效成分。本专利技术的蛋白多糖的制造方法的特征在于，包括将来源于软骨鱼类的软骨粉碎为平均粒径在100μm以下的粉碎物的工序、向上述粉碎物中添加水来提取水溶性成分的工序、分离含有上述被提取的水溶性成分的水相的工序、以及向上述水相中添加醇得到沉淀物的工序。附图说明图1是表示在实施例1中得到的鲨鱼软骨水提取物的组成的图。图2是表示利用实施例1的凝胶过滤HPLC得到的MMP-9抑制活性区域的氨基酸组成图。图3是表示在实施例1中得到的鲨鱼软骨水提取物的MMP-2和MMP-9抑制活性的图。图4是表示通过等电点电泳的各区域的pH与MMP-9抑制活性的相关的图。图5是表示凝胶过滤(Superdex(注册商标)75)的流程图。图6是表示检测通过凝胶过滤(Superdex(注册商标)75)的各区域的MMP-9抑制活性的电泳图。图7是表示醋酸纤维素膜电泳的结果的图。图8是表示凝胶过滤(Superdex(注册商标)200)的流程图。图8B是表示Superdex(注册商标)200的洗脱时间与分子量之间的关系的图。图8C是表示通过Superdex(注册商标)200的各区域的MMP-9抑制活性的图。图9是表示比较本专利技术品与硫酸软骨素C和市售鲨鱼软骨的MMP-9抑制活性的图。表示向10μl的活性型MMP-9中加入样品水溶液5μl而在37℃下反应24小时时的MMP-9的残存活性。图10是表示在实施例1中的化学致癌仓鼠的抑癌效果的图。表示用基础食或实验食饲育50天时的肿瘤数量。★p＜0.05。图11是表示在实施例3中的胰癌患者的血清中的MMP-9抑制活性的图。图12是表示对在实施例3中的胰癌患者的血清中的IV型胶原片段进行定量的结果的图。具体实施例方式本专利技术的分离的蛋白多糖来源于软骨鱼类的软骨的水提取物，主要成分的分子量500kDa以上。对成为上述蛋白多糖的原料的软骨鱼类没本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白多糖，其特征在于，是从软骨鱼类的软骨的水提取物分离出来的，且主成分具有５００ｋＤａ以上的分子量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤健司，堤雅弘，野村义宏，村田奈保，近藤直幸，
申请(专利权)人：细川密克朗集团，
类型：发明
国别省市：JP[日本]