本申请通过质谱分析技术共发现26多种蛋白质在RA患者及正常对照者血清中的免疫复合物中有差异性表达，其中脂多糖结合蛋白(LBP)被证明在RA循环免疫复合物中升高，进一步研究发现，LBP是RA的特异性血清标志物，并可以对RA疾病活动度的评估和诊断有重要作用。本发明专利技术目是对于应用酶联免疫吸附法检测LBP水平，并应用于RA的诊断和疾病活动度评估。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因重组工程，特别是涉及脂多糖结合蛋白的用途。具体而言，本专利技术 涉及利用ELISA检测RA患者血清及关节液中的LBP，从而制备相应的类风湿关节炎相关试 剂盒，提供脂多糖结合蛋白的一种新的制药用途。
技术介绍
脂多糖结合蛋白（lipopolysaccharide binding protein，LBP)，是主要由肝细胞 (肾近曲小管上皮细胞、肺泡壁II型细胞也可少量合成）产生的一种介导内毒素与靶细胞 受体结合的急性期应激反应蛋白，它能显著促进脂多糖（lipopolysaccharide，LPS)与单 核/巨噬细胞膜表面的⑶14 (mCD14)结合，形成LPS-LBP-⑶14复合物，经单核/巨噬细胞 膜上的 Toll-Like Receptor4(TLR4)_Myeloid Differentiation Protein2(MD_2)-MYD88 识别复合物转导，再经多显性转录核因子（nuclear factor kappa B，NF-kappa B)向胞核 内传递信号，激活单核-巨噬细胞，促进炎性因子的分泌及炎症的发生、发展，导致肝、肺、 肾等重要脏器发生严重损害。 人脂多糖结合蛋白（LBP)基因全长28. 5Kb，位于人染色体20qlI. 23-ql2上，含有 14个外显子，编码与脂多糖结合部位的基因位于第3、4外显子（即成熟完整LBP的N端 区），基因5'端含有急性期反应蛋白所共有的启动子急性期反应元件/信号传导转录活 化3 (APRE/STAT-3)，启动子与外显子之间还含有促炎症转录因子活化蛋白I(AP-I)和C/ EBP转录因子，3 ^端为富含AATAAA的非编码区，因此LBP基因能在急性期被激活、分泌表 达。成熟完整脂多糖结合蛋白的相对分子量（Mr) 60kDa，其家族包括人脂多糖结合蛋白、 杀菌通透性增强蛋白（Bactericidal Permeability-Increasing protein，BPI)、血衆胆 固醇脂转移蛋白（Plasma Cholesteryl Ester Transfer Protein，CETP)、磷脂转移蛋白 (phospholipid transfer protein，PLTP)等。脂多糖结合蛋白的N端在空间上形成两个无 极性的脂性结合位点，为人脂多糖结合蛋白与脂多糖的结合点，人脂多糖结合蛋白与CD14 的结合部位则位于脂多糖结合蛋白的C-末端。 脂多糖结合蛋白能显著的促进脂多糖与mCD14结合，Nanbo等人发现人脂多糖结 合蛋白可将机体对脂多糖识别的敏感度提高1000倍，在炎症急性反应早期，当血清脂多糖 浓度相对较低时，就已有微量脂多糖结合蛋白参与，并且只有在脂多糖结合蛋白存在情况 下机体才能对小剂量的脂多糖或细菌产生反应，从而增强机体抗感染作用，但在急性炎症 反应中后期，当血清脂多糖结合蛋白含量升高时，脂多糖结合蛋白会导致单核/巨噬细胞 过度活化，大量分泌白细胞介素（?υ-1β、IL-6、肿瘤坏死因子- α (TNF-CI)等细胞因子， 这些因子又强烈地加速脂多糖结合蛋白基因的转录和脂多糖结合蛋白多肽的合成，进而导 致机体严重损害，出现感染性休克、弥漫性毛细血管内凝血（DIC)、多脏器衰竭（MOF)(见 Eur J Biocheml999, 260(1) :183-191)等，因此如何抑制过度的炎症反应和防止弥漫性毛 细血管内凝血、多脏器衰竭的发生已成为当今临床工作中的一个重要研究方向。 类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性、进行性、侵袭性关节炎 为主要表现的全身性自身免疫病。该病在我国患病人数较多，且具有高致残率，为社会经济 带来巨大负担。目前临床上，CRP和ESR是最常用于RA病情评估的血清学指标，新的炎症 因子和自身抗体亟待被发现，从而使RA的血清学诊断与病情评估正在向更全面、更准确方 向发展。 现有技术认为患者血液中脂多糖结合蛋白浓度可作为判断损伤、预后的一个重要 参考指标，但LBP与免疫系统疾病，尤其是LBP与类风湿关节炎之间的相互关系并没有人进 行研究，也并没有相关的实验结果证实两者之间具有相关性。
技术实现思路
我们通过质谱分析技术共发现26多种蛋白质在RA患者及正常对照者血清中的免 疫复合物中有差异性表达，其中脂多糖结合蛋白（LBP)被证明在RA循环免疫复合物中升 高，进一步研究发现，LBP是RA的特异性血清标志物，并可以对RA疾病活动度的评估和诊 断有重要作用。本专利技术目是对于应用酶联免疫吸附法检测LBP水平，并应用于RA的诊断和 疾病活动度评估。 本专利技术所要解决的技术问题之一在于提供一种脂多糖结合蛋白； 本专利技术所要解决的技术问题之二在于提供一种抗脂多糖结合蛋白的检测方法； 本专利技术所要解决的技术问题之三在于提供一种抗脂多糖结合蛋白与类风湿关节 炎疾病相关性； 本专利技术所要解决的技术问题之四在于提供一种脂多糖结合蛋白的检测试剂盒； 本专利技术所要解决的技术问题之五在于提供一种抗脂多糖结合蛋白的制药用途。 为实现本专利技术目的而提供的一种脂多糖结合蛋白氨基端片段，编码所述脂多糖结 合蛋白的氨基酸序列为： I mgalaralps illallltst pealganpgl varitdkglq yaaqegllal qsellritlp 61 dftgdlriph vgrgryefhs lkihscellh salrpvpgqg lslsisdssi rvqgrwkvrk 121 sffklqgffd vsvkgisisv nlllgsessg rptvtasscs sdiadvevdm sgdlgwllnl 181 fhnqieskfq kvlesricem iqksvssdlq pylqtlpvtt eidsfadidy slveaprata 241 qmlevmfkge ifhrnhsspv tllaavmslp eehnkmvyfa isdyvfntas lvyheegyln 301 fsitddmipp dsnirlttks frpfvprlar lypnmnlelq gsvpsaplln fspgnlsvdp 361 ymeidafvhl pssskepvfr lsvatnvsat ltfntskitg flkpgkvkve lkeskvglfn 421 aelleallny yilntfypkf ndklaegfpl pllkrvqlyd lglqihkdfl flganvqymr 481 v (SEQ ID NO. I) 或被上述序列所包涵的任何氨基酸序列片段。 本专利技术的有益效果是：本专利技术通过从人脂多糖结合蛋白入手，我们通过质谱分析 技术共发现26多种蛋白质在RA患者及正常对照者血清中的免疫复合物中有差异性表达， 其中脂多糖结合蛋白（LBP)被证明在RA循环免疫复合物中升高，进一步研究发现，LBP是 RA的特异性血清标志物，并可以对RA疾病活动度的评估和诊断有重要作用。【附图说明】 图I RA患者及对照组血清中LBP浓度测定：RA患者血清中LBP浓度显著高于健 康人群及疾病对照（P< 0.0001)。图中用虚线标出RA诊断的cutoff值（52. 95本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种脂多糖结合蛋白，其特征在于，编码所述脂多糖结合蛋白的氨基酸序列为：1 mgalaralps illallltst pealganpgl varitdkglq yaaqegllal qsellritlp61 dftgdlriph vgrgryefhs lkihscellh salrpvpgqg lslsisdssi rvqgrwkvrk121 sffklqgffd vsvkgisisv nlllgsessg rptvtasscs sdiadvevdm sgdlgwllnl181 fhnqieskfq kvlesricem iqksvssdlq pylqtlpvtt eidsfadidy slveaprata241 qmlevmfkge ifhrnhsspv tllaavmslp eehnkmvyfa isdyvfntas lvyheegyln301 fsitddmipp dsnirlttks frpfvprlar lypnmnlelq gsvpsaplln fspgnlsvdp361 ymeidafvhl pssskepvfr lsvatnvsat ltfntskitg flkpgkvkve lkeskvglfn421 aelleallny yilntfypkf ndklaegfpl pllkrvqlyd lglqihkdfl flganvqymr481 v...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓麟，温雯，栗占国，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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