一种具有改善记忆功能龙眼蛋白多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有改善记忆功能龙眼蛋白多糖的制备方法，本发明专利技术属于龙眼加工技术领域，具体为对龙眼干依次进行超声波-酶协同前处理、超高压处理、乙醇分步沉淀处理和冷冻干燥处理后制得龙眼蛋白多糖。本发明专利技术解决了目前常规方法提取的龙眼蛋白多糖不具备改善记忆功能的问题，全套工艺简单，操作方便，所得产品品质稳定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及龙眼加工
，尤其涉及一种具有改善记忆功能龙眼蛋白多糖的 制备方法。
技术介绍
龙眼又称桂圆，是我国南方亚热带特色水果，具有药食两用功效。龙眼的益智功能 在《本草纲目》、《滇南本草》等我国古代医药书上已早有记载，现代医学研究表明多糖是龙 眼果肉的主要活性成分，表现出抗氧化、免疫调节、改善记忆功能等多重生物活性。 多糖的传统提取方法以热水浸提为主，随着天然产物分离纯化技术的不断发展， 酶解和超声波等技术已广泛用于植物活性多糖的提取分离，然而这些方法存在耗时长、能 耗高、杂质含量高及提取率低等缺陷。超高压技术是近年来发展较快的一种新型加工技术， 通过使得细胞内外形成巨大的压力差，造成细胞破裂，释放出有效成分，具有操作简单、时 间短、杂质含量少及环保等优点。目前已经被应用于植物有效活性成分的提取，包括黄酮、 皂苷、生物碱及多酚类物质。近年来，已有植物活性多糖的超高压提取工艺方面的报道，如 申请号为201310676570. 8的专利公开了一种超高压提取松茸多糖的工艺。 植物蛋白多糖是具有生物活性的大分子，和细胞壁上的纤维素结合在一起，结构 紧密，单纯采用超高压技术不能有效的对多糖进行提取，而且提取出来的蛋白多糖的不存 在改善记忆的功能，本专利技术采用超声波-酶协同前处理结合超高压提取龙眼蛋白多糖，可 以用作特殊医学用途食品的配料，为龙眼的精深加工提供了新途径，对推动我国龙眼产业 的健康发展具有十分中药的意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高提取率且具有改 善记忆功能的龙眼蛋白多糖的制备方法。 为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下方案实现： ，对龙眼干依次进行超声波_酶协同 前处理、超高压处理、乙醇分步沉淀处理和冷冻干燥处理后制得龙眼蛋白多糖。 超高压提取技术是一种新型的加工技术，具有快速、高效、耗能小、提取温度低等 特点，已被广泛应用到物料中有效成分的提取，但是经过专利技术人的试验，虽然利用超高压提 取技术也能进行提取，但是其提取率较低，并且在随后的小鼠实验中，通过超高压提取技术 提取得到的龙眼蛋白多糖，其并没有改善小鼠的记忆功能障碍，经过专利技术人的进一步探究， 在进行超高压处理前，结合超声波-酶进行前处理后，再通过超高压提取，不仅仅大幅度的 提高了龙眼蛋白多糖的提取率，而且能显著改善小鼠的记忆功能障碍。 更具体的步骤如下： Si.超声波-酶协同前处理：龙眼干加水打浆，将浆液置于超声场中同时添加复合酶进 行处理，得酶解液； 52. 超高压处理：对步骤SI中的酶解液进行超高压处理得龙眼液； 53. 乙醇分步沉淀处理：对步骤S2中的龙眼液过滤后浓缩，于浓缩液中加入乙醇进行 分步沉淀； 54. 冷冻干燥处理：将步骤S3中的沉淀进行真空冷冻干燥，得龙眼蛋白多糖。 步骤Sl中，水的添加量为龙眼干重量的10~40倍，所述复合酶为纤维素酶和木 聚糖酶，纤维素酶的添加量为龙眼干重量的〇. 2~0. 6%，木聚糖酶的添加量为龙眼干重量的 0. 1~0. 5%，超声波功率为200~400w。 通过纤维素酶和木聚糖酶结合超声波进行前处理，再进行超高压处理，正是通过 这两种方式的结合，使得最终提取出来的龙眼蛋白多糖具有显著的改善记忆功能，而且发 明人在确定这两种方式后，通过进一步的优化，采用了纤维素酶和木聚糖酶，并在合适的用 量和酶解条件下，提高最终的龙眼蛋白多糖提取率。 步骤Sl中，调整浆液pH为5.0~6.8,于温度为35~50°C下处理10~30min。 步骤S2中，超高压压力为200~500Mpa，处理时间为3~15min。 步骤S3中，将过滤后的龙眼液浓缩汁1/4体积。 步骤S3中，于浓缩液中加入乙醇进行分步沉淀具体为：于浓缩液中加入95%乙醇 至最终乙醇的体积百分比为30%，在3~6°C下静置8~12h后过滤去掉沉淀，向上清液中继续 加入95%乙醇至最终乙醇的体积百分比为80%，并在3~6°C下静置8~12h后离心得沉淀。这 一步骤中，分为两次沉淀操作，通过舍弃第一次得到的沉淀，并且将第二次沉淀操作中乙醇 的浓度定位至80%，这使得最终提取出来的蛋白多糖具备显著的改善记忆功能。 于转速为4000r/min的条件下离心5~10min。 步骤S4中，真空冷冻干燥具体为：于-60~-20°C冷冻干燥20~48h得龙眼蛋白多 糖。 与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果： 1. 本专利技术通过超声波-酶处理与超高压处理结合，使得制备出来的龙眼蛋白多糖具有 显著的改善记忆功能； 2. 本专利技术全套工艺简单，操作方便，所得产品品质稳定，可用作特殊医学用途配方食品 的配料，同时也提高了龙眼的附加值，为其他药食两用植物资源食品的精深加工提供了指 导。【具体实施方式】 为了让本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面对本专利技术作进一步 阐述。 实施例1 一、龙眼蛋白多糖的制备 ，包括如下步骤： Si.超声波-酶协同前处理：于100g龙眼干添加其重量10倍的水进行打浆，将浆液置 于200W功率的超声场中，同时添加纤维素酶和木聚糖酶，纤维素酶的添加量为龙眼干重量 的0. 2%，木聚糖酶的添加量为龙眼干重量的0. 1%，调整浆液的pH为5. 0,于温度为35°C下 处理IOmin得酶解液； 52. 超高压处理：将步骤SI中的酶解液于压力为200Mpa的条件下处理3min得龙眼 液； 53. 乙醇分步沉淀处理：将步骤S2中的龙眼液过滤后浓缩至1/4体积，于浓缩液中加 入95%乙醇至最终乙醇的体积百分比为30%，在3°C下静置8h后过滤去掉沉淀，向上清液中 继续加入95%乙醇至最终乙醇的体积百分比为80%，并在3°C下静置8h后离心得沉淀； 54. 将S3得到的沉淀于-60°C冷冻干燥20h得龙眼蛋白多糖。 经测试，龙眼蛋白多糖的提取率为14. 1%。 二、动物实验 1、试验条件 I. 1样品 本实施例1的龙眼蛋白多糖粉末。 1.2实验动物 KM小鼠，雄性，体重20~25g，SPF级，由南方医科大学实验动物中心提供。小鼠于实验 前7d置于实验室适应环境，温度23±2°C，湿度为50~60%，自由饮食、摄水。 L3分组及处理 (1)分组 KM小鼠60只，适应性喂养1周后随即分为5组，每组12只，包括对照组、模型组和3 个龙眼蛋白多糖剂量组。对照组和模型组灌胃0.9%生理盐水，龙眼蛋白多糖组按低剂量 100mg/kg、中剂量200mg/kg、高剂量300mg/kg灌胃给药，连续给药28天，在最后一次给药 Ih后，除对照组腹腔注射生理盐水外，其它组均腹腔注射东莨菪碱（3mg/kg b.w.)，并于注 射20min后进行明暗箱避暗实验。 (2)明暗箱实验 被动回避实验时利用动物的好暗避光（明暗穿梭)、对厌恶刺激(如足电击）的恐惧和 记忆而建立起来的。避暗系统包括两个等大（20. 3cm*15. 9cm*21. 3cm)的隔室，一个为明 箱，一个为暗箱，明室上盖对应有LED灯，暗室上盖对应有一红外探头，两室之间由一个 拱门（8. 9cm*ll. 4cm)相连，门可由实验需要关闭或打开。隔室地板为不锈钢栅栏(直径 3. 175_)。暗箱一侧的栅栏地板与刺激器相联，并可给予电击；明箱一侧则本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有改善记忆功能龙眼蛋白多糖的制备方法，其特征在于，对龙眼干依次进行超声波‑酶协同前处理、超高压处理、乙醇分步沉淀处理和冷冻干燥处理后制得龙眼蛋白多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘磊，张名位，张瑞芬，张雁，唐小俊，邓媛元，马永轩，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广州力衡临床营养品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44