The invention discloses a method of mutagenesis of Streptomyces hygroscopicus, the Streptomyces hygroscopicus with glycerol and 80 fresh slant Twain washing, filtering, single spore solution filtered water, LiCl aqueous solution to the sterilization, immediately removed in a shaker for 6 hours, under the ultraviolet lamp irradiation; UV light irradiation spore suspension at 4 DEG C, light is placed into the visible light, the dilution isolation in the LiCl base plate, 25 C culture medium; will the single colony was cultured on hormone in glucose asparagine in isolation; after seed medium and liquid fermentation, fermentation. In the method of UV treatment, photo revival and dark repair, the positive correlation between the titer of bacteria and the titer of fermentation supernatant is more than a moderate degree, so that the mutation probability of strain can be increased. In this case, the determination of the titer of the fermented supernatant can be used to screen the bacteria titer, so as to eliminate a large number of low yield colonies.
【技术实现步骤摘要】
一种吸水链霉菌的诱变方法
本专利技术属于微生物领域,具体涉及吸水链霉菌的诱变方法。
技术介绍
雷帕霉素(Rapamycin,RPM,RAPA),又名西罗莫司(Sirolimus),是在1975年由加拿大Ayerst研究所从吸水链霉菌(Strepomyceshygroscopicus)中分离出来的三烯大环内酯类抗生素,它作为一种新型的高效免疫抑制剂引起了广泛的关注,同时它又是一种有效的抗真菌剂并具有抗肿瘤的作用。进行大规模发酵和工业化生产,菌种选育最重要的手段之一。
技术实现思路
鉴于此,本专利技术目的在于提供一种选育吸水链霉菌的方法。为解决以上技术问题,本专利技术提供的技术方案是,提供一种吸水链霉菌的诱变方法,步骤如下:1)将吸水链霉菌新鲜斜面用20%甘油与0.1%吐温80洗下,过滤,将过滤后的单孢子原液加水至10ml,按0.85%终浓度加入灭菌的LiCl水溶液,在28℃摇床作用6小时后立即取出,置于波长253.7nm、功率30W的紫外灯下30cm处开盖振摇照射;紫外光光照射处理后,孢子液于4℃避光放置24h,转入可见光下,稀释涂布于0.5%LiCl的分离培养基平皿上,于25℃培养20天;2)将在分离培养基平皿上长好的单菌落接种在葡萄糖天门冬素培养基斜面上,于25℃培养15天后进行液体发酵;3)于250ml三角瓶内装50m1种子培养基,由斜面按种后于28℃振摇培养48小时;4)于500ml三角瓶内装50-100ml液体发酵培养基,由种子以5%接种量转种后于25℃振摇培养96小时,结束发酵。进一步地,所述分离培养基组分及重量百分比为酵母膏0.1%、牛肉膏0.1% ...
【技术保护点】
一种吸水链霉菌的诱变方法,其特征在于,步骤如下:将吸水链霉菌新鲜斜面用20%甘油与0.1%吐温80洗下,过滤,将过滤后的单孢子原液加水至10ml,按0.85%终浓度加入灭菌的LiCl水溶液,在28℃摇床作用6小时后立即取出,置于波长253.7nm、功率30W的紫外灯下30cm处开盖振摇照射;紫外光光照射处理后,孢子液于4℃避光放置24h,转入可见光下,稀释涂布于0.5%LiCl的分离培养基平皿上,于25℃培养20天;将在分离培养基平皿上长好的单菌落接种在葡萄糖天门冬素培养基斜面上,于25℃培养15天后进行液体发酵;于250ml三角瓶内装50m1种子培养基,由斜面按种后于28℃振摇培养48小时;于500ml三角瓶内装50‑100ml液体发酵培养基,由种子以5%接种量转种后于25℃振摇培养96小时,结束发酵;所述分离培养基组分及重量百分比为酵母膏 0.1%、牛肉膏0.1%,水解乳蛋白0.2%、葡萄糖1.0%,琼脂1.2%;所述葡萄糖天门冬素培养基组分及重量百分比为:天门冬素0.05%,K2HPO40.05%,葡萄糖1.0%,琼脂1.2%;所述种子培养基组分及重量百分比为:黄豆饼粉2.0%, ...
【技术特征摘要】
1.一种吸水链霉菌的诱变方法,其特征在于,步骤如下:将吸水链霉菌新鲜斜面用20%甘油与0.1%吐温80洗下,过滤,将过滤后的单孢子原液加水至10ml,按0.85%终浓度加入灭菌的LiCl水溶液,在28℃摇床作用6小时后立即取出,置于波长253.7nm、功率30W的紫外灯下30cm处开盖振摇照射;紫外光光照射处理后,孢子液于4℃避光放置24h,转入可见光下,稀释涂布于0.5%LiCl的分离培养基平皿上,于25℃培养20天;将在分离培养基平皿上长好的单菌落接种在葡萄糖天门冬素培养基斜面上,于25℃培养15天后进行液体发酵;于250ml三角瓶内装50m1种子培养基,由斜面按种后于28℃振摇培养48小时;于500ml三角瓶内装50-100ml液体发酵培养基,由种子以...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。