基于阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法技术

本发明专利技术涉及阳离子脂质体非病毒基因载体领域，具体涉及基于阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法。本发明专利技术通过琼脂糖凝胶电泳技术定性定量的分析阳离子脂质体与基因的结合过程；通过构建荧光共振能量转移体系，采用荧光光谱技术及停流光谱技术来检测阳离子脂质体与基因之间的结合过程，拟合其结合动力学曲线符合线性方程，实现从宏观和微观检测阳离子脂质体‑基因结合动力学的目的。本发明专利技术公开的阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法，适用于研究带正电荷的阳离子脂质体与基因的体外结合动力学过程，拓宽了琼脂糖凝胶电泳技术、荧光光谱技术和停流光谱技术的应用，并为阳离子脂质体基因载体递送机制研究及进一步应用研究提供理论基础。

Cationic liposome gene combined detection method based on Dynamics

【技术实现步骤摘要】
基于阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法
本专利技术涉及阳离子脂质体非病毒基因载体领域，具体涉及基于阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法。
技术介绍
近几十年来，随着对基因的深入研究，科学家发现许多疾病，如遗传性疾病癌症，都与人体的基因异常有密切关系。将正常的外源基因导入靶细胞，以纠正或补偿基因缺陷和异常，从根本上消除产生疾病症状的内因，达到治疗或者预防疾病的目的[1]，从而产生了一种革新性的治疗方法，即基因治疗。基因治疗过程中，如何将基因安全高效地递送到病变组织或细胞，是基因治疗成功的关键。阳离子脂质体是目前研究最深入、应用最广泛的一种基因递送载体，可通过带正电的头部和基因上带负电的磷酸基团结合，有效地压缩基因形成复合物，使基因能够顺利通过各种障碍，如逃逸免疫系统、穿透细胞膜、从内涵体释放等，完成基因递送过程[2]。在阳离子脂质体递送基因的过程中，阳离子脂质体与基因的结合动力学是阳离子脂质体介导基因高效递送的关键问题，阳离子脂质体与基因结合得太疏松，基因可能会在血液中提前释放而无法到达靶部位；两者结合得过于紧密又不利于基因与阳离子脂质体发生解离，影响基因在细胞内释放，从而影响其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)制备阳离子脂质体/基因复合物，阳离子脂质体与基因的质量比为8：1～1：1，将上述复合物在0～70min进行琼脂糖凝胶电泳实验，通过琼脂糖凝胶电泳成像系统软件定量分析阳离子脂质体结合基因的量；(2)采用荧光染料分别标记阳离子脂质体与基因，按阳离子脂质体与基因的质量比8：1～1：1制备阳离子脂质体/基因复合物，构建荧光共振能量转移体系，采用荧光光谱仪检测阳离子脂质体与基因结合0～70min内复合物的发光强度；(3)将核酸染料与基因结合，构建FRET体系，加入阳离子脂质体使其与核酸染料竞争结合基因，采用停流光谱仪检测阳离子脂...

【技术特征摘要】
1.一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)制备阳离子脂质体/基因复合物，阳离子脂质体与基因的质量比为8：1～1：1，将上述复合物在0～70min进行琼脂糖凝胶电泳实验，通过琼脂糖凝胶电泳成像系统软件定量分析阳离子脂质体结合基因的量；(2)采用荧光染料分别标记阳离子脂质体与基因，按阳离子脂质体与基因的质量比8：1～1：1制备阳离子脂质体/基因复合物，构建荧光共振能量转移体系，采用荧光光谱仪检测阳离子脂质体与基因结合0～70min内复合物的发光强度；(3)将核酸染料与基因结合，构建FRET体系，加入阳离子脂质体使其与核酸染料竞争结合基因，采用停流光谱仪检测阳离子脂质体与基因在0-200s内的瞬时结合动力学，得到结合动力学曲线，通过停流光谱仪分析软件进行线性拟合，得到结合动力学轨迹符合线性方程y＝-0.0004x+1.3657；其中，x代表结合时间，y代表结合后荧光变化，用电压表示。2.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述的阳离子脂质体...

【专利技术属性】
技术研发人员：张树彪，赵轶男，田甜，朴永哲，周泉，周恒君，
申请(专利权)人：大连民族大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21