葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法技术

本发明专利技术公开了葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。以葡萄糖为原料，合成了一系列不同结构的葡萄糖衍生物阳离子脂质：di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA、Glu-DiC12MA、Glu-DiC14MA、Glu-DiC16MA和Glu-DiC18MA。上述脂质体经水分散后得到一系列具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，能实现核酸药物从胞外到胞内的转运，亦可用于非核酸药物的转运载体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。
技术介绍
近年来，基因治疗在治疗遗传疾病、多种传染病以及癌症方面起到越来越重要的作用。目前基因治疗面临最大的挑战是找到一种安全高效的基因载体将外援基因导入到人体细胞内。常用的基因载体有病毒载体和非病毒载体，病毒载体转导效率高、复杂的装配过程由细胞完成、不同病毒载体具有不同表达特点，但是由于存在无法控制病毒复制的风险并具内在免疫原性，而使其应用受到限制；相比于病毒载体而言非病毒载体具有毒性低、免疫反应低，而且所携带的基因不整合至宿主细胞基因组等优点。而作为非病毒性载体之一的阳离子脂质体在临床试验中具有较好的发展前景。阳离子脂质体本身带有正电荷，所以可作为带负电荷药物的传递载体，特别适用于蛋白、多肽、DNA和RNA类药物，故在抗病毒、抗癌症等方面的基因治疗研究中有独特应用。以葡萄糖为原料，通过全乙酰化、脱1-O-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、4,6-O-异丙叉基保护、醚化、脱叉基保护、还原氨化和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度和不同物理结构的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质：di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA和di-C12-Glu-TMA；以葡萄糖为原料，通过全乙酰化、脱1-O-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、还原氨化、叔胺化、和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度、和不同物理结构的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质：Glu-DiC12MA、Glu-DiC14MA、Glu-DiC16MA和Glu-DiC18MA；利用上述八种葡萄糖衍生物阳离子脂质带正电荷的季铵盐头部可通过静电作用结合核酸药物，利用带长链的疏水端可与细胞壁膦脂双分子层结合的特征，可望通过融合内吞作用实现核酸药物从胞外到胞内的转运。所制备的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉等优点，能满足核酸药物转运载体应具备的基本要求。所制备的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，亦可用于构建非核酸药物缓释给药系统，或用于非核酸药物的转运载体。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种合成成本低、操作容易的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。本专利技术提供的这种丙二醇胺衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：(1)以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为溶剂及反应物，经柱层析分离纯化得到白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；(2)以二氧六环和甲醇为混合溶剂，1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与氨气发生反应脱去1位乙酰基，经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；(3)以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈发生施密特反应，经经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；(4)以无水二氯甲烷为溶剂，TMSOTf为催化剂，步骤(3)所得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得到白色晶体3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；(5)以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；(6)以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；(7)以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；(8)以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与烷基溴反应，经柱层析分离纯化得到3’-叠氮基丙基2,3-二-O-二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；(9)以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，经柱层析分离纯化得到3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；(10)以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得到3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄苷；(11)步骤(10)得到的3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；(12)以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-氨基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；(13)步骤(12)所得产物3’-氨基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇、乙醇为溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下与溴代烷烃反应，经柱层析分离纯化得无色浆状物3’-(N,N-二正烷基)丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；(14)步骤(13)得到的3’-(N,N-二正烷基)丙基β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；(15)步骤(11)和步骤(14)得到的白色固体经超声波振荡水分散后得到相应的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为溶剂及酰化试剂，浓缩，结晶得白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖。反应温度：10oC~20oC；反应时间：10h；反应投料比为：葡萄糖(mol):乙酸酐(mol):高氯酸(mol)=1:7.5:0.06；结晶使用溶剂为：石油醚:乙酸乙酯=10:1(体积比)。所得1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以环氧六环和甲醇为混合溶剂(环氧六环:甲醇=5:2，体积比)，常温下通入氨气反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖。反应时间：20min~40min；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=2:1(体积比)。所得2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：(1) 以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为酰化剂及反应溶剂，经酸催化乙酰化反应，经结晶纯化处理得到白色粉末状固体1,2,3,4,6‑五‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖；(2)  以二氧六环和甲醇为混合溶剂，1,2,3,4,6‑五‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1‑O‑乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖； (3) 以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾为催化剂，2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯； (4) 以无水二氯甲烷为溶剂，三氟甲磺酸三甲基硅酯(简称为TMSOTf)为催化剂，步骤(3)所得淡黄色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3‑氯‑1‑丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’‑氯丙基 2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (5) 以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，3’‑氯丙基 2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’‑叠氮基丙基 2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (6) 以甲醇为溶剂，3’‑叠氮基丙基 2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’‑叠氮基丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (7) 室温下，以浓硫酸为催化剂，骤(6)所得产物与2,2‑二甲氧基丙烷反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’‑叠氮基丙基 4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (8) 以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’‑叠氮基丙基 4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与正烷基溴发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化得3’‑叠氮基丙基 2,3‑二‑O‑二正烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(9)  以甲醇为溶剂，3’‑叠氮基丙基 2,3‑二‑O‑正烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’‑叠氮基丙基 2,3‑二‑O‑正烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (10) 以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’‑叠氮基丙基 2,3‑二‑O‑正烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得3’‑N,N‑二甲胺基丙基 2,3‑二‑O‑正烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷；(11) 步骤(10)得到的3’‑N,N‑二甲胺基丙基 2,3‑二‑O‑正烷基‑β‑D‑吡喃葡萄  苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体； (12) 以步骤(6)得到的3’‑叠氮基丙基 β‑D‑吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’‑氨基丙基 β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (13) 以甲醇、乙醇为溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下，步骤(12)得到的3’‑氨基丙基 β‑D‑吡喃葡萄糖苷与溴代烷烃反应，经柱层析分离纯化得无色油状物3’‑(N,N‑二正烷基)丙基 β‑D‑吡喃葡萄糖苷； (14) 步骤(13)得到的3’‑(N,N‑二正烷基)丙基 β‑D‑吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体； (15) 步骤(11)和步骤(14)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。...

【技术特征摘要】
1.一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：
(1)以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为酰化剂及反应溶剂，经酸催化乙酰化反应，经结晶纯化处理得到白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；
(2)以二氧六环和甲醇为混合溶剂，1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1-O-乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；
(3)以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾为催化剂，2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；
(4)以无水二氯甲烷为溶剂，三氟甲磺酸三甲基硅酯(简称为TMSOTf)为催化剂，步骤(3)所得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(5)以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(6)以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；
(7)室温下，以浓硫酸为催化剂，骤(6)所得产物与2,2-二甲氧基丙烷反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(8)以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与正烷基溴发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3-二-O-二正烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(9)以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(10)以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄苷；
(11)步骤(10)得到的3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(12)以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-氨基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；
(13)以甲醇、乙醇为溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下，步骤(12)得到的3’-氨基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷与溴代烷烃反应，经柱层析分离纯化得无色油状物3’-(N,N-二正烷基)丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；
(14)步骤(13)得到的3’-(N,N-二正烷基)丙基β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(15)步骤(11)和步骤(14)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(4)3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为溶剂及反应物，浓缩，结晶得白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，反应温度：10oC~20oC；反应时间：10h；反应投料比为：葡萄糖(mol):乙酸酐(mol):高氯酸(mol)=1:7.5:0.06；结晶使用溶剂为：石油醚:乙酸乙酯=10:1(体积比)；所得产物1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以二氧六环和甲醇为混合溶剂(二氧六环:甲醇=5:2，体积比)，常温下通入氨气反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，反应时间：20min~40min；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=2:1(体积比)；所得产物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，反应时间：24h；反应投料比为：2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖(mol):三氯乙腈(mol):无水碳酸钾(mol)=1:2.5:1；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=3:1(体积比)；所得产物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，以无水二氯甲烷为溶剂，4?分子筛为除水剂，以TMSOTf为催化剂，在氮气的保护下与3-氯-1-丙醇反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：-20oC至室温；反应时间：4h；反应投料比为：2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol):3-氯丙醇(mol):TMSOTf(mol)=1:2.4:0.01；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=3:1(体积比)。
3.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(7)3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，在加热条件下，3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC，反应时间：24h；反应投料比为：3’-氯丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol):叠氮化钠(mol)=1:6；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=3:1(体积比)；以甲醇为溶剂，通入氨气至饱和条件下，脱除3’-叠氮基丙基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的乙酰基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24h；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯:甲醇=2:1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷，以2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：4h，柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=2:1(体积比)。
4.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷的合成：步骤(7)所得产物3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10h；反应投料比：3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol):氢化钠(mol):月桂基溴(mol)=1:6:4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=16:1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，在甲醇-乙酰氯条件下去异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：0oC至室温；反应时间：1h；反应投料比：3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol):乙酰氯(mol)=1:8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=2:1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：24h；反应投料比：3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol):甲醛(mol)=1:8，3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g):钯碳(g)=1:0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯:甲醇=5:1(体积比)；所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：3h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol):碘甲烷(mol)=1:4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，真空干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C12-Glu-TMA)纳米颗粒。
5.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷的合成：步骤(7)所得产物3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10h；反应投料比：3’-叠氮基丙基4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol):氢化钠(mol):肉豆蔻基溴(mol)=1:6:4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=16:1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：0oC至室温；反应时间：1h；反应投料比：3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol):乙酰氯(mol)=1:8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚:乙酸乙酯=2:1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：24h；反应投料比：3’-叠氮基丙基2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾佑林，何成喜，刘美艳，
申请(专利权)人：湖南师范大学，曾佑林，
类型：发明
国别省市：湖南;43