一种脑血疏制剂指纹图谱的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂脑血疏口服液指纹图谱的构建方法。本发明专利技术主要采用高效液相色谱法检测，流动相：乙腈‑0.1％磷酸水，流动相A为0.1％磷酸水，流动相B为乙腈，检测波长223nm，柱温30℃，进样量10μl，所有组分均在90min内被检测完。

A method for the determination of fingerprint of cerebral blood thinning preparation

The invention relates to a method for the detection of medicinal preparation, in particular to a method for the construction of a fingerprint of the oral liquid of the brain blood thinning oral liquid of the Chinese medicine preparation. The invention is mainly determined by high performance liquid chromatography, the mobile phase of acetonitrile 0.1% phosphoric acid water, the mobile phase A was 0.1% phosphoric acid water, the mobile phase B was 223nm, the detection wavelength, column temperature of 30 DEG C, sample volume 10 L, all components were detected in 90min in the end.

【技术实现步骤摘要】
一种脑血疏制剂指纹图谱的测定方法
本专利技术涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂脑血疏指纹图谱的测定方法。
技术介绍
脑血管病是当今世界危害人类健康的三大疾病之一，是中老年人的多发病，死亡率很高，在我国脑血管病占死因的第二位。国内报道脑出血死亡率为38-43%，幸存者约有50%-70%患者留有严重的后遗症，生活不能自理，不仅病人遭受极大痛苦，也给家庭和社会造成负担。中药治疗脑血管病有其优势，如已经上市的中药脑血疏口服液，其配方和工艺描述在中国专利200810100200.9，“一种中药脑血疏制剂”中，该专利描述了一种由中药黄芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黄、川芎等制成中药制剂，经过实验发现，该制剂具有益气、活血、化瘀作用，主治中风急性期及恢复早期，属气虚血瘀证。自脑血疏制剂上市以来，因其治疗效果好，见效快，价格便宜，受到了广大患者的好评。脑血疏口服液作为一种中药复方制剂，处方药材较多(由7味药材组成)，成分非常复杂多样。在“脑血疏口服液标准”(国家食品药品监督管理局新药转正标准)中采用薄层色谱法仅建立了黄芪甲苷单个成分的含量测定方法。但脑血疏口服液为复方制剂，单纯通过检测一种指标成分定量来控制其药品质量显然是不全面的，也不能体现中药复方制剂的整体性特征。因此，开发建立一种简便易行，准确性高，重复性良好且能尽可能多地反映复方制剂所含多成分的指纹图谱检测方法对于脑血疏口服液的质量控制和评价非常必要。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种脑血疏口服液指纹图谱构建方法及其指纹图谱。本专利技术通过对脑血疏口服液指纹图谱的研究，提供了一种操作简便、稳定、精密度高和重现性好，可用于脑血疏口服液的质量检测和评价的方法，弥补了现有质量控制方法的不足，使脑血疏口服液的质量控制技术更为完善、科学。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：(1)供试品溶液的制备：取脑血疏口服液，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的黄芪甲苷、水蛭素、β-细辛醚、牛膝总皂苷、丹皮酚、大黄酸、川芎嗪对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得脑血疏口服液指纹图谱；步骤(3)中，测定的液相色谱条件为：色谱柱为PHENOMENEXLUNAC-18色谱柱；流动相A为0.1％磷酸水溶液(体积分数)，流动相B为乙腈；梯度洗脱；流动相流速为0.9ml/min；柱温为30℃；检测波长为223nm。步骤(3)中，梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：0-10min，流动相A95％-90％，流动相B5％-10％；10-20min，流动相A90％-80％,流动相B10％-20％；20-50min，流动相A80％-65％,流动相B20％-35％；50-60min，流动相A65％-45％,流动相B35％-55％；60-80min，流动相A45％-20％,流动相B55％-80％；80-100min，流动相A20％-5％,流动相B80％-95％。具体的，步骤(1)中，供试品溶液的制备方法为：精密量取1.0ml脑血疏口服液于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声提取10min，恢复至室温，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液即得供试品溶液。步骤(2)中，对照品溶液的制备方法为：精密称取黄芪甲苷标准品7.50mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.75mg/mL的对照品溶液；精密称取水蛭素标准品0.0285g，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为2.85mg/mL的对照品溶液；精密称取β-细辛醚标准品4.62mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.462mg/mL的对照品溶液；精密称取牛膝总皂苷标准品0.0185g，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为1.85mg/mL的对照品溶液；精密称取丹皮酚标准品6.55mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.655mg/mL的对照品溶液；精密称取大黄酸标准品8.54mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.854mg/mL的对照品溶液；精密称取川芎嗪标准品5.85mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.585mg/mL的对照品溶液。步骤(3)中，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液的体积均为10μL。需要说明的是，本专利技术的指纹图谱的构建方法是经过科学实验而筛选得到的，并非是本领域的常规选择，本专利技术主要对供试品溶液的制备方法，色谱条件，检测波长和分析时间等条件进行了优选。其中：1)供试品溶液配制方法的考察：试验比较了不同提取溶剂如丙酮、乙醇、甲醇的水浴回流和索氏提取、超声提取等不同提取方法的提取效果，结果以甲醇超声提取的总体效果为佳。同时还考察了以甲醇为提取溶剂，不同提取时间（5,10，20min）的提取效果。结果表明，超声提取10min，提取较完全，操作方法简便，且方法稳定、重现性好。采用甲醇超声提取样品，所得图谱信息量较大，既含脂溶性成分也包括水溶性成分，符合指纹图谱整体性的要求，其尽可能反映了药材所含的全部信息，可以作为综合质量评价的方法。此外还比较了提取溶剂稀释倍数对样品溶液检测效果的影响，如稀释20倍，10倍和5倍，结果以甲醇作为提取溶剂稀释10倍的检测效果为佳。2)色谱条件的选择及优化：在流动相系统的选择中，分别以甲醇-水、甲醇--0.05%磷酸水、乙腈-水、乙腈-0.05%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.3%磷酸水等不同体积分数、不同比例的流动相系统进行了等度和梯度洗脱试验。结果表明，用乙腈-0.1%磷酸水进行梯度洗脱为佳，色谱峰检测比较全面，基线平稳，峰形对称，分离度较好，峰面积较大，调整流动相不同时间洗脱比例之后，各峰的保留时间适中，且基线较平稳，不易漂移，同时提高了色谱图的分离度，有效避免了色谱图的拖尾现象，有利于指纹图谱的分析。3)检测波长的选择：采用光电二极管阵列检测器(PDAD)在190～400nm扫描的各波长下的色谱图进行比较分析，结果表明：223nm处检测的色谱图不仅基线平稳，色谱峰较多，信息量大，各色谱峰的分离效果较好，峰面积也较大。因此，选223nm作为检测波长。同时考察了其他波长下的色谱图，其结果显示脑血疏口服液在不同波长下的色谱指纹图谱具有较好的相似度。4)分析时间的选择：在选择指纹图谱的洗脱时间时记录了2h的色谱图。结果表明90min以后基本没有明显的色谱峰出现，同时为了照顾批次样品的差异性，保证所有批次样品的特征峰都能够被检出，因此选择100min作为分析时间。5)柱温的选择：试验了四个不同柱温(如25℃，30℃，35℃和40℃)对指纹图谱检测结果的影响。结果显示柱温为30℃时，色谱峰保留时间适宜，基线平稳，各色谱峰分离度较好，峰形对称，因此选择柱温为30℃。6)流速的选择：试验了四个流速(0.6ml/min,0.8ml/min,0.9ml/min和1.0ml/min)对指纹图谱检测结果的影响。结果表明：流速为0.9ml/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脑血疏口服液指纹图谱构建方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：(2)对照品溶液的制备：(3)测定供试品溶液和对照品溶液色谱图；(4)得到脑血疏口服液指纹图谱；。

【技术特征摘要】
1.一种脑血疏口服液指纹图谱构建方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：(2)对照品溶液的制备：(3)测定供试品溶液和对照品溶液色谱图；(4)得到脑血疏口服液指纹图谱；。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取脑血疏口服液，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的黄芪甲苷、水蛭素、β-细辛醚、牛膝总皂苷、丹皮酚、大黄酸、川芎嗪对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得脑血疏口服液指纹图谱。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法为：精密量取1.0ml脑血疏口服液于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声提取10min，恢复至室温，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液即得供试品溶液。4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法为：精密称取黄芪甲苷标准品7.50mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.75mg/mL的对照品溶液；精密称取水蛭素标准品0.0285g，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为2.85mg/mL的对照品溶液；精密称取β-细辛醚标准品4.62mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.462...

【专利技术属性】
技术研发人员：周万辉，曾英姿，王冬梅，于洪亮，赵磊，程世娟，刘春蕾，高燕，高阳，
申请(专利权)人：山东沃华医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37