正骨水指纹图谱的构建方法及检测方法技术

本发明专利技术公开了正骨水的指纹图谱构建方法及其指纹图谱，该构建方法包括如下步骤：(1)供试品的制备：精密取正骨水，用乙醇水溶液稀释并定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得正骨水的指纹图谱。本发明专利技术经发明专利技术人的大量实验和研究，确定了制备供试品溶液的方法及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出正骨水的指纹图谱，并将其应用到正骨水的质量控制当中，从而保证了不同操作者、不同实验室多重复做出的指纹图谱都在允许的误差范围内，体现了所述指纹图谱的通用性、稳定性和实用性，能够全面、有效地对正骨水进行质量控制。

【技术实现步骤摘要】
正骨水指纹图谱的构建方法及检测方法
本专利技术属于中药分析领域，涉及一种中药指纹的构建方法，特别是涉及一种正骨水指纹的构建方法及检测方法。
技术介绍
基于中医药理论的中成药，药味组成比较繁多，一般是指将两味以上中药进行配伍组合并应用于疾病治疗的制剂。在制备过程中，不同成分之间可能相互发生反应，导致其成分更加复杂，所以准确检测其各有效成分的难度很大，如仅定性或定量的检测其中某个或某几个成分，由于信息量有限，难以体现中药组合物作为整体的化学特征。正骨水是广西玉林制药集团有限责任公司自主研发的中成药，主要用于治疗跌打扭伤、骨折脱位及体育运动前后疲劳。该药由草乌、徐长卿、两面针、虎杖、碎骨木等26味中药组成，具有活血祛瘀、舒经活络、消肿止痛之功效。目前对正骨水的质量控制方法中，主要包括：(1)以降香对照药材、丹皮酚对照品、两面针对照药材进行薄层色谱鉴别；(2)以樟脑对照品、薄荷脑对照品进行气相色谱法鉴别；(3)以丹皮酚为对照品进行高效液相色谱法测定，其中每1ml正骨水含徐长卿按丹皮酚(C9H10O3)计算，不得少于0.1mg。正骨水的特定原料药以及制剂成分复杂多样，上述方法仅针对部分药材或成分进行表征与控制，具有一定的片面性，均不能全面的反应正骨水中有效化学成分，不足以对其进行有效的质量控制。
技术实现思路
基于此，针对上述问题，本专利技术提供了一种正骨水指纹图谱的构建方法，从而实现对正骨水主要化学成分的整体分析与有效表征，建立具备系统性、特征性、稳定性的正骨水质量控制方法。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种正骨水的指纹图谱的构建方法，该构建方法包括以下步骤：(1)供试品的制备：精密取正骨水，以乙醇水溶液稀释并定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的正骨水指纹图谱。在其中一个实施例中，步骤(2)中，高效液相色谱测定的色谱条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，柱温20℃～35℃，以乙腈为流动相A，0.1％-0.4％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相的流速为0.5-1.5mL/min，检测波长为270nm-290nm。在其中一个实施例中，梯度洗脱中的，流动相A、B的变化设置如下：0～15min，所述流动相A的体积百分比由5％变化至20％，所述流动相B的体积百分比由95％变化至80％；15～45min，所述流动相A的体积百分比由20％变化至30％，所述流动相B的体积百分比由80％变化至70％；45～75min，所述流动相A的体积百分比由30％变化至50％，所述流动相B的体积百分比由70％变化至50％；75～90min，所述流动相A的体积百分比由50％变化至80％，所述流动相B的体积百分比由50％变化至20％；90～110min，所述流动相A的体积百分比由80％变化至100％，所述流动相B的体积百分比由20％变化至0％。优选地，所述正骨水的指纹图谱构建方法包括以下步骤：(1)精密取正骨水1ml，置于100ml容量瓶中，加入体积浓度50-75％的乙醇水溶液至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪测定，即得具有共有特征峰的正骨水指纹图谱。在其中一个实施例中，色谱条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，柱温30℃，以乙腈为流动相A，0.1％的甲酸溶液为流动相B，流动相的流速为1mL/min，进行梯度洗脱，检测波长为280nm。本专利技术的另一目的是提供一种正骨水指纹图谱的检测方法。具体技术方案如下：一种正骨水指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：(1)供试品的制备：精密取正骨水，以乙醇水溶液稀释并定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得。在其中一个实施例中，将步骤(2)检测得到的供试品溶液色谱图与上述构建方法得到的指纹图谱比较，计算相似度，对正骨水的质量进行评价。在其中一个实施例中，步骤(2)的色谱条件如下：色谱柱：AgilentExtendC18(250×4.6mm，5μm)；检测器：二极管阵列检测器；柱温20℃～35℃，以乙腈为流动相A，0.1％-0.4％的甲酸水溶液为流动相B，流动相的流速为0.5-1.5mL/min，检测波长为270nm-290nm；梯度洗脱：0～15min，流动相A的体积百分比由5％变化至20％；15～45min，流动相A的体积百分比由20％变化至30％；45～75min，流动相A的体积百分比由30％变化至50％；75～90min，流动相A的体积百分比由50％变化至80％；90～110min，流动相A的体积百分比由80％变化至100％。本专利技术的另一目的在于提供一种正骨水的指纹图谱，该指纹图谱是通过上述指纹图谱构建方法构建的，共有22个共有峰：两面针的特征峰包括1、3、4、5、8号峰；木香的特征峰包括2号峰；降香的特征峰包括6、7、9、10、12、13、15、16、17、20、21号峰；香加皮的特征峰包括11号峰；徐长卿的特征峰包括14号峰；樟脑的特征峰包括18号峰；五味藤的特征峰包括19号峰；香樟的特征峰包括22号峰。基于以上技术方案，本专利技术具有以下效果：本专利技术经专利技术人的大量实验和研究，确定了制备供试品溶液的方法及高效液相色谱方法的色谱条件的最优参数，由此构建出正骨水的指纹图谱，并将其应用到正骨水的质量控制当中，从而保证了不同操作者、不同实验室多重复做出的指纹图谱都在允许的误差范围内，体现了所述指纹图谱的通用性、稳定性和实用性，能够全面、有效地对正骨水进行质量控制。附图说明图1为考察不同检测波长试验下的色谱图，其中S1：254nm；S2：260nm；S3：280nm；S4：300nm；图2为考察不同流动相试验的色谱图，其中，S1：乙腈-水；S2：乙腈-0.1％磷酸；S3：乙腈-0.1％甲酸的色谱图；图3为考察流动相梯度试验的色谱图，其中，S1：梯度1；S2：梯度2；S3：梯度3；图4为19批样品的叠加色谱图，其中S1-S19为样品的编号；图5为正骨水的指纹图谱色谱图，其中的1-22为特征峰的编号；图6为正骨水与对应原料药材特征峰的色谱图，其中，S1：正骨水213281；S2：降香；S3：两面针；S4：五味藤；S5：香加皮；S6：两香樟；S7：徐长卿；图7为混合对照品、丹皮酚对照品与正骨水样品在280nm下的色谱图，其中S1：樟脑、4-甲氧基水杨醛和丹皮酚混合对照品；S2：丹皮酚对照品；S3：正骨水213281；图8为精密度考察的叠加色谱图，其中S1-S6为样品的编号；图9为供试品稳定性考察的叠加色谱图，其中S1-S6为样品的编号，其中，S1：0小时；S2：2小时；S3：4小时；S4：8小时；S5：12小时；S6：24小时；S7：48小时；S8：72小时；图10为方法重现性考察的叠加色谱图，其中S1-S6为样品的编号。具体实施方式本专利技术提供了一种正骨水的指纹图谱构建方法及其指纹图谱，下面结合具体实施例，阐述本专利技术。实施例1正骨水的指纹图谱构建中色谱条件的建立一、仪器和试剂1.仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，配置脱气机G1322B、四元泵G1311B、自动进样器G1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种正骨水指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品的制备：精密取正骨水，以乙醇水溶液稀释并定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的正骨水指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种正骨水指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品的制备：精密取正骨水，以乙醇水溶液稀释并定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的正骨水指纹图谱。2.根据权利要求1所述的正骨水指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，高效液相色谱测定的色谱条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，柱温20℃～35℃，以乙腈为流动相A，0.1％-0.4％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相的流速为0.5-1.5mL/min，检测波长为270nm-290nm。3.根据权利要求2所述的正骨水指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱中，流动相的变化设置如下：0～15min，所述流动相A的体积百分比由5％变化至20％，所述流动相B的体积百分比由95％变化至80％；15～45min，所述流动相A的体积百分比由20％变化至30％，所述流动相B的体积百分比由80％变化至70％；45～75min，所述流动相A的体积百分比由30％变化至50％，所述流动相B的体积百分比由70％变化至50％；75～90min，所述流动相A的体积百分比由50％变化至80％，所述流动相B的体积百分比由50％变化至20％；90～110min，所述流动相A的体积百分比由80％变化至100％，所述流动相B的体积百分比由20％变化至0％。4.根据权利要求1-3任一项所述的正骨水指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：(1)精密取正骨水1ml，置于100ml容量瓶中，加入体积浓度50-75％的乙醇水溶液至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪测定，即得具有共有特征峰的正骨水指纹图谱。5.根据权利要求4所述的正骨水指纹图谱的构建方法，其特征在于，色谱条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，柱温30℃，以乙腈为流动相A，0.1％的甲酸溶液为流动...

【专利技术属性】
技术研发人员：范卫锋，胡琴，何宝，朱荃，郑兆广，段婷婷，邓丽芳，叶志文，李琴，王汝上，高俊飞，黄艳霞，程慧荃，范丽霞，
申请(专利权)人：广西玉林制药集团有限责任公司，广州康臣药物研究有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45