一种双鱼颗粒GC定量指纹图谱的建立方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法，包括：制备供试品溶液：取双鱼颗粒，研细，将双鱼颗粒粉末置于烧瓶中，以水和正己烷为提取溶剂，采用挥发油提取器提取，分取正己烷层，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；分别将至少10批双鱼颗粒供试品溶液注入气相色谱检测，记录色谱图，采用相似度软件对色谱图进行分析，标定出12个共有特征峰，得到双鱼颗粒指纹图谱。本发明专利技术方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；建立的双鱼颗粒挥发性成分指纹图谱及2种成分的含量测定方法为双鱼颗粒的质量控制提供依据；该方法简便可行、快速准确，可以作为评价双鱼颗粒质量的有效方法。

A method for establishing GC quantitative fingerprint of Pisces granules and its application

The invention discloses a method to establish a Pisces particles GC fingerprint includes: preparing the testsolution: Pisces particles porphyrized, Pisces particle powder into the flask, n-hexane and water as extraction solvent, with volatile oil extraction, separation of n-hexane layer, filter and use the successive filtrate that is, the testsolution respectively; at least 10 batches of sample solution into Pisces particles in gas chromatography, record the chromatograms, on the chromatograms were analyzed by similarity calibration software, 12 common characteristic peaks, get Pisces granule fingerprint. The method of the invention has good precision, linearity, stability, repeatability, high recovery rate, good durability; provide the basis for the quality control of the content of volatile components to establish the fingerprint of Pisces particles and the 2 components of the determination method for Pisces particles; the method is simple and feasible, fast and accurate, can be used as an effective method for evaluation of Pisces grain quality.

【技术实现步骤摘要】
一种双鱼颗粒GC定量指纹图谱的建立方法及其应用
本专利技术属于化学分析领域，涉及一种双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法。
技术介绍
双鱼颗粒(SG)处方由鱼腥草、金银花、赤芍、艾叶和薄荷5味药组成，为江苏康缘药业股份有限公司研制的中药复方6类新药，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于外感风热型普通感冒，症见发热头痛、全身酸痛、鼻塞、流涕、咳嗽、咳痰、咽喉发痒、口干而渴、咽喉红肿疼痛、舌红、脉数等症。双鱼颗粒为复方制剂，化学成分复杂，有效成分包括苷类、单萜类、酚酸类、挥发油，并含大量辅料如β-环糊精。目前，双鱼颗粒质量标准中对挥发性成分桉油精、薄荷脑和甲基正壬酮进行了气相鉴别，并对绿原酸和芍药苷进行了HPLC含量测定。鉴于仅对2个成分进行含量控制，故而进行了基于指纹图谱分析和多成分同时定量的双鱼颗粒质量评价研究，该研究主要是采用HPLC对本品中的大中等极性成分进行指纹图谱和含量测定研究。然而对于本品中的挥发性成分仅有鉴别控制，没有含量测定指标和整体性控制。由于双鱼颗粒检测目标成分复杂，且又被辅料β-环糊精包合。以目前的检测方法尚无法对双鱼颗粒中的挥发性有效成分进行有效定量及整体性控制。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种双鱼颗粒GC定量指纹图谱的建立方法，主要对挥发性成分进行指纹图谱研究，对其中的主要活性成分桉油精和薄荷脑进行了含量测定，以达到整体性控制的目的。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：步骤(1)、制备供试品溶液：取双鱼颗粒，研细，将双鱼颗粒粉末置于烧瓶中，以水和正己烷为提取溶剂，采用挥发油提取器提取，自沸腾开始计时60～120分钟，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2～3次，合并正己烷，加正己烷定容至25mL，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:2～5mL；制备对照品溶液：将桉油精、薄荷脑、甲基正壬酮与正己烷混合得到对照品溶液；步骤(2)、分别将对照品溶液与至少10批双鱼颗粒供试品溶液注入气相色谱检测，记录色谱图，对色谱图进行分析，标定出12个共有特征峰，得到双鱼颗粒指纹图谱；其中，气相色谱条件为：AgilentDB-1毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；进样量为1μL；分流比为5:1～50:1；进样口温度为230℃；以氮气为载气，氮气流速0.5～0.7L/min；FID检测器温度为250℃；升温程序为：柱温：78～82℃保持2分钟，再以8℃/min升至112℃，保持4分钟，再以2℃/min升至120℃，保持6分钟；再以20℃/min升至250℃。步骤(1)中，优选的，所述的供试品溶液的制备方法为：取装量差异项下的双鱼颗粒，混匀，研细，取10.0g，精密称定，置于500mL烧瓶中，加入玻璃珠数颗，以水和正己烷为提取溶剂；自沸腾开始计时60～90分钟后，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2次，合并正己烷于25mL量瓶内，加正己烷定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:3mL。进一步优选的，所述的供试品溶液的制备方法为：取装量差异项下的双鱼颗粒，混匀，研细，取10.0g，精密称定，置于500mL烧瓶中，加入玻璃珠数颗，以水和正己烷为提取溶剂；自沸腾开始计时90分钟后，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2次，合并正己烷于25mL量瓶内，加正己烷定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:3mL。本专利技术所述的水为去离子水。本专利技术采用0.22μm微孔滤膜过滤。步骤(2)中，优选的，所述的气相色谱条件为：AgilentDB-1毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；进样量为1μL；分流比为25:1；进样口温度为230℃；以氮气为载气，氮气流速0.6L/min；FID检测器温度为250℃；升温程序为：柱温：80℃保持2分钟，再以8℃/min升至112℃，保持4分钟，再以2℃/min升至120℃，保持6分钟；再以20℃/min升至250℃。本专利技术采用国家药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012年版对色谱图进行分析，标定出12个共有特征峰。所述的双鱼颗粒指纹图谱的特征峰以桉油精为参照峰，各特征峰及其相对保留时间如下：一种基于本专利技术所述的双鱼颗粒指纹图谱进行双鱼颗粒GC定量分析的方法，包括以下步骤：步骤(1)、制备供试品溶液：取双鱼颗粒，研细，将双鱼颗粒粉末置于烧瓶中，以水和正己烷为提取溶剂，采用挥发油提取器提取，自沸腾开始计时60～120分钟，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2～3次，合并正己烷，加正己烷定容至25mL，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:2～5mL；制备对照品溶液：取桉油精对照品、薄荷脑对照品，加正己烷制成桉油精浓度为16.32～326.37μg/mL、薄荷脑浓度为16.32～326.37μg/mL的对照品溶液；步骤(2)、分别将供试品溶液、对照品溶液注入气相色谱检测，记录色谱图，以本专利技术获得的双鱼颗粒指纹图谱为参照，由相似度软件计算双鱼颗粒供试品相似度；并用外标一点法分别计算双鱼颗粒中桉油精、薄荷脑的含量；其中，气相色谱条件为：AgilentDB-1毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；进样量为1μL；分流比为5:1～50:1；进样口温度为230℃；以氮气为载气，氮气流速0.5～0.7L/min；FID检测器温度为250℃；升温程序为：柱温：78～82℃保持2分钟，再以8℃/min升至112℃，保持4分钟，再以2℃/min升至120℃，保持6分钟；再以20℃/min升至250℃。本专利技术的有效果：本专利技术方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；双鱼颗粒挥发性指纹图谱的分离度、重现性均较好，信息全面，标示出12个特征峰，对其中3个成分进行定性，各批次样品相似度在0.90以上。本专利技术建立的双鱼颗粒挥发性成分指纹图谱及2种成分的含量测定方法为双鱼颗粒的质量控制提供依据；该方法简便可行、快速准确，可以作为评价双鱼颗粒质量的有效方法。附图说明图1为采用升温程序Ⅰ的气相色谱图；图2为采用升温程序Ⅱ的气相色谱图；图3为采用升温程序Ⅲ的气相色谱图；图4为双鱼颗粒水蒸气蒸馏法气相色谱图；图5为双鱼颗粒二氯甲烷-水回流提取法气相色谱图；图6为双鱼颗粒乙醇超声提取法气相色谱图；图7为混合对照品溶液的气相色谱图；图8为双鱼颗粒的供试品溶液的气相色谱图；图9为缺薄荷阴性供试品的气相色谱图；图10为缺艾叶阴性供试品的气相色谱图；图11为缺薄荷和艾叶阴性供试品的气相色谱图；图12为双鱼颗粒对照指纹图谱；图13为双鱼颗粒指纹图谱相关性图，从上往下依次为赤芍、金银花、鱼腥草、薄荷、艾叶、混标(对照品溶液中桉油精81.59μg/mL、薄荷脑208.44μg/mL)、双鱼颗粒样品。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术的技术方案作进一步说明。1仪器与试药Agilent7890A气本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：步骤(1)、制备供试品溶液：取双鱼颗粒，研细，将双鱼颗粒粉末置于烧瓶中，以水和正己烷为提取溶剂，采用挥发油提取器提取，自沸腾开始计时60～120分钟，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2～3次，合并正己烷，加正己烷定容至25mL，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:2～5mL；步骤(2)、分别将至少10批双鱼颗粒供试品溶液注入气相色谱检测，记录色谱图，采用相似度软件对色谱图进行分析，标定出12个共有特征峰，得到双鱼颗粒指纹图谱；其中，气相色谱条件为：Agilent DB‑1毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；进样量为1μL；分流比为5:1～50:1；进样口温度为230℃；以氮气为载气，氮气流速0.5～0.7L/min；FID检测器温度为250℃；升温程序为：柱温：78～82℃保持2分钟，再以8℃/min升至112℃，保持4分钟，再以2℃/min升至120℃，保持6分钟；再以20℃/min升至250℃。

【技术特征摘要】
1.一种双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：步骤(1)、制备供试品溶液：取双鱼颗粒，研细，将双鱼颗粒粉末置于烧瓶中，以水和正己烷为提取溶剂，采用挥发油提取器提取，自沸腾开始计时60～120分钟，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2～3次，合并正己烷，加正己烷定容至25mL，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:2～5mL；步骤(2)、分别将至少10批双鱼颗粒供试品溶液注入气相色谱检测，记录色谱图，采用相似度软件对色谱图进行分析，标定出12个共有特征峰，得到双鱼颗粒指纹图谱；其中，气相色谱条件为：AgilentDB-1毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；进样量为1μL；分流比为5:1～50:1；进样口温度为230℃；以氮气为载气，氮气流速0.5～0.7L/min；FID检测器温度为250℃；升温程序为：柱温：78～82℃保持2分钟，再以8℃/min升至112℃，保持4分钟，再以2℃/min升至120℃，保持6分钟；再以20℃/min升至250℃。2.根据权利要求1所述的双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法，其特征在于所述的供试品溶液的制备方法为：取装量差异项下的双鱼颗粒，混匀，研细，取10.0g，精密称定，置于500mL烧瓶中，加入玻璃珠数颗，以水和正己烷为提取溶剂；自沸腾开始计时60～90分钟后，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2次，合并正己烷于25mL量瓶内，加正己烷定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:3mL。3.根据权利要求2所述的双鱼颗粒GC指纹图谱的建立方法，其特征在于所述的供试品溶液的制备方法为：取装量差异项下的双鱼颗粒，混匀，研细，取10.0g，精密称定，置于500mL烧瓶中，加入玻璃珠数颗，以水和正己烷为提取溶剂；自沸腾开始计时90分钟后，冷却，分取正己烷层，用正己烷涮洗挥发油提取器2次，合并正己烷于25mL量瓶内，加正己烷定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；其中，所述的双鱼颗粒粉末、水和正己烷的用量比为10g:250mL:3mL。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧伟，林夏，崔培超，秦建平，胡军华，黄文哲，胡晗绯，王振中，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32