一种通络化痰胶囊指纹图谱的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种通络化痰胶囊指纹图谱的测定方法，所述方法，步骤如下：(1)供试品溶液的制备：取通络化痰胶囊内容物，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品。

A method for the determination of fingerprint of Tongluo Huatan capsule

【技术实现步骤摘要】
一种通络化痰胶囊指纹图谱的测定方法
本专利技术涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂通络化痰胶囊指纹图谱的测定方法。
技术介绍
脑血管病是当今世界危害人类健康的三大疾病之一，是中老年人的多发病，死亡率很高，在我国脑血管病占死因的第二位。国内报道脑出血死亡率为38-43％，幸存者约有50％-70％患者留有严重的后遗症，生活不能自理，不仅病人遭受极大痛苦，也给家庭和社会造成负担。中药治疗脑血管病有其优势，如已经上市的中药通络化痰胶囊，其配方和工艺描述在中国专利02153515.9，“治疗缺血性中风的药物组合物”中，该专利描述了一种由中药熊胆粉、天麻、三七、丹参、天竺黄、大黄等制成中药制剂，经过实验发现，该制剂具有化浊毒，通血脉，祛痰湿，熄肝风的作用，主要用于缺血性中风急性期和恢复期治疗。自通络化痰胶囊上市以来，因其治疗效果好，见效快，受到了广大患者的好评。通络化痰胶囊作为一种中药复方制剂，处方药材较多(由6味药材组成)，成分非常复杂多样。现有的通络化痰胶囊质量控制方法如专利“通络化痰胶囊的质量检测方法”(CN201510790216.7)中采用薄层法建立了天麻、大黄、丹参、三七的鉴别，以及对牛磺熊去氧胆酸的含量测定。但通络化痰胶囊作为复方制剂，单纯通过检测一种指标成分定量来控制其药品质量显然是不全面的，也不能体现中药复方制剂的整体性特征。因此，开发建立一种简便易行，准确性高，重复性良好且能尽可能多地反映复方制剂所含多成分的指纹图谱检测方法对于通络化痰胶囊的质量控制和评价非常必要。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种通络化痰胶囊指纹图谱构建方法。本专利技术通过对通络化痰胶囊指纹图谱的研究，提供了一种操作简便、稳定、精密度高和重现性好，可用于通络化痰胶囊的质量检测和评价的方法，弥补了现有质量控制方法的不足，使通络化痰胶囊的质量控制技术更为完善、科学。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：(1)供试品溶液的制备：取通络化痰胶囊内容物，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品。优选的，本专利技术的测定方法，步骤如下：1)取待检测通络化痰胶囊内容物0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。2)对照品溶液的制备:分别取牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为245.5、582.3、492.5、302.7、517.4、447.1、383.6、298.5、469.1、517.4、483.5μg/mL的混合对照品溶液。3)将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则和标准对照指纹图谱进行比对，如果90％以上拟合，则为合格品。其中，高效液相色谱的色谱条件如下:采用PHENOMENEXLUNAC-18色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：0-20min，流动相A0-5％，流动相B100％-95％；20-25min，流动相A5％-25％,流动相B95％-75％；25-30min，流动相A25％-50％,流动相B75％-50％；30-45min，流动相A50％-55％,流动相B50％-45％；45-50min，流动相A55％-70％,流动相B45％-30％；50-60min，流动相A70％-90％,流动相B30％-10％。流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为:0～20min,220nm；20～30min,280nm；30～39min,254nm；39～52min,203nm；52～60min,270nm。进样量:1μL。其中所述标准对照指纹图谱建立方法如下：1)取多批次检测合格的通络化痰胶囊内容物约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。2)对照品溶液的制备:分别取牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为245.5、582.3、492.5、302.7、517.4、447.1、383.6、298.5、469.1、517.4、483.5μg/mL的混合对照品溶液。3)将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据多批次供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则绘制标准对照指纹图谱，得到标准对照指纹图谱。其中，高效液相色谱的色谱条件如下:采用PHENOMENEXLUNAC-18色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：0-20min，流动相A0-5％，流动相B100％-95％；20-25min，流动相A5％-25％,流动相B95％-75％；25-30min，流动相A25％-50％,流动相B75％-50％；30-45min，流动相A50％-55％,流动相B50％-45％；45-50min，流动相A55％-70％,流动相B45％-30％；50-60min，流动相A70％-90％,流动相B30％-10％。流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为:0～20min,220nm；20～30min,280nm；30～39min,254nm；39～52min,203nm；52～60min,270nm。进样量:1μL。本专利技术所述通络化痰胶囊为一种已经上市的药物，成份：熊胆粉、天麻、三七、丹参、天竺黄、大黄(酒制)，批准文号：国药准字04010Z052，功能主治：化痰熄风，活血通络。用于中风病中经络(脑梗塞)恢复期痰瘀阻络证。症见半身不遂，口舌歪斜，语言蹇涩或不语，偏身麻木，痰多而粘，唇甲色暗，舌苔厚腻，舌质暗，或有瘀点、瘀斑，舌底脉络瘀暗，脉涩或弦滑。生产企业：山东沃华医药科技股份有限公司本专利技术检测方法，是经过筛选获得的，筛选过程如下：1仪器与材料1.1仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通络化痰胶囊指纹图谱的测定方法，所述方法，步骤如下：/n(1)供试品溶液的制备：取通络化痰胶囊内容物，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；/n(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；/n(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；/n(4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品；/n其中，高效液相色谱的色谱条件如下:/n采用PHENOMENEX LUNA C-18色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：/n0-20min，流动相A 0-5％，流动相B 100％-95％；/n20-25min，流动相A5％-25％,流动相B 95％-75％；/n25-30min，流动相A25％-50％,流动相B 75％-50％；/n30-45min，流动相A50％-55％,流动相B 50％-45％；/n45-50min，流动相A55％-70％,流动相B45％-30％；/n50-60min，流动相A70％-90％,流动相B 30％-10％。/n流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为:0～20min,220nm；20～30min,280nm；30～39min,254nm；39～52min,203nm；52～60min,270nm。进样量:1μL。/n...

【技术特征摘要】
1.一种通络化痰胶囊指纹图谱的测定方法，所述方法，步骤如下：
(1)供试品溶液的制备：取通络化痰胶囊内容物，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；
(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；
(4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品；
其中，高效液相色谱的色谱条件如下:
采用PHENOMENEXLUNAC-18色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：
0-20min，流动相A0-5％，流动相B100％-95％；
20-25min，流动相A5％-25％,流动相B95％-75％；
25-30min，流动相A25％-50％,流动相B75％-50％；
30-45min，流动相A50％-55％,流动相B50％-45％；
45-50min，流动相A55％-70％,流动相B45％-30％；
50-60min，流动相A70％-90％,流动相B30％-10％。
流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为:0～20min,220nm；20～30min,280nm；30～39min,254nm；39～52min,203nm；52～60min,270nm。进样量:1μL。


2.根据权利要求1所述的测定方法，步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取待检测通络化痰胶囊内容物0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
2)对照品溶液的制备:分别取牛磺熊去氧胆酸、天麻素、丹参素钠、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、原儿茶醛、人参皂甙Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、大黄素、大黄酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为245.5、582.3、492.5、302.7、517.4、447.1、383....

【专利技术属性】
技术研发人员：王炯，程世娟，周万辉，曾英姿，王冬梅，赵磊，
申请(专利权)人：山东沃华医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37