一种频率可控的GC特异性DNA诱变方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域。具体涉及一种频率可控的ＧＣ特异性ＤＮＡ诱变方法。先用氢氧化钠将待诱变基因变性为单链，再用对苯二酚和亚硫酸氢钠处理，使ＤＮＡ链中的Ｃ脱氨基成为Ｕ；以修饰过的ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增使Ｕ跟Ａ配对，后续扩增中，Ａ继续与Ｔ配对，从而使原始ＤＮＡ链中的ＧＣ向ＡＴ方向转换，获得突变ＤＮＡ分子；将突变的ＤＮＡ分子装载到表达载体，即可构建成ＤＮＡ分子突变文库。随着亚硫酸氢钠处理时间的延长，ＤＮＡ的最终突变频率也逐渐增大，最终可得突变频率达５％左右的ＤＮＡ，从而克服一些常规随机诱变方法中诱变频率过低的问题。本发明专利技术是针对ＤＮＡ分子中的ＧＣ碱基，ＧＣ突变占总突变率的９０％以上，尤其适用于富含ＧＣ基因的诱变。本发明专利技术可用于ＤＮＡ分子体外改良。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基闲工程领域，具体涉及一种人工诱变基因方法，与体外分子进化有关。
技术介绍
体外分子进化技术即在实验室模拟自然进化的过程，人为的引入突变和重组，构建出多样性突变文库， 配合适当的选择压，在短时间内定向选择出所需性质的突变酶。通过该技术，人们可以赋予天然酶不同的特性，使之更适合工农业生产的要求，如高活性、耐高温高压、极端pH等。对目标基因进行诱变，构建突 变体库是该技术关键的一步。目前诱变的方法主要是易错PCR (error-pronePCR)，该方法基于TaqDNA聚 合酶的低保真度或用M^+取代Mg^使酶保真度降低的特性，或使用碱基类似物在PCR过程中导致错配掺入 错误的碱基，这些方法突变频率都局限在一个较低的范围内，且突变频率不易控制，突变谱主要倾向于AT 向GC转换，这就大大限制了酶分子诱变的多样性和随机性，特别想得到在结构上发生较大变化的高活性酶 或具有新功能的酶，往往需要多轮诱变。对于GC含量较高的基因(如来源于高等动植物、霉菌、链霉菌)， 上述方法更是不适用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提出一种频率可控的GC特异性DNA诱变方法，即本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种频率可控的ＧＣ特异性ＤＮＡ诱变方法，其特征在于，包括以下步骤：　用氢氧化钠使纯化的ＤＮＡ变性，加入化学诱变剂对苯二酚和亚硫酸氢纳使其中的Ｃ脱氨基变成Ｕ，再通过ＰＣＲ方法，使Ｕ与Ａ配对，导致ＤＮＡ中的ＧＣ向ＡＴ转换，从而达到诱变效果 。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘子铎，柳鹏福，洪玉枝，林拥军，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]