化合物制造技术

在人体中基本上是非免疫原性的一种结合物，包括能与肿瘤相关抗原结合的导向部分，该导向部分被连接到能将药物前体转变成抗肿瘤药物的突变型羧肽酶Ｂ（ＣＰＢ），其中所述药物前体在人体中不被天然非突变酶明显转变成抗肿瘤药物。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ADEPT系统中与药物前体一起使用的突变体CPB酶。缩写Ac 乙酰基ADEPT抗体定向的酶药物前体治疗BOC叔-丁氧基羰基CPB羧肽酶BDCCI 1，3二环己基碳化二亚胺DMAP 4-二甲胺基吡啶DMFN，N-二甲基-甲酰胺DMSO二甲亚砜Et 乙基EDCI 1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺HCPB 人CPBHOBT 1-羟苯并三唑PCR多聚酶链反应TFA三氟乙酸THF四氢呋喃药物选择性杀伤病人体内的癌细胞的导向一直是医学研究的一个问题。ADEPT是克服这个难题的一个方法。ADEPT使用肿瘤选择性试剂如与酶结合的抗体。给病人施用该结合物(通常静脉施用)使之集中在肿瘤部位并通过全身循环清除出去。结果，给病人施用的药物前体被酶(集中在肿瘤部位)转变成细胞毒性的药物，后者杀伤肿瘤细胞。由于酶的一个分子可催化产生许多细胞毒药物分子而产生放大作用。而且，不显示被抗体识别的抗原的肿瘤细胞(肿瘤通常表现微不均一性)也被酶促放大产生的细胞毒药物杀灭。一种已知的系统使用原核生物酶羧肽酶G2(CPG2)作为酶成分(见WO88/07387)。用已知系统的问题是反复施用这种结合物导致宿主免疫反应而使该治疗效果减小。该抗体成分一般是小鼠单克隆抗体，用已知技术可使其人源化而减轻免疫原性。然而，酶成分的免疫原性的减轻已证实问题更多。这是因为酶成分必须是天然条件下人宿主循环中不存在的，否则将发生药物前体过早转化成为细胞毒药物并会观察到对肿瘤的减小的选择毒性。这些问题已由国际专利申请WO95/13095部分的提了出来(Wellcome Foundation)。这个申请提出了使用突变型哺乳动物酶以激活不被相应天然酶激活的药物前体的ADEPT。然而在这项公开中仅使用羧肽酶A的ADEPT系统是可行的。按照本专利技术的一个方面，其中提供的一种结合物在人体中基本上是非免疫原性的包括能与肿瘤相关抗原结合的导向部分(例如抗体)，该导向部分与突变型羧肽酶B(CPB)相连，后者能将药物前体转变成抗肿瘤药物，其中所述药物前体在人体中不被天然的非突变酶有效转变成抗肿瘤药物。优选所述导向部分是抗体。优选所述抗体是F(ab′)2抗体片段。优选所述酶突变包括在其活性部位中的极性改变以至它可转变具有互补极性的药物前体。优选所述酶是胰腺人CPB突变体的任何一种胰腺人CPB具有的253位氨基酸Asp被Arg，Asn，Gln，或Lys中的任何一种取代，非强制性地与任何一种或多种的氨基酸取代相组合，所述氨基酸取代选自天然氨基酸Gln54被Arg，Lys，或Asn的任何一种取代；天然氨基酸Asp145被Val，Leu，Ile或Ala的任何一种取代；天然氨基酸Ile201被Ser或Thr的任何一种取代；天然氨基酸Ser205被Asn，Gln，His，Lys或Arg的任何一种取代；天然氨基酸Ile245被Ser，Thr，Ala，Val，Leu，Asn，Gln，Lys，Arg或His的任何一种取代；天然氨基酸Ala248被Asn，Gln，Lys，Arg，His，Ser或Thr的任何一种取代；天然氨基酸Gly251被Thr，Asn，Ser，Gln，His，Lys，Arg，Val，Ile，Leu，Met，Phe，Ala或正亮氨酸的任何一种取代；天然氨基酸Cys288被Ser，Thr，Ala，Val，Leu或Ile的任何一种取代；更优选时，所述酶是下列胰腺人CPB突变体的任何一种胰腺人CPB中天然氨基酸Asp253被Arg或Lys的任何一种取代和天然氨基酸Gly251被Thr，Asn，Ser，Gln，Lys或Val的任何一种取代，非强制性地与任何一种或多种氨基酸取代相组合，所述氨基酸取代选自天然氨基酸Gln54被Arg取代；天然氨基酸Asp145被Ala取天然氨基酸Ile201被Ser取代；天然氨基酸Ser205被Asn取代；天然氨基酸Ile245被Ser，Ala或His的任何一种取代；天然氨基酸Ala248被His，Ser或Asn的任何一种取代；和天然氨基酸Cys288被Ser或Ala的任何一种取代；更优选时，所述酶是下列胰腺人CPB突变体的任何一种胰腺人CPB的天然氨基酸Asp253被Arg或Lys的任何一种和天然氨基酸Gly251被Thr，Asn或Ser的任何一种取代，非强制性地与任何一种或多种的氨基酸取代相组合，所述氨基酸取代选自天然氨基酸Gln54被Arg取代；天然氨基酸Asp145被Ala取代；天然氨基酸Ile201被Ser取代；天然氨基酸Ser205被Asn取代；天然氨基酸Ile245被Ala取代；天然氨基酸Ala248被Ser或Asn的任何一种取代；和天然氨基酸Cys288被Ser取代；特别是，所述酶是下列胰腺人CPB突变体的任何一种D253K；D253R；；；；；；；或。按照本专利技术的另一方面，其中提供设计用于一个宿主的一套匹配的双组分系统，其中所述组分包括(i)第一组分是能与肿瘤相关抗原结合的导向部分，该导向部分连接到能将药物前体转变成抗肿瘤药物的CPB酶上，和；(ii)第二组分是药物前体，它在所述酶的影响下可转变成抗肿瘤药物。其中所述酶是CPB酶的一种突变型式；第一组分在宿主中基本上是非免疫原的并且；药物前体在宿主中不被天然非突变的宿主酶明显可转变成抗肿瘤药物。术语“药物前体在宿主中不可被天然非突变的宿主酶明显可转变成抗肿瘤药物”意指所述药物前体在给宿主施用时不产生不适当的非导向毒性问题。术语“基本上非免疫原的”意指可将第一组分(结合物)施用于宿主一次以上而不引起明显的宿主免疫反应例如像在人体中使用连接细菌酶的小鼠抗体所见到的。所述突变酶优选基于与期望使用该系统的宿主相同物种的酶，但突变酶可以基于来自不同物种的宿主酶，只要酶的结构在物种间是足够保守的以至不产生不适当的免疫原性问题。所述导向部分优选是抗体，特别是抗体片段例如F(ab′)2。结合物合成所用的酶的连接键可通过已知方法实现如使用异双功能试剂作为交联剂或通过基因融合或任何其他适当方法。抗体可来自同宿主(例如在小鼠中使用小鼠抗体)或该抗体可经处理以至其在所选择的宿主中(例如在人体中使用嵌合的，CDR移植的或修饰的小鼠抗体)不被明显的识别为外来物。第一组分优选是如上述定义的结合物。在猴和病人的临床前研究中均已显示将啮齿类抗体可变功能区移植到人抗体恒定功能区(嵌合抗体)或将啮齿类抗体的抗原结合环(CDRs)组建到人抗体中(CDR移植)会大大降低啮齿类抗体的免疫原性。甚至CDR移植抗体将来自啮齿类抗体的大量(＞50％)氨基酸序列结合到人框架中。尽管如此，已报道在猴和人中免疫原性大大降低。这提供出证据，即改变宿主酶的催化部位的十分有限数目的氨基酸有可能导致具有最小免疫原性的酶并且肯定其免疫原性比非宿主酶要低。读者从下列参考中得到指导A.Mountain and J.R.Adair，生物技术与遗传工程综述，10，1-142，1992；G.Winter and W.J.Harris，药理学动向，14，139-143，1993；I.I.Singer et al.，J.Immunol，150，2844-57，1993；J.Hakimi et al.，免疫学杂志，147，11352-5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：D·C·布拉克，D·H·达维斯，R·I·多维尔，J·F·亨纳，P·R·马沙姆，A·M·斯拉特尔，L·F·A·亨内奎，
申请(专利权)人：曾尼卡有限公司，
类型：发明
国别省市：