一种包含序列５′ＴＴＴ ＡＴＣ ＴＴＣ ＴＴＣ ＣＡＡ Ｇ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）的寡核苷酸。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤治疗领域，更具体地讲，涉及应用反义寡核苷酸控制CD44的表达。
技术介绍
CD44是一族由许多种不同细胞表达的多形性膜糖蛋白。能够找到CD44的细胞有许多，如循环淋巴细胞，它作为一种淋巴结归巢受体，上皮细胞，它参与细胞和细胞间的相互粘附(1)。在肺、上支气管基底细胞、肺泡巨噬细胞、肺泡淋巴细胞和活化的肺泡II型细胞上也可以找到CD44，在这些细胞上它同样参与细胞和细胞间的相互粘附(2)。CD44有一个高亲合力结合部位作为透明质酸盐(hyaluronan)的受体，CD44与透明质酸盐的相互作用可使细胞锚定在某个部位(3)。CD44在单个细胞中可表达为两种或两种以上的变异体，可能因为细胞的需求不断变化。这些变异体的多形性变化源自对CD44 mRNA的可变剪接，即CD44基因的各种编码序列(外显子)以不同的组合被转录(被表达)。CD44剪接变异体的蛋白产物(同种型)在大小(从110KDa到大于250KDa)和功能上差别很大。已知CD44蛋白的胞外功能区参与细胞和细胞间的相互粘附以及与胞外基质成分包括透明质酸、纤连蛋白和胶原蛋白等相结合，而CD44的胞内功能区与在依赖CD44的细胞迁移中起重要作用的细胞锚定骨架蛋白相结合。CD44还被发现在造血和淋巴细胞进入外周循环中起一定作用(4，5，6)。CD44的各种功能引起了人们极大的兴趣，因为它们可以用来解释活化的淋巴细胞和转移性肿瘤细胞所具有的相似的行为。这两种细胞都有相对较高水平的CD44的表达，而且都有浸润性行为，能进行细胞迁移，其中包括可逆性粘附，能在淋巴组织中集结和扩散，以及能释放入外周循环(6)。CD44与淋巴组织的关系尤其有趣，因为淋巴细胞和转移性肿瘤细胞都是通过CD44的变异体与特异性配体相结合，而这种配体要么存在于淋巴结的胞外基质上，要么存在于淋巴组织中的树突状细胞或其它细胞的表面。并且，随着淋巴细胞和肿瘤细胞在淋巴结中的生长和分化，它们都同步释放入外周循环的输出淋巴管。释放时在淋巴细胞和肿瘤细胞之间，胞外基质成分和周围细胞之间发生一系列复杂的相互作用，可能还需要粘附受体、蛋白水解酶、生长因子和生长因子受体的参与。这些过程可能依赖对CD44分子进行修剪，释放过程的特异性是由与CD44同种型相互作用的组织特异性配体介导的。因此，CD44在恶性细胞中的表达是使肿瘤能够原位生长、局部浸润和有转移倾向的一个重要因素(7，8，9)。人基因组CD44基因座位于染色体11p13(10)。最近，人CD44基因的大部分基因组结构已经搞清(11)。在大约60千碱基(Kb)的长度上，分布着至少20个外显子。这些编码序列中有十个(外显子1-5和16-20)是用于编码标准型CD44的。在外显子5和16之间，至少又有十个外显子，它们常用来进行可变剪接(外显子6-15)。在人类，如同在其它物种，CD44基因也编码许多可变剪接的蛋白，它们有不同的大小和功能。到目前为止，已有数种CD44同种型被纯化和鉴定，其中有一种80-90KDa的糖蛋白，称其为“标准型”或“造血型”同种型(CD44 S)；另一种180KDa或分子量更大的糖蛋白，称其为“上皮型”或“变异型”同种型(CD44v)。对编码标准型和上皮型同种型的cDNA克隆进行分离和鉴定表明除了上皮型有额外的134个或更多个氨基酸以外，蛋白质序列是一致的，而这些氨基酸是由至少十个编码胞外功能区的外显子(V1-V10)编码的；此外，上皮型同种型的糖基化程度更高(12，27)。虽然现在已经公认CD44标准型在控制细胞迁移上扮演着关键的角色，但还不知道在大多数细胞类型中占优势的CD44可变剪接变异体的确切功能。文献对CD44的表达，无论是以标准的还是以变异的形式，是否与人类肿瘤转移力相关这个问题尚无定论。譬如，一篇1993年的文献指出这种相关从未存在(13)。另一方面，人们已经知道表达CD44变异型同种型水平最高的细胞似乎最易发生恶性转化。这些细胞生长失控，伴随着CD44的表达以及可能有的其它粘附分子的表达可能使它们更具浸润性和转移性。还有，大量的研究已经发现了恶性转化或肿瘤转移与CD44变异型同种型表达之间的相关。例如，一篇1994年的文献提供证据表明某些CD44变异体可能帮助介导了人神经胶质瘤细胞的粘附和转移(14，15)。也有发现揭示子宫颈癌强烈表达由外显子V7和V8编码的表位，而这些表位在正常宫颈上皮细胞上检测不到(16)。在另一项研究中，在结肠肿瘤进展的特殊阶段有特异的CD44变异体的过度表达，且表达以前认为与肿瘤转移相关的CD44v的结肠肿瘤预后不佳(17，18)。在某些研究中，只有过度表达一些特殊的变异体才和癌症相关。例如，含外显子V6序列的变异体在某些肿瘤进展的晚期阶段表达，而一些不含外显子V6序列的CD44变异体在肿瘤发生的最早阶段和腺瘤的早期表达。对胃腺癌的检查表明CD44v在所有的被检标本中均有表达，其中肠型腺癌表达含外显子V5和V6的变异体，扩散型腺癌主要表达只含外显子V5的变异体。正常的胃粘膜在胃小凹增生带和粘液上皮上有外显子V5的表达(19)。外显子V11已被确认也有同样的表达方式，即与扩散型癌组织相比它主要分布于分化良好的肠道肿瘤。正常的胃粘膜只有极低水平的外显子V11的表达。在平均14个月的随访中，CD44的表达与肿瘤复发、死亡率升高相关。文献中已有提示CD44的过度表达有长期的临床意义。一组病人，其原位乳腺肿瘤的87％和附属淋巴结转移灶的100％阳性表达外显子V6，整体的低生存率与CD44v表位的表达相关(20，21)。另一组病人有相似的结果，但其关联随时间延长而减小。在一项对神经胶质瘤的研究中，通过应用抑制CD44表达的CD44特异的反义寡核苷酸，两种细胞系的浸润性被高度抑制，五种细胞系的浸润性被完全扼制(15)。据我们所知，CD44的反义治疗从未应用于人的肺癌、黑色素瘤或白血病，也从未确立一种或多种CD44变异体与上述任何肿瘤相关。至于肺癌则问题更糟，因为肺癌至少有两种主要类型小细胞性肺癌(SCLC)和非小细胞性肺癌(NSCLC)。SCLC约占四分之一的病例，它表达神经内分泌的标志物，通常很早就转移到淋巴结、脑、骨、肺和肝；NSCLC占其它肺部肿瘤的大多数，包括腺癌、鳞状细胞癌和大细胞肺癌。NSCLC的特点是有上皮样生长因子及其受体且局部浸润。1994年Penno及其同事报道在非小细胞性肺部肿瘤及肺的鳞状上皮化生中，CD44标准型的转录和翻译水平均很高，而在肺的小细胞性肿瘤和静止的肺泡II型细胞中水平很低(2)。黑素细胞和黑色素瘤细胞已被广泛地作为一种模型用来研究恶性转化过程中发生的变化，包括寻找在恶变细胞中表达而在正常的黑素细胞中不表达的基因。黑色素瘤细胞不象黑素细胞，它能够在缺少外源性生长因子的情况下增殖。这种不依赖性显然反映细胞产生生长因子和细胞因子作为自分泌性生长刺激因素(22)。黑色素瘤细胞分泌许多生长因子，包括TGF-α、TGF-β、血小板衍生生长因子的A链和B链、碱性成纤维细胞生长因子、IL-6、IL-1、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子以及MGSA。这些生长因子，或者组成型表达，或者在各种细胞因子的诱导下表达，通过作为自分泌性生长因子或通过调节宿主对肿瘤细胞的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：Z·皮特茨科，C·达里乌茨，S·卢迪及克，
申请(专利权)人：ICN药品公司，
类型：发明
国别省市：
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