新型复合物形成蛋白质制造技术

本发明专利技术涉及由非天然存在的特异复合物形成蛋白质组成的复合物，其含有下列成分：ａ）至少一种对于靶结构特异的配体；ｂ）至少一种含有突变的二聚化结构域的蛋白质，该突变的二聚化结构域来源于天然存在的二聚化结构域的突变，该突变的二聚化结构域能与成分ｃ）特异相互作用，且成分ｂ）与成分ａ）共价结合；ｃ）至少一种含有突变的二聚化结构域的蛋白质，该突变二聚化结构域来源于天然存在的二聚化结构域的突变，该突变的二聚化结构域能与成分ｂ）特异相互作用，且成分ｃ）与成分ｄ）共价结合，和；ｄ）至少一种效应物。本发明专利技术也涉及这些复合物的用途和产生，以及编码这些蛋白质的核酸构建体及其用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
1.引言蛋白质间的复合物在自然界分布广泛。基本上，这些蛋白质能分配于下列类别—抗体，其利用抗原结合位点能特异结合抗原的相应表位(也可以是另一种抗体)—蛋白质复合物，例如在凝血系统或补体系统的活化中存在的—不同类型的配体受体相互作用，例如☆抗原或其表位与T细胞或B细胞受体☆生长因子、细胞因子、趋化因子、肽类激素、类固醇激素和介质与其相应受体☆酶如uPA或tPA与其受体☆病毒蛋白与其相应的细胞受体—粘附分子之间的粘附—信号传送、细胞型控制和基因转录控制中的蛋白质复合物文献中总结了大量这种例子，如Hardie等人，《蛋白激酶手册I和II》，学院出版社，1995，Callard等人，《细胞因子手册》，学院出版社，1994，Pigott等人，《粘附分子手册》，学院出版社，1994，Barclay等人，《白细胞抗原手册》，学院出版社，1994，Watson等人，《G蛋白连接的受体手册》，学院出版社，1994，Hesketh，《癌基因手册》，学院出版社，1995，Leid等人，细胞68，377(1992)，Murre等人，细胞58，537(1989)，Bbeneza等人，细胞61，49(1990)，Brugge，现代微生物学与免疫生物学主题(Curr.Top.Microbiol.Immunolbiol.)123，1(1981)，Callebaut等人，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)89，6270(1992)，Nadeau等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)268，1479(1993)，Burbach等人，美国国家科学院院报89，8185(1992)，Hoffman等人，科学252，954(1991)，《应激诱导的蛋白质》，M.L.Pardue，J.R.Feramisco和S.Lindquist编，A.R.Liss，纽约(1989)，《真核转录因子》，D.S.Lachman，学院出版社(1991)，《转录调节》，S.McKnight和K.R.Yamamoto编，CSHL出版社，冷泉港，纽约(1992)。在某些情况下，至少两种蛋白质之间自然确定的大量特异化合物在疾病诊断中用于蛋白质的分析或检测(见EP 0 491 362 B1)，这些蛋白质的结合配偶体用于疾病的预防或治疗。如果特定蛋白质复合物的一个配偶体可获得，则借助于该配偶体，第二种或其他成分如补体或凝血因子、抗原、受体或信号蛋白可以确定。而且，特异蛋白质复合物可在寻找抑制剂的小分子激活剂中使用。另外，为了疾病的预防或治疗，可对患者或动物施用受体的纯化的抗体或配体如细胞因子和肽类激素。对于形成蛋白质复合物的蛋白质的这些不同应用可能性，各种蛋白质参与复合物形成及各蛋白质在生物中分布的特异性是极其重要的。特异性越低，配偶体与外源蛋白质的非特异性结合发生得越频繁。例如，如所知的，非特异的，即不希望的含外源蛋白质配偶体的复合物的形成是使用抗体分析和诊断的主要问题。不希望的含外源蛋白质配偶体的复合物的形成可能也是体内副作用的原因，例如在注射抗体后。另外，两种蛋白质之间的特异结合是复合转录因子，特别是合成转录因子复合物的产生和特异功能的必要条件，如专利申请EP-A 0 805 209所述。因此十分需要不与外源配偶体反应的、新型的、高度特异的复合物形成蛋白质。2.专利技术简述本专利技术涉及由非天然存在的特异复合物形成蛋白质形成的复合物，其中在该复合物中含有下列成分a)至少一种对于靶结构特异的配体b)至少一种含有突变的二聚化结构域的蛋白质，该突变二聚化结构域来源于天然存在的二聚化结构域的突变，该突变二聚化结构域能与成分c)特异相互作用，且成分b)与成分a)共价键合，c)至少一种含有突变的二聚化结构域的蛋白质，该突变二聚化结构域来源于天然存在的二聚化结构域的突变，该突变二聚化结构域能与成分b)特异相互作用，且成分c)与成分d)共价键合，d)至少一种效应物。根据本专利技术，成分b)和c)的特征在于相同或不同类型氨基酸的天然存在的肽或蛋白质被替换或插入，使得这样突变的肽或蛋白质实际只能彼此复合。但是，这样突变的肽或蛋白质与相应的未突变野生型蛋白质或肽不发生复合。这样能形成突变单体的同型二聚体或异源二聚体(突变的肽或蛋白质)。相同或不同蛋白质的结合域中的突变可抑制在未突变状态下能复合的一对相同或不蛋白质或肽的未突变单体与突变单体之间形成复合物的能力。同时，突变给予这一对突变蛋白质彼此高特异性结合的能力。于是突变成对发生，其中一个突变发生于成分b)中，另一个在成分c)中发生，即，这一对的各氨基酸之间的分子相互作用是可能的。插入天然存在的肽或蛋白质之间的根据本专利技术的氨基酸可以是，例如(成对列出旨在表明二聚蛋白质复合物中的分子相互作用)成分b)或c) 成分c)或b)3-18半胱氨酸3-18半胱氨酸3-24碱性氨基酸，如 3-24酸性氨基酸，如组氨酸 天冬酰胺精氨酸 天冬氨酸赖氨酸 谷氨酰胺谷氨酸3-24疏水性氨基酸，如3-24芳族氨基酸甲硫氨酸苯丙氨酸异亮氨酸酪氨酸亮氨酸 色氨酸缬氨酸3-24芳族氨基酸 3-24芳族氨基酸成分b)和c)的初始蛋白质在此可以相同或不同。根据本专利技术的两种蛋白质的复合物的结合常数至少是KM＝10-7mol l- 1，优选地至少KM＝10-8mol l-1。在本专利技术含义中，例如，下列相同或不同的配偶体(用于产生成分b)或c)并结合异源二聚体)优选地在其各自的结合域中突变，并使用这些或完整的蛋白质成分b)或c) 成分c)或b)FosJun或Jun B或Jun DFRAU-1 Jun或Jun B或Jun DFRAU-2 Jun或Jun B或Jun DFOS-B Jun或Jun B或Jun DOCT-1 Jun或Jun B或Jun DNFKB(p65) IKBRasRAFCD4p56LcKbcl-2 bad或bax细胞周期蛋白A cdk1E2FDPCD40 CD40LMycMaxMycN MaxMycL Maxp105(Rb1) AFF-2，E1Ap107(Rb2) E7、E2F或Mycp130 E7、E2F或MycCBLGagTRPTRPMet MetMyb p67或p160VAV p67或p160APC α或β-连环蛋白APC APCVD受体 h-(视黄醛x-受体)RXRα或βT3受体 HRXRα或βMyoD E12成分b)或c) 成分c)或b)E12 IdE47 IdHHSP90 孕酮受体HHSP90 糖皮质激素受体HHSP90 盐皮质激素受体HHSP90 二噁英(dioxin)受体二噁英受体 ArntHPS90FKBP59HSP90环孢素结合蛋白HPS90Pp60V-srcHSP70HSF1热激因子1HSP70HSF2热激因子2这些蛋白质对是优选的，其天然具有螺旋-环-螺旋/亮氨酸拉链结合序列。本专利技术还涉及这些根据本专利技术的复合物形成蛋白质的极其不同的应用，例如—作为多价蛋白质复合物用于预防和治疗—作为多价配体用于基因治疗的载体—作为合成转录因子用于基因表达的控制—作为诊断或分析系统在本说明书中，根据所选择的应用类型选择成分a)和本文档来自技高网...

【技术保护点】
非天然存在的特异复合物形成蛋白质的复合物，其中在该复合物中含有下列成分：ａ）至少一种对于靶结构特异的配体，ｂ）至少一种含有突变的二聚化结构域的蛋白质，该突变的二聚化结构域来源于天然存在的二聚化结构域的突变，该突变的二聚化结构域能与成 分ｃ）特异性地相互作用，且成分ｂ）与成分ａ）共价键合，ｃ）至少一种含有突变的二聚化结构域的蛋白质，该突变的二聚化结构域来源于天然存在的二聚化结构域的突变，该突变的二聚化结构域能与成分ｂ）特异性地相互作用，且成分ｃ）与成分ｄ）共价键合，和 ｄ）至少一种效应物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：V杰罗姆，HH赛德拉克，R穆勒，
申请(专利权)人：阿文蒂斯药物德国有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]