一种人神经干细胞培养基及应用制造技术

本发明专利技术公开一种人神经干细胞培养基，所述培养基包括以下组分：基础培养基、营养添加剂、生长因子和信号通路调控小分子。本发明专利技术还公开了上述培养基在培养人神经干细胞的应用。本发明专利技术培养基配方简单，成本低廉，化学成分明确，不含动物源性成分，不含蛋白提取物和水解物，批次之间均一稳定，没有潜在引入动物源性和人源性病原微生物的风险，更加安全，可以应用在临床研究和临床实验人神经干细胞的培养中；另外，本发明专利技术首次将信号通路调控小分子应用到了人神经干细胞的培养中，在信号通路调控小分子的作用下，可以长期支持各种来源的人神经干细胞的快速增殖和干性的维持，成功解决了人神经干细胞在体外培养易分化和难以长期扩增的技术问题。

A human neural stem cell culture medium and its application

The invention discloses a human neural stem cell culture medium, which comprises the following components: basal medium, nutritional additive, growth factor and signal pathway regulating small molecules. The invention also discloses the application of the culture medium in the culture of human neural stem cells. The culture medium has the advantages of simple formulation, low cost, chemically defined, containing animal derived ingredients, does not contain the protein extract and hydrolysate, stable and uniform between batches, no risk, potentially introducing from human and animal sources of pathogenic microorganisms more safe, can be used in clinical studies and clinical trials of human neural stem cells the culture; in addition, the invention uses the signal transduction pathway of small molecules to human neural stem cell culture, in the signal transduction pathway of small molecules under the action of people can maintain long-term support of the various sources of neural stem cell proliferation and fast dry, successfully resolved the human neural stem cells in vitro develop technical problems easy to long-term differentiation and amplification.

【技术实现步骤摘要】
一种人神经干细胞培养基及应用
本专利技术涉及细胞培养
更具体地，涉及一种人神经干细胞培养基及应用。
技术介绍
各种神经损伤和退行性的神经系统疾病的发病率呈逐年上升趋势，传统的医学方法很难彻底治愈这类疾病，细胞替代性治疗是彻底治愈这类疾病潜在的最有效的手段。神经干细胞具有自我复制能力和分化为神经前体细胞、神经元、星形胶质细胞和少突角质细胞等细胞类型的潜能，是疾病发病机制研究、药物筛选等的重要工具，也是神经退行性和损伤类疾病细胞替代性治疗的理想种子资源细胞。目前，已经有许多途径可以在体外获得神经干细胞，如从脑组织内原代分离培养获得，多能性干细胞诱导分化获得，体细胞转分化获得。神经干细胞培养液一般由基础培养基、营养添加剂和生长因子组成，如专利CN103045538A、专利CN105296429A和专利CN1536073A。基础培养基负责提供细胞生长必须的无机盐、维生素、氨基酸、葡萄糖、有机物等物质，目前培养神经干细胞常用的基础培养基一般是商品化的DMEM/F12medium和Neurobasalmedium。营养添加剂负责提供细胞生长必须的蛋白、激素、微量元素等成分，商售的N2和B本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人神经干细胞培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：基础培养基、营养添加剂、生长因子和信号通路调控小分子。

【技术特征摘要】
1.一种人神经干细胞培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：基础培养基、营养添加剂、生长因子和信号通路调控小分子。2.根据权利要求1所述的人神经干细胞培养基，其特征在于，所述生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子和上皮细胞生长因子，二者的最终使用浓度均为5-100ng/mL，优选的为6-50ng/mL，最优选的为10-30ng/mL。3.根据权利要求1所述的人神经干细胞培养基，其特征在于，所述信号通路调控小分子为Wnt信号通路激活剂、凋亡抑制小分子、p53信号通路抑制剂中的一种或几种组合；优选的，为Wnt信号通路激活剂和p53信号通路抑制剂一种或两种组合。4.根据权利要求1所述的人神经干细胞培养基，其特征在于，所述Wnt信号通路激活剂及最终使用浓度为WNT3a，1-100ng/mL；6-BIO，1-20μM；CHIR-98014，0.1-20μM；TDZD-8，10-100μM；AZD1080，0.1-50μM；CHIR99021，0.1-20μM中的一种或者几种的组合；优选的，为WNT3a，1-100ng/mL或6-BIO，1-20μM；最优选的，为6-BIO，1-20μM。5.根据权利要求1所述的人神经干细胞培养基，其特征在于，所述凋亡抑制小分子及最终使用浓度为BaxinhibitorpeptideV5，0.1-100μM；iMAC2，0.01-100μM；Embelin，0.5-500μM中的一种或几种的组合；优选的，为BaxinhibitorpeptideV5,0.1-100μM和iMAC2，0.01-100μM中的一种或两种的组合；最优选的，为BaxinhibitorpeptideV5,0.1-100μM。6.根据权利要求1所述的人神经干细胞培养基，其特征在于，所述p53信号通路抑制剂及最终使用浓度为Pifithrin-αhydrobromide，0.1-100μM；CyclicPifithrin-αhy...

【专利技术属性】
技术研发人员：王娟，马静，辛文，
申请(专利权)人：北京全式金生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11