表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞及其用途制造技术

本发明专利技术涉及人神经干细胞、包含人神经干细胞的阿尔茨海默病治疗用药剂学组合物及学习能力或记忆能力等认知功能障碍改善用组合物，上述人神经干细胞转化为包含人胆碱乙酰转移酶编码核苷酸序列的载体，来表达胆碱乙酰转移酶。用于表达人胆碱乙酰转移酶的转基因的人神经干细胞在移植到阿尔茨海默病动物模型的脑的情况下，与宿主的脑组织成功结合，分化为正常的神经细胞，并稳定地表达胆碱乙酰转移酶，从而将减少的乙酰胆碱的浓度恢复到正常水准。并且，对认知功能受损的阿尔茨海默病动物模型的认知功能进行改善。因此，本发明专利技术的表达胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞可开发为用于治疗阿尔茨海默病的药剂及用于改善由阿尔茨海默病引起的学习能力或记忆能力等认知功能障碍的药剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞及其用途
本专利技术涉及一种人神经干细胞及其用途，上述人神经干细胞转化为包含人胆碱乙酰转移酶编码核苷酸序列的载体，来表达胆碱乙酰转移酶，更详细地，本专利技术涉及阿尔茨海默病的治疗用药剂学组合物及认知功能障碍改善用组合物，上述组合物包含表达上述人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer Disease, AD)是最有破坏性的神经退行性疾病之一,其特征在于，学习及记忆力损伤等认知功能的缺损。(I)在阿尔茨海默病患者身上观察到作为乙酸胆喊(acetylcholine,ACh)合成酶的胆喊乙酸转移酶(choline acetyl transferase,ChAT)的活性减少，而突触前部的胆碱能系统的功能障碍是认知功能障碍的主要原因之一(2，3，4，5)。到目前为止，基于抑制作为乙酰胆碱分解酶的乙酰胆碱酯酶(acetyl cholineSteraSe，AChE)，来增加乙酰胆碱的浓度而设计的小分子的药物进行阿尔茨海默病治疗(5，6)。但是，对组织损伤没有强有力的保护效果的药物治疗只不过是暂时的症状改善效果，因此，对阿尔茨海默病患者而言，需要既有效，又实质性的治疗，并且，基于针对阿尔茨海默病进行靶向治疗的干细胞的治疗方法能够符合于上述的要求。对于多种神经障碍而言，为了治疗帕金森病(Parkinson disease, PD)、亨廷顿病(Huntington disease)、肌萎缩(amyotrophic lateral sclerosis, ALS)、脑卒中(stroke)及脊椎损伤(spinal cordinjury)等疾病，基于干细胞的治疗研 究正在开始(7-9)。与通过药物来暂时提高身体功能的情况相比，干细胞能够抑制或者延迟宿主细胞的凋亡，并能够使损伤的组织恢复(7-10)。本专利技术人确认了通过移植用于表达对多种功能基因，尤其对成长因子进行编码的基因的人神经干细胞(NSCs)，来保护宿主细胞，并使患有脑卒中、帕金森病、肌萎缩及脊椎损伤的动物模型恢复身体功能(11-14)。永生化的人神经干细胞在体外(ex vivo)，被认定为对基因操作及向中枢神经系统内的基因传递非常有效的细胞源。转基因的神经干细胞移植到正常或者损伤的脑内之后会生存，并与宿主组织成为一体化，并分化为神经元及胶质细胞(9)。本说明书全文参照多篇论文及专利文献，并表示这些引用。所引用的论文及专利文献的公开内容，作为参照全部插入到本说明书，从而更为明确地说明本专利技术所属
的水准及本专利技术的内容。
技术实现思路
专利技术要解决的技术课题本专利技术人员努力研究一种细胞治疗技术的开发，该技术利用干细胞移植方法，能够使患有阿尔茨海默病时显现的乙酰胆碱的缺乏引起的认知功能，例如学习能力或记忆能力的障碍恢复。首先，确立对人胆碱乙酰转移酶基因进行过度表达的人神经干细胞的转化体，并将此转化体移植到阿尔茨海默病动物模型的脑，移植的细胞进行稳定的分化来分泌乙酰胆碱，由此，以实验方式确认动物模型的认知功能得到改善，来完成本专利技术。因此，本专利技术的目的在于，提供一种表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞。本专利技术的再一个目的在于，提供一种包含表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞的阿尔茨海默病的治疗用药剂学组合物。本专利技术的另一个目的在于，提供一种包含表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞的认知功能障碍改善用药剂学组合物。本专利技术的又一个目的在于，提供一种治疗阿尔茨海默病的方法，该方法包括将表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞的药剂学有效量给药到患有阿尔茨海默病的对象(subject)的步骤。本专利技术的还有一个目的在于，提供一种治疗认知功能的障碍的方法，该方法包括将表达人胆碱乙酰转移酶的人神经干细胞的药剂学有效量给药到患有认知功能障碍的对象的步骤。本专利技术的其他目的在于，提供一种药剂学组合物，该药剂学组合物包含人神经干细胞作为有效成分，用于阿尔茨海默病的治疗方法，并且，上述人神经干细胞表达人胆碱乙酰转移酶。本专利技术的其他目的在于，提供一种药剂学组合物，该药剂学组合物包含人神经干细胞作为有效成分，用于认知功能障碍的治疗方法，并且，上述人神经干细胞表达人胆碱乙酰转移酶。本专利技术的目的及优点在
技术实现思路
、权利要求书及附图中进行更为明确的说明。 解决课题的技术方案根据本专利技术的一实施方式，本专利技术涉及一种人神经干细胞，该人神经干细胞转化为包含人胆碱乙酰转移酶编码核苷酸序列的载体，来表达胆碱乙酰转移酶。本专利技术的术语“胆碱乙酰转移酶”是具有将乙酰-Cok与胆碱(choline)相结合来产生作为神经传递物质的乙酰胆碱的功能的酶。这在神经元(neuron)的体(body)内合成，通过轴质流动(axoplasmic flow)向神经末梢移动。对于人而言,胆碱乙酰转移酶通过胆碱乙酸转移酶基因来进行编码(Strauss, W.L., Kemper R.R., Jayakar, P.et al., Genomics9,396-398 (1991))。根据本专利技术的优选实例，上述人胆碱乙酰转移酶包含序列号I的氨基酸序列(GenBank Accession N0.NP_065574)。本专利技术中，人的“神经干细胞”意味着具有继续繁殖的能力，S卩，自我复制能力(self-renew),并意味着能够分化为构成中枢神经系统的神经细胞(neuron或neuronalcel I)、星形胶质细胞(astrocyte)、少突胶质细胞(oligodendrocyte)等细胞的具有多分化能力的未分化细胞。根据本专利技术的优选实例,上述神经干细胞是原代培养(primary cultured)神经干细胞或由此进行转基因的永生化(immortalized)神经干细胞。作为本专利技术的转化体的神经干细胞有可能是从人组织中分离及培养的原代培养神经干细胞(primary cultured neural stem cell)。例如,从人胎儿或成人的脑中分离的神经干细胞，从人脐带血液来源的造血干细胞中诱导的神经干细胞，或从人胚芽中诱导的神经干细胞能够用于转化。并且，本专利技术中转基因的永生化神经干细胞也能用于转化。例如，使用向从人胎儿的脑分离的神经干细胞导入包含v-myc肿瘤基因的逆转录病毒载体来确立的永生化人神经干细胞株。人神经干细胞作为干细胞标志物，通过巢蛋白(nestin)的阳性染色来确认。神经干细胞的具体分离方法在美国授权专利5654183中公开，此文献作为参照插入到本说明书中。神经干细胞将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF, basic fibroblastgrowth factor)、表皮生长因子(EGF, epidermal growth factor)或成纤维细胞生长因子(FGF, fibroblast growth factor)以适合的浓度范围，例如5ng/ml 100ng/ml的范围添加到培养基进行培养。本专利技术的人神经干细胞是转化为包含人胆碱乙酰转移酶基因的载体的转基因(genetically modified)细胞。如下述本专利技术的具体一实施例中论证，向本专利技术的人神经干细胞以插入表达载体的形态进行导入的人胆碱乙酰转移酶进行稳定性表达，在向阿尔茨海默病动物模型的脑移植的情况下，在移植的脑组织中进行稳定性结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金允培，金承业，
申请(专利权)人：忠北大学校产学协力团，
类型：
国别省市：