磷酸激酶及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新的磷酸激酶－ＲＸ２１８蛋白，编码ＲＸ２１８蛋白的多核苷酸和经重组技术产生这种ＲＸ２１８蛋白的方法。ＲＸ２１８蛋白可与Ｐ１６相互作用，因而可作为药物靶点筛选新药。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及新的具有抗肿瘤功能的磷酸激酶-RX218蛋白以及编码RX218蛋白的多核苷酸。本专利技术还涉及此多核苷酸和蛋白质的制法和用途，以及含该RX218蛋白的组合物。
技术介绍
“高质量”的药物靶点基因(简称药靶)是新药开发的源头。人类基因组计划的完成虽然为人类带来了治疗疾病的令人向往的前景，但除大分子蛋白药外，基因本身并不一定是药靶。从基因到新药，这一链条仍然缺少许多必不可少的环节。其中，基因功能研究，因其可以在分子层面上揭示人类健康和疾病的奥秘，寻找出最重要的致病基因，而成为确定基因能否成为药靶的关键步骤。国外大型制药厂已发现，单靠基因序列数据和生物信息分析虽然能够找到大量潜在药物靶点基因，但这类基因只能被归类为“低质量”药靶。药物开发人员面对数目巨大的低质量药靶变得无所适从，迫切需要大量的基因功能研究加以验证，才能筛选出新药开发可以依赖的“高质量”靶点。所以，功能基因组学研究蕴藏着巨大的应用价值和商业前景。在目前可以作为靶点的5,000个基因中，磷酸激酶(kinase)的序列有很大的保守性，是公认的药物筛选基因靶点，与磷酸酶(phosphatase)、蛋白酶(protease)以及各类受体统称为一类靶点。磷酸激酶(kinase)将ATP或GTP位的磷酯基转移到底物蛋白质氨基酸残基上，催化蛋白质磷酸化。蛋白质的磷酸化和去磷酸化是蛋白质调节其功能/活性的一种重要方式。如MAPK和转录因子CREB，Jun等，在磷酸化状态时具有活性，而在非磷酸化状态时没有活性；而转录因子IкBα等则相反，在磷酸化状态时没有活性，而在非磷酸化状态时具有活性。蛋白质的磷酸化-去磷酸化是细胞信号转导过程中的重要环节。细胞信号转导是指细胞通过位于胞膜或胞内的受体，感受细胞外信息分子的刺激，经复杂的细胞内信号转导系统的转换，发挥生物学效应，进而几乎调节着生命活动的所有过程，包括细胞的增殖、发育和分化，神经活动，肌肉收缩，新陈代谢，肿瘤发生等。人类很多疾病都与信号转导通路密切相关，如在肿瘤坏死因子(TNF)导致的炎症(inflammation)反应中，肿瘤坏死因子通过结合受体激活一系列蛋白磷酸激酶之间的相互作用，最终激活NF-кB而引起炎症反应。生物化学家以及不少公司都在通过研究蛋白之间的相互作用来揭示信号传递通路的关键部位，并开发影响信号传递的药物，以达到治疗疾病的目的。信号转导过程的顺利进行有赖于多种蛋白底物的磷酸化，包括酪氨酸磷酸化、苏氨酸残基磷酸化及丝氨酸残基磷酸化，而这个过程正是由磷酸激酶催化完成的。鉴于信号转导通路在细胞增殖、分化和多种疾病发生过程中的重要、甚至决定性的作用，以及磷酸激酶在信号转导通路极其重要的地位，设计和开发以磷酸激酶为靶点的新药，通过调节、控制信号转导通路治疗疾病，无疑是一种针对性强、高效的理想途径，具有治疗多种疾病的潜在前景。目前针对激酶的药物包括PKC活性调节剂、PKA抑制剂、PTK抑制剂和受体介导的钙通道调节剂等，其中部分已经进入临床试验。但现有的激酶药物靶点尚远远不能满足人类战胜疾病、攻克肿瘤的需求，本领域仍需更特异、更有效的新的激酶作为药靶，从而有效拓宽治疗疾病的途径，增进人类的健康。因此，开发新的磷酸激酶成为一种新药开发的迫切需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的磷酸激酶-RX218蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些蛋白质的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些蛋白质的方法以及该蛋白质和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供了一种分离的RX218蛋白，它选自下组具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，或其具有激酶活性的保守性变异蛋白质、活性片段、或活性衍生物。较佳地，该蛋白质选自下组 (a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个(如1-10，较佳地1-8个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有磷酸化功能的由(a)衍生的多肽。更佳地，该蛋白具有SEQ ID NO2氨基酸序列。在本专利技术的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它编码上述的RX218蛋白。较佳地，所述的多核苷酸多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的蛋白质。更佳地，该多核苷酸含有SEQ ID NO1中1-1101位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了一种载体，它含有上述编码RX218蛋白的多核苷酸，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了一种蛋白质的制备方法，该方法包含步骤(a)在表达条件下，培养上述的宿主细胞；(c)从培养物中分离出蛋白质，所述蛋白质含有SEQ ID NO2的氨基酸序列。在本专利技术的第五方面，提供了一种能与上述的RX218蛋白特异性结合的抗体。在本专利技术的第六方面，提供了一种组合物(如药物组合物)，它含有安全有效量(或0.001-99wt％)的上述的RX218蛋白、或其拮抗剂(如抗体)以及药学上可接受的载体。在本专利技术的第七方面，提供了一种RX218蛋白的用途，它被用作P16蛋白的抑制剂。附图说明下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本专利技术范围。图1显示了RX218的PCR产物电泳图。其中各泳道如下泳道1.DNA分子量标准品；泳道2.以人体组织混合RNA为模板，常规RT-PCR扩增产物；泳道3.以人体组织混合RNA为模板，SMART RT-PCR扩增产物；泳道4-8.分别以胎脑、Hela、混合(Hela+胎脑+淋巴)、淋巴、肾cDNA文库为模板的扩增产物。结果表明，除不同来源的RT(包括SMART)产物外，在HELA文库，混合文库(Hela+胎脑+淋巴)，以及肾中有RX218条带。图2显示了RX218蛋白的结构。其中，SEQ ID NO2的第18-41位的氨基酸构成ATP结合位点，第12-272位氨基酸构成其激酶结构域。图3显示了RX218的定量荧光PCR检测结果。其中图A是肺鳞状细胞癌及相应正常肺组织；图B为食管鳞状细胞癌及相应正常食管组织。图4显示了RX218与P16的免疫共沉淀结果。其中，CP表示对照蛋白。在293T细胞进行转染和免疫共沉淀后，可以看见RX218和P16之间存在明显的相互作用。图5显示了RX218的磷酸化活性。Flag-RX218能够自身磷酸化，而Flag-RX218的ATP结合位点突变型(RX218mut)则不能。图6显示了RX218是P16的抑制剂，可影响P16引起的G1期阻滞。在U2OS细胞中转染了P16基因后(B)可以看到明显G1期的阻滞作用(G1期从A45.19％上升至B71.35％)，共转RX218之后这一作用消失(E)。相反，共转P16和RX218m(ATP结合位点突变型)(F)则对P16的G1期的阻滞作用没有明显影响。具体实施例方式本专利技术人经过深入而广泛的研究，首次分离出了新的人磷酸激酶RX218的全长cDNA，其编码含367个氨基酸的RX218蛋白。RX218蛋白含有磷酸激酶的结构域，磷酸化实验证实RX218确是磷酸激酶。酵母双杂交实验和免疫共沉淀实验结果证实了RX218和P16之间确实具有直接的相互作用。在此基础上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的蛋白质，其特征在于，它选自下组：具有ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列的蛋白质，或其具有激酶活性的保守性变异蛋白质、活性片段、或活性衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙筱清，束放，
申请(专利权)人：上海睿星基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]