本发明专利技术提供了一种展示丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的纳米颗粒的制备及应用。具体地，本发明专利技术将HCV 1b型Con1株的截短包膜蛋白sE2(384‑661)基因与幽门螺旋杆菌非血红素铁蛋白基因融合表达，通过铁蛋白单体的自我组装可以将sE2以正确构象展示于纳米颗粒表面，能够将其制备成具有良好抗原性和安全性的HCV纳米颗粒疫苗，而且融合蛋白的免疫原性显著提高。
Preparation and application of a nano particle showing the envelope protein E2 of hepatitis C virus
The invention provides a preparation and application of nano particles that display the envelope protein E2 of hepatitis C virus. Specifically, the invention of HCV type 1b strain Con1 truncated envelope protein sE2 (384 661) gene of Helicobacter pylori and expression of the fusion protein gene of non heme iron, ferritin monomer by self assembling sE2 can be displayed on the surface of the nanoparticles in the correct conformation, can be prepared into HCV nanoparticles the vaccine has good antigenicity and safety, and the immunogenicity of the fusion protein significantly increased.
【技术实现步骤摘要】
一种展示丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的纳米颗粒的制备及应用
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及一种展示丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的纳米颗粒的制备及应用。
技术介绍
丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)是危害全球公共健康的严重问题。目前全球已经有超过1.7亿HCV慢性感染病例，每年还有3到4百万新发病例。据统计，80％的HCV感染者会转为慢性感染，其中25％可能发展为肝硬化，其中又有20％可能发展为肝癌。丙型肝炎病毒是黄病毒科肝炎病毒属的单链正义RNA病毒，基因组约9.6kbp。HCV基因组共编码10个病毒蛋白，包括核蛋白Core、包膜糖蛋白E1和E2在内的结构蛋白，以及包括P7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A和NS5B在内的非结构蛋白。丙型肝炎的传统治疗手段主要为利巴韦林合并干扰素治疗，该方法副作用较大、持续病毒学应答(sustainedvirologicalresponse,SVR)不高且存在显著的型间和人群间差异。2014年，随着多种针对HCV的新一代抗病毒药物(direct-actingantiviralagents,DAA)在国外上市，丙型肝炎治疗的SVR提高到90％以上。但由于DAA药物昂贵的价格，易存在耐药突变，不能排除治愈后再感染的可能性及对于晚期肝硬化肝癌患者束手无策等特点决定了DAA的上市并不意味着HCV的彻底根除。因此开发HCV的预防性疫苗具有重要意义。国际上已有的HCV候选疫苗主要分为预防性与治疗性两种。预防性疫苗多在结构蛋白的基础上设计，以诱导高滴度的广谱中和抗体、中和入侵的HCV病毒为主要目的。而治疗性疫苗多在非结构蛋白的基础上设计，主要以诱导多功能T细胞反应、清除已存在的病毒感染为目的。目前已有多种HCV候选疫苗处于研发阶段，但进入临床试验的疫苗仅有少数，如预防性疫苗E1/E2重组蛋白联合MF59佐剂(CHO细胞表达)，治疗性疫苗DNA疫苗ChronVac-C、人重组腺病毒疫苗Ad6NS、黑猩猩重组腺病毒疫苗AdCh3NS和重组麻疹病毒MVA-NS。由于该病毒存在基因序列的高度变异性、糖基化漂移等免疫逃逸特质，目前尚无针对HCV的有效疫苗。但临床数据显示在高慢性化率之外，仍有20-25％的病人可通过早期产生的中和抗体及T细胞免疫反应自发地清除HCV病毒；另一些证据显示在黑猩猩和人身上存在的保护性免疫记忆能大量降低二次感染的病毒载量以及肝脏炎症反应等病理现象。这表明，感染早期的中和抗体产生对于抵抗和消除HCV的感染至关重要，另外有报道称除少数抗体表位位于包膜蛋白E1，大部分识别表位都位于其包膜蛋白E2上。因此设计一种能够诱导中和抗体产生的基于E2蛋白的HCV疫苗成为可能。也为预防性HCV疫苗的研究提供了理论基础和依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种展示丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的纳米颗粒的制备及应用。本专利技术的第一方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白是抗原肽与载体蛋白融合所形成的，其中所述抗原肽衍生自HCV包膜蛋白E2。在另一优选例中，所述载体蛋白与所述抗原肽不是来自同一个蛋白，所述载体蛋白包含至少一个T细胞表位，所述载体蛋白可以增强所述抗原肽的免疫原性。在另一优选例中，所述载体蛋白为幽门螺旋杆菌非血红素铁蛋白。在另一优选例中，所述抗原肽连接于所述载体蛋白的C末端和/或N末端形成所述融合蛋白。在另一优选例中，所述抗原肽和所述载体蛋白之间具有任选地连接肽。优选地，所述连接肽长度为3-30个氨基酸。更优选地，所述连接肽长度为4-20个氨基酸。最优选地，所述连接肽长度为7-17个氨基酸。在另一优选例中，所述抗原肽和所述载体蛋白之间没有连接肽。在另一优选例中，所述抗原肽和所述载体蛋白之间不具有连接肽。在另一优选例中，所述抗原肽选自下组：(a)具有SEQIDNO.1所示氨基酸序列的多肽；(b)将(a)中多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且与载体蛋白融合后具有诱发针对HCV免疫反应功能的衍生多肽。在另一优选例中，所述载体蛋白为幽门螺旋杆菌非血红素铁蛋白；优选地，所述幽门螺旋杆菌非血红素铁蛋白选自下组：(a)具有SEQIDNO.2所示氨基酸序列的多肽；(b)将(a)中多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽。在另一优选例中，所述融合蛋白选自：(a)具有SEQIDNO.3所示氨基酸序列的多肽；(b)将(a)中多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且与载体蛋白融合后具有诱发针对HCV免疫反应功能的衍生多肽。本专利技术的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸编码本专利技术第二方面所述的融合蛋白。在另一优选例中，所述多核苷酸选自下组：(a)编码如SEQIDNO.3所示多肽的多核苷酸；(b)序列如SEQIDNO.4所示的多核苷酸；(c)核苷酸序列与SEQIDNO.4所示序列的同源性≥95％(较佳地≥98％)的多核苷酸；(d)如SEQIDNO.4所示多核苷酸的5’端和/或3’端截短或添加1-60个(较佳地1-30，更佳地1-10个)核苷酸的多核苷酸；(e)与(a)-(d)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。本专利技术的第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有本专利技术第二方面所述的多核苷酸。本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本专利技术第三方面所述的表达载体，或者在基因组中整合有本专利技术第二方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的宿主细胞包括原核细胞和真核细胞。在另一优选例中，所述的宿主细胞包括S2细胞、大肠杆菌、酵母、CHO细胞、DC细胞等。本专利技术的第五方面，提供了一种药物组合物，所述的组合物含有本专利技术第一方面所述的融合蛋白、本专利技术第二方面所述的多核苷酸或者本专利技术第三方面所述的表达载体或者本专利技术第四方面所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体和/或辅料。在另一优选例中，所述的组合物为疫苗。本专利技术的第六方面，提供了一种疫苗组合物，所述的组合物含有本专利技术第一方面所述的融合蛋白、本专利技术第二方面所述的多核苷酸或者本专利技术第三方面所述的表达载体或者本专利技术第四方面所述的宿主细胞，以及免疫学上可接受的载体和/或辅料。在另一优选例中，所述的疫苗组合物还含有佐剂。在另一优选例中，所述疫苗组合物为核酸疫苗组合物，所述核酸疫苗组合物中包含本专利技术第二方面所述的多核苷酸或者本专利技术第三方面所述的表达载体。在另一优选例中，所述的佐剂包括铝佐剂、氧化铝、皂苷、quilA、胞壁酰二肽、矿物油或植物油、基于囊泡的佐剂、非离子嵌段共聚物或DEAE葡聚糖、细胞因子(包括IL-1、IL-2、IFN-r、GM-CSF、IL-6、IL-12、和CpG)。本专利技术的第七方面，提供了如本专利技术第一方面所述的融合蛋白的用途，(a)用于制备针对HCV的抗体；和/或(b)用于制备治疗或预防与HCV相关的疾病的药物。在另一优选例中，所述的疾病包括HCV感染。本专利技术的第八方面，提供了一种制备本专利技术第一方面所述的融合蛋白的方法，包括步骤：(i)在适宜条件下培养本专利技术第四方面所述的宿主细胞，从而表达本专利技术第一方面所述的融合蛋白；(ii)纯化所述融合蛋白。本专利技术的第十方面，提供了一种治疗方法，给需要的对象施用本专利技术第一方面所述的融合蛋白、本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是抗原肽与载体蛋白融合所形成的，其中所述抗原肽衍生自HCV包膜蛋白E2；优选地，所述抗原肽具有HCV包膜蛋白E2的第384‑661位氨基酸。
【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是抗原肽与载体蛋白融合所形成的，其中所述抗原肽衍生自HCV包膜蛋白E2；优选地，所述抗原肽具有HCV包膜蛋白E2的第384-661位氨基酸。2.一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸编码权利要求1所述的融合蛋白。3.一种表达载体，所述表达载体含有权利要求2所述的多核苷酸。4.一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有权利要求3所述的表达载体，或者在基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。5.一种药物组合物，所述的组合物含有权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所述的多核苷酸或者权利要求3所述的表达载体或者权利要求4所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体和/或辅料。6.一种疫苗组合物，所述的组合物含有权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄忠，钟劲，王雪松，颜雨，李大鹏，屈攀科，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31
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