制备人甲状旁腺素1-34的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备重组人甲状旁腺素１－３４［ｒｈＰＴＨ（１－３４）］的方法，该方法包括如下步骤：（１）使能表达融合蛋白的表达载体进行表达，所述融合蛋白从Ｎ端到Ｃ端的序列为硫氧还蛋白－（Ｈｉｓ）↓［６］－肠激酶识别位点－甲状旁腺激素１－３４肽；（２）用镍离子螯合亲和层析对步骤（１）得到的融合蛋白进行纯化；以及（３）将步骤（２）纯化得到的融合蛋白用肠激酶酶切，以将甲状旁腺激素１－３４肽从所述融合蛋白中释放下来。利用本发明专利技术的方法，可快速、简便、高效地纯化ｈＰＴＨ（１－３４），大大提高了回收率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白质的制备技术，具体地讲，涉及利用基因工程技术制备人甲状旁腺素1-34(hPTH(1-34))的方法。
技术介绍
甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone，PTH)是由甲状旁腺激素主细胞合成的，由84个氨基酸组成。人们逐渐认识到PTH能够增加在合成新骨基质中非常活跃的成骨细胞的数量，并且能在体内改变骨骼中的基因表达。PTH还具有降低血压、调节维生素D受体(VDR)表达、调节碱性磷酸酯酶的活性的作用。Tregear等(Tregear GW等，Endocrinology，1973，931349)用实验证明PTH发挥钙磷调节分子作用仅需氨基端1-34个氨基酸残基。但是，PTH(1-34)不含半胱氨酸，在体内较不稳定。PTH的基因工程研究开始于20世纪80年代。目前制备PTH(1-34)的基因工程方法主要有两类，一类为以包涵体的形式制备，另一类以可溶蛋白的形式制备。1997年，日本科学家Yuji Suzuki等将人甲状旁腺素(hPTH(1-34))与β-半乳糖苷酶融合表达，但融合蛋白以包涵体形式存在。中国专利公开号CN 1417231A也公开了一种以包涵体的形本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备ｈＰＴＨ（１－３４）的方法，该方法包括如下步骤：（１）使能表达融合蛋白的表达载体进行表达，所述融合蛋白从Ｎ端到Ｃ端的序列为硫氧还蛋白－（Ｈｉｓ）↓［６］－肠激酶识别位点－甲状旁腺激素１－３４肽；（２）用镍离子螯合亲和层析对步骤（１）得到的融合蛋白进行纯化；以及（３）将步骤（２）纯化得到的融合蛋白用肠激酶酶切，以将甲状旁腺激素１－３４肽从所述融合蛋白中释放下来。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨立明，张仁怀，刘社际，阳勇，何凯，黄碧莲，刘德林，
申请(专利权)人：深圳市华生元基因工程发展有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]