重组酶聚合酶扩增试剂盒、扩增方法及扩增试剂技术

本发明专利技术涉及一种重组酶聚合酶扩增试剂盒，包括：Ecoli RecA蛋白；λ phage Orf蛋白；Ecoli SSB蛋白及DNA聚合酶；本发明专利技术还提供了一种重组酶聚合酶扩增方法及扩增试剂。本发明专利技术的重组酶聚合酶扩增试剂盒，采用Ecoli RecA蛋白、Ecoli SSB蛋白及λ phage Orf蛋白协同作用的扩增体系，扩展了重组酶聚合酶扩增的应用范围；与传统PCR技术相比，本发明专利技术的重组酶聚合酶扩增反应在恒温条件下即可进行，无需PCR仪等温度循环仪器，不受实验空间限制；本发明专利技术的扩增反应在10至60分钟即可完成，远快于PCR技术或其他等温扩增技术。

Recombinant enzyme PCR amplification kit, amplification method and amplification reagent

The invention relates to a recombinase polymerase amplification kit, including: Ecoli phage lambda RecA protein; Orf protein; Ecoli protein SSB and DNA polymerase; the invention also provides a recombinase polymerase amplification method and amplification reagent. The invention of the recombinase polymerase amplification kit, amplified by Ecoli system synergetic effect of RecA protein, SSB protein and Ecoli lambda phage Orf protein, and expanded the range of application of recombinase polymerase amplification; compared with the traditional PCR technology, the invention of the recombinase polymerase extension increase reaction can be carried out under constant temperature condition no, PCR instrument of temperature cycling is not affected by the experimental instrument, the invention of the space limitation; complete the amplification reaction in 10 to 60 minutes, much faster than PCR or other isothermal amplification technology.

【技术实现步骤摘要】
重组酶聚合酶扩增试剂盒、扩增方法及扩增试剂
本专利技术涉及一种恒温扩增技术，更具体地说，涉及一种重组酶聚合酶扩增（RPA）试剂盒、扩增方法及扩增试剂。
技术介绍
传统的体外DNA扩增主要是采用聚合酶链式反应（PCR）的方法，目前已经广泛应用于生物医学等领域。PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成：（1）模板DNA的变性，模板DNA经加热至90-95℃一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；（2）模板DNA与引物的退火，模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55-60℃，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；（3）引物的延伸，DNA模板—引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于70-75℃条件下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性—退火—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。PCR技术的优点显而易见，但由于其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组酶聚合酶扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分：Ecoli RecA蛋白、λ phage Orf蛋白、Ecoli SSB蛋白及DNA聚合酶。

【技术特征摘要】
1.一种重组酶聚合酶扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分：EcoliRecA蛋白、λphageOrf蛋白、EcoliSSB蛋白及DNA聚合酶。2.根据权利要求1所述的重组酶聚合酶扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括Tris缓冲液，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇、二硫苏糖醇、磷酸肌酸和肌酸激酶中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的重组酶聚合酶扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括镁离子制剂。4.一种重组酶聚合酶扩增方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A、配置反应体系，所述反应体系包括：模板核酸分子、引物组、EcoliRecA蛋白、λphageOrf蛋白、EcoliSSB蛋白、DNA聚合酶、dNTP、ATP及扩增反应缓冲液，所述扩增反应缓冲液包括Tris缓冲液；B、向所述反应体系中加入镁离子制剂；C、在20至65℃条件下进行扩增反应。5.根据权利要求4所述的重组酶聚合酶扩增方法，其特征在于，所述扩增反应缓冲液还包括聚乙二醇、二硫苏糖醇、磷酸肌酸和肌酸激酶中的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛司潼，龚敬文，
申请(专利权)人：广州康昕瑞基因健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44