基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基因工程生产用原核表达质粒载体－ｐＫｐＬ５及其构建方法，其特征在于：在含有双启动子、双ＳＤ区、ｒｒｎｂ转录终止子的ｐＫｐＬ４原核质粒载体的起始码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、１６ｓ　　ｒＲＮＡ３’端互补区、凝血酶识别位点编码区接头，三个接头的５’端分别含限制性核酸内切酶Ｎｃｏ　　Ｉ、Ｂａｍ　　ＨＩ、Ｂａｍ　　ＨＩ残存碱基。该质粒载体能大大提高目的基因的表达效率，从而提高目的蛋白的产量，我们使用该质粒载体表达人生存素单体、双体和利什曼原虫ＬＡＣＫ抗原，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后用Ｑｕａｎｔｉｔｙ　　ＯＮＥ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司）软件分析，目的蛋白的表达量分别占全菌总蛋白量的５．１％，１９％和３５％。同时本发明专利技术还能简化目的蛋白的纯化程序，降低目的蛋白的生产成本。原核表达质粒载体－ｐＫｐＬ５可用作原核高效表达通用质粒载体表达各种目的的基因。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基因工程生产用原核表达质粒载体－ｐＫｐＬ５，其特征在于：在含有双启动子、双ＳＤ区、ｒｒｎｂ转录终止子的ｐＫｐＬ４原核质粒载体的起始码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、１６ｓ　　ｒＲＮＡ３’端互补区、凝血酶识别位点编码区接头，三个接头的５’端分别含限制性核酸内切酶Ｎｃｏ　　Ｉ、Ｂａｍ　　ＨＩ、Ｂａｍ　　ＨＩ残存碱基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：敬保迁，马大龙，张洁，
申请(专利权)人：川北医学院，
类型：发明
国别省市：51[中国|四川]