家蚕重组杆状病毒感染的方法技术

本发明专利技术公开了一种家蚕重组杆状病毒感染的方法。利用应用脂质体介导技术经皮接种家蚕，达到了直接用病毒感染同样的感染效果。这种新的感染方法其优点在于改变了传统直接使用病毒的接种方式，避免了病毒可能扩散后引起作业环境污染的潜在危险性，提高了昆虫杆状病毒表达系统生物安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病毒感染技术，尤其涉及一种家蚕重组病毒经口接种的方法。
技术介绍
昆虫杆状病毒表达载体系统(BacuLovirus Expression Vector System，简称BEVS)是利用携带有外源目的基因的重组昆虫杆状病毒作载体在昆虫体内或昆虫培养细胞进行表达生产的一个重组蛋白生产系统。由于该系统具有可以利用昆虫个体或其培养细胞进行大规模的高效表达生产等优点而成为目前最有效的真核表达系统之一。目前BEVS主要包括欧美国家正在广泛应用的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus，简称AcNPV)和在中国、日本应用较多的的家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclearpolyhedrosis virus，简称BmNPV)两类表达系统(Smith et al.，1983；Maeda et al.，1984)。BmNPV表达系统由于可以利用我国饲养量最大的经济昆虫-家蚕作为表达载体，从而具有成本低、适合规模化生产的优点，非常具有我国特色(吕鸿声，1998)。然而，目前的感染技术都本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种家蚕重组杆状病毒感染的方法，其特征在于：（１）病毒基因组ＤＮＡ的提取制备：用重组家蚕杆状病毒ＨｙＮＰＶ－ｂＦＧＦ感染昆虫培养细胞Ｓｆ２１，９６ｈ后低速离心收集细胞，加入ＰＢＳ缓冲液悬浮后再离心１次；用ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ公司ＤＮ ＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ抽提病毒基因组，对ＲＮＡ消化后用Ａ２６０／２８０测定病毒基因组ＤＮＡ纯度和浓度；（２）ＤＮＡ与脂质体的混合：根据一定的浓度混合比例，脂质体的浓度确定在０．１ｇ／Ｌ，病毒ＤＮＡ浓度５ｎｇ／Ｌ，使用前 室温放置３０分钟；（３）重组病毒经皮感染：经皮穿刺接种用注射的方式，事先将五龄家蚕幼虫放置冰上１...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姚慧鹏，吴小锋，兰丽盼，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]