一种抗人Nogo-66受体蛋白疫苗的制备方法及其应用技术

技术编号:1709812 阅读:317 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种制备抗人Nogo-66受体蛋白疫苗的方法,从人神经母细胞瘤(SK-N-SH)cDNA中,经PCR扩增得到全长hNgR基因,将扩增的片段插入至克隆载体中,再亚克隆至含6个His标签的表达载体pET28a(+)获得重组表达质粒pET28a-NgR。将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中进行诱导表达得到hNgR蛋白。抗NgR蛋白疫苗可以通过封闭NgR,阻断抑制因子的作用,从而促进脊髓损伤后神经元轴突的再生,减轻损伤区的组织坏死,促进损伤脊髓的功能恢复,表明NgR蛋白疫苗具有治疗脊髓损伤的潜在应用价值,其避免了外源性生物制剂,比较容易被自身免疫系统清除的缺点,另外也克服了针对NgR的DNA疫苗接种后主要诱发细胞免疫,只有少数个体能诱导出体液免疫的特点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种抗人Nogo-66受体蛋白疫苗的制备方法,其步骤如下:    从人神经母细胞瘤(SK-N-SH)cDNA中,经PCR扩增得到全长hNgR基因,不包含信号肽,所用引物如下:    上游引物:5′-TTGGATCCTGCCCAGGTGCCTGCGTATG;    下游引物:5′-TTAAGCTTCAGCAGGGCCCAAGCACTGTC;    将扩增的片段插入至克隆载体pUC19中,经测序鉴定正确后再亚克隆至含6个His标签的表达载体pET28a(+)获得重组表达质粒pET28a-NgR;    经酶切及测序鉴定正确后将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中进行诱导表达。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:陆佩华于盼盼黄立东徐晓明虞志华王艳霞王小飞刘欣秋徐亮
申请(专利权)人:上海交通大学医学院
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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