亚麻游离花粉培养基及亚麻游离花粉培养方法属于生物技术领域；其亚麻游离花粉愈伤组织诱导培养基ＨＦ↓［１］含有１／２Ｎ↓［６］，１．５ｍｇ／Ｌ２．４Ｄ，０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ；亚麻游离花粉愈伤组织分化培养基ＨＦ↓［２］含有１／２Ｎ↓［６］，２．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ，０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ；亚麻花粉绿苗生根培养基ＨＦ↓［３］含有１／２Ｎ↓［６］，０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，０．２ｍｇ／ＬＩＡＡ；采用过滤离心收集花粉制备成花粉悬浮液、诱导花粉愈伤组织、诱导花粉绿苗分化和花粉绿苗生根培养四个步骤完成亚麻游离花粉培养；本发明专利技术筛选出亚麻游离花粉培养基ＨＦ↓［１］、ＨＦ↓［２］和ＨＦ↓［３］，并首次建立了亚麻游离花粉培养方法，简化了亚麻倍性鉴定的复杂过程，花粉愈伤组织诱导率、花粉绿苗分化率和花粉绿苗生根率均明显高于已有技术。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及亚麻生物
，主要涉及亚麻游离花粉培养技术。
技术介绍
我国亚麻花药培养研究始于二十世纪70年代，并由我国首次从 亚麻花药培养中获得花粉植林，但亚麻花药愈伤组织的诱导率和绿 苗分化率很低，且存在大量的从体细胞发育而来的二倍体植林，给 单倍体鉴定带来很大困难，严重制约了亚麻单倍体育种进程。游离 花粉的培养具有其独特的优越性，首先，游离花粉是单倍的性细胞， 游离花粉的培养不仅可减少倍性鉴定的工作量，而且它还可作为高 效的细胞筛选系统，使农艺性状迅速稳定，避免后代的分离。其次， 它可作为转基因的受体，通过染色体加倍，使外源基因快速纯和。 在亚麻游离花粉培养过程中，培养方法及培养基是影响花粉产生愈 伤组织诱导率和花粉绿苗的分化率主要外因条件。因此，本领域迫 切需要建立亚麻游离花粉培养方法及培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种新型的亚麻游离花粉培养基及亚麻 游离花粉培养方法，以达到建立亚麻游离花粉培养系统、进一步提 高亚麻花粉愈伤组织的诱导率和花粉绿苗分化率、加快亚麻花培育 种进程的目的。本专利技术的目的是这样实现的一种亚麻游离花粉培养基，包括亚麻游离花粉愈伤组织诱导培养基HF,、亚麻游离花粉愈伤组织分化培养基HF2和亚麻花粉绿苗生 根培养基HF"其特征在于①、亚麻游离花粉愈伤组织诱导培养基 HFi含有1/2N6, 1. 5mg/12. 4—D, 0. 5mg/L6—BA; 1/2^的成分为: 硝酸钾1415mg/L,石克酸4妄231mg/L,辟^酸4美92mg/L,氯化《丐83mg/L， 磷酸二氢钾200mg/L,硼酸0. 8mg/L,石克酸锰2. 2mg/L,石典化钾 0. 4mg/L,石克酸锌0. 75mg/L，甘氨酸1. Omg/L，盐酸石克胺素1. Omg/L, 盐酸吡。多素0. 5mg/L,烟酸0. 5mg/L,石克酸亚铁27. 8mg/L，乙二胺 四乙酸二钠37. 3mg/L,蔗糖30g/L,琼脂8g/L; PH值为5. 5;② 、亚麻游离花粉愈伤组织分化培养基肝2含有1/2N6， 2. 0mg/L6 一BA, 0. 5mg/LIAA; 1/2仏的成分为硝酸钾1415mg/L,;琉酸铵 231mg/L，硫酸镁92mg/L，氯化钙83mg/L,磷酸二氢钾200mg/L, 硼酸0. 8mg/L,石克S臾4孟2. 2mg/L,不典化钟0. 4mg/L,碌^酸辞0. 75mg/L, 甘氨酸1. 0mg/L,盐酸辟u胺素1. 0mg/L,盐酸吡口多素0. 5mg/L,烟酸 0. 5rag/L,石克酸亚寺失27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L,蔗糖 30g/L,琼脂8g/L; PH值为5. 5;③ 、亚麻花粉绿苗生根培养基HF3含有1/2N6 , 0. 2mg/LNAA， 0. 2mg/LIAA; 1/2&的成分为:硝酸钾1415mg/L,硫酸 铵231mg/L,;琉酸4美92mg/L,氯化钙83mg/L,磷酸二氪钾200mg/L, 硼酸0. 8mg/L,石克酸锰2. 2mg/L,石典化钾0. 4mg/L,碌u酸锌0. 75mg/L, 甘氨酸1. 0mg/L,盐g吏碌u胺素1. 0mg/L,盐酸吡喷素0. 5mg/L,烟酸 0.5mg/L,碌u酸亚4失27. 8mg/L,乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L,蔗糖 30g/L,琼脂8g/L; PH值为5. 5;一种使用上述亚麻游离花粉培养基的亚麻游离花粉培养方法， 其特征在于该方法包括步骤是① 、取花粉小孢子处于单核中后期的亚麻花蕾，放入2°/。的次氯酸钠溶液中消毒15分钟，再用无菌水沖洗3次，取出花药放入盛有无菌水的培养皿中，用针刺释放法将花粉粒释放到无菌水中，再通过过滤离心收集花粉；② 、调整花粉密度5. 0x 1()2个/ml，制备成花粉悬浮液，接种到亚麻花粉愈伤组织诱导培养基HF,中，诱导花粉愈伤组织，在18 — 25°C、光照强度为2000LX、光照时间8小时/天的条件下培养；③ 、当亚麻花粉愈伤组织长到3—5mm左右，转入亚麻花粉愈伤 组织分化培养基HF2中，诱导花粉绿苗的分化，在18 —25°C、光照 强度为2000LX、光照时间12小时/天的条件下培养；④ 、将步骤③得到的植抹转入亚麻花粉绿苗生根培养基HF3中， 在18 — 25。C、光照强度为2000LX、光照时间为15小时/天的条件下 培养， 一般7 —15天可陆续生根。本专利技术的关键是找到了适宜的培养方法，筛选出高效培养基， 该专利技术是在多年的亚麻花粉培养及对多种培养基应用研究的基础 上，从调整大量元素、微量元素、植物激素入手，筛选出亚麻游离 花粉培养基HFh HFs和HF3，并首次建立了亚麻游离花粉培养方法， 简化了亚麻倍性鉴定的复杂过程，且以HFi培养基的花粉愈伤组织诱 导率、HF2培养基的花粉绿苗分化率和HF3培养基的花粉绿苗生根率 均明显高于已有技术。具体实施例方式下面举实例对本专利技术及实施效果进行详细描迷。 (1 )以1/2Ns培养基成分为基础，通过调整植物激素2. 4—D( 0. 1 一3. Omg/L)、 6—BA ( 0. 1 — 3. Omg/L )的浓度并进行配比实验，筛选 出亚麻游离花粉最佳诱导培养基HF!，其激素配比浓度为1. 5mg/L2. 4 一D, 0. 5mg/L6—BA;通过调整才直物激素6—BA( 0. 1一3. Omg/L )、 ( 0. 1一2. Omg/L) IAA的浓度并进行配比实验，筛选出亚麻游离花粉愈伤 组织分化培养基HF2,其激素配比浓度为1. 5mg/L6—BA,0. 5mg/LIAA; 通过调整才直物激素NAA ( O—O. 5mg/L )、 ( O—O. 5mg/L ) IAA的浓度进 行配比实验，筛选出亚麻花粉植林生根培养基HF3，其激素配比浓度 为0. 2mg/LNAA， 0. 2mg/LIAA;(2 )诱导培养基肌中亚麻游离花粉愈伤组织诱导率。 我们接种5个杂交组合的亚麻花粉。5个杂交组合各2ml花粉 悬浮液(花粉密度为5. G x 1(^个/ml )分别接种在HFj咅养基上，进 行花粉愈伤组织的诱导，在18 — 25。C，光照强度为2000LX,光照时 间8小时，培养15 — 30天，实验结果表明培养基HFi花粉愈伤组织 的i秀导率为20. 6 — 30. 8%。表2培养基肌中不同杂交组合对花粉愈伤组织诱导率的影响杂交组合代号接种花粉数(个)愈伤组织(块)愈伤组织诱导率(%)9601100030830. 89605100028628. 69712100025125. 19715100020620. 69718100021921. 9(3) HFi与MS、 B5、 Ns培养基对比实验。取同一杂交组合的花粉接种在MS、 B5、 IHFi培养基上，每种培 养基均接种4ml花粉悬浮花粉悬浮液(花粉密度为5. 0 x 1()2个/ml ), 四种培养基中激素配比均为1. 5mg/L2. 4—D, 0. 5mg/L6—BA。在18 一25。C,光照强度为2000LX,光照时间8小时，培养15 — 30天， 实验结果表明HFi、 MS、 B5、 N6四种培养基花粉愈伤组织的诱导率 分别为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种亚麻游离花粉培养基，包括亚麻游离花粉愈伤组织诱导培养基ＨＦ↓［１］、亚麻游离花粉愈伤组织分化培养基ＨＦ↓［２］和亚麻花粉绿苗生根培养基ＨＦ↓［３］，其特征在于：①、亚麻游离花粉愈伤组织诱导培养基ＨＦ↓［１］含有１／２Ｎ↓［６］，１．５ｍｇ／Ｌ２．４－Ｄ，０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ；１／２Ｎ↓［６］的成分为：硝酸钾１４１５ｍｇ／Ｌ，硫酸铵２３１ｍｇ／Ｌ，硫酸镁９２ｍｇ／Ｌ，氯化钙８３ｍｇ／Ｌ，磷酸二氢钾２００ｍｇ／Ｌ，硼酸０．８ｍｇ／Ｌ，硫酸锰２．２ｍｇ／Ｌ，碘化钾０．４ｍｇ／Ｌ，硫酸锌０．７５ｍｇ／Ｌ，甘氨酸１．０ｍｇ／Ｌ，盐酸硫胺素１．０ｍｇ／Ｌ，盐酸吡哆素０．５ｍｇ／Ｌ，烟酸０．５ｍｇ／Ｌ，硫酸亚铁２７．８ｍｇ／Ｌ，乙二胺四乙酸二钠３７．３ｍｇ／Ｌ，蔗糖３０ｇ／Ｌ，琼脂８ｇ／Ｌ；②、亚麻游离花粉愈伤组织分化培养基ＨＦ↓［２］含有１／２Ｎ↓［６］，２．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ，０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ；１／２Ｎ↓［６］的成分为：硝酸钾１４１５ｍｇ／Ｌ，硫酸铵２３１ｍｇ／Ｌ，硫酸镁９２ｍｇ／Ｌ，氯化钙８３ｍｇ／Ｌ，磷酸二氢钾２００ｍｇ／Ｌ，硼酸０．８ｍｇ／Ｌ，硫酸锰２．２ｍｇ／Ｌ，碘化钾０．４ｍｇ／Ｌ，硫酸锌０．７５ｍｇ／Ｌ，甘氨酸１．０ｍｇ／Ｌ，盐酸硫胺素１．０ｍｇ／Ｌ，盐酸吡哆素０．５ｍｇ／Ｌ，烟酸０．５ｍｇ／Ｌ，硫酸亚铁２７．８ｍｇ／Ｌ，乙二胺四乙酸二钠３７．３ｍｇ／Ｌ，蔗糖３０ｇ／Ｌ，琼脂８ｇ／Ｌ；③、亚麻花粉绿苗生根培养基ＨＦ↓［３］含有１／２Ｎ↓［６］，０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，０．２ｍｇ／ＬＩＡＡ；１／２Ｎ↓［６］的成分为：硝酸钾１４１５ｍｇ／Ｌ，硫酸铵２３１ｍｇ／Ｌ，硫酸镁９２ｍｇ／Ｌ，氯化钙８３ｍｇ／Ｌ，磷酸二氢钾２００ｍｇ／Ｌ，硼酸０．８ｍｇ／Ｌ，硫酸锰２．２ｍｇ／Ｌ，碘化钾０．４ｍｇ／Ｌ，硫酸锌０．７５ｍｇ／Ｌ，甘氨酸１．０ｍｇ／Ｌ，盐酸硫胺素１．０ｍｇ／Ｌ，盐酸吡哆素０．５ｍｇ／Ｌ，烟酸０．５ｍｇ／Ｌ，硫酸亚铁２７．８ｍｇ／Ｌ，乙二胺四乙酸二钠３７．３ｍｇ／Ｌ，蔗糖３０ｇ／Ｌ，琼脂８ｇ／Ｌ。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：宋淑敏，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院大庆分院，
类型：发明
国别省市：23[中国|黑龙江]
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