测定玄参提取物指纹图谱的方法技术

一种测定玄参提取物指纹图谱的方法。该方法以水作为提取溶剂制备玄参提取物，以玄参提取物为检测对象，建立了针对玄参药材、饮片、提取物和制剂的指纹图谱方法，获得了较为全面的图谱信息，确认了玄参提取物的共有峰10个，其中6个峰得到指认。结合该指纹图谱中多个色谱峰的信息，能够全面地、快速地检测其质量，有利于其全面质量检测和质量控制。本发明专利技术提供的方法对于指导在临床用药及生产过程中对于原料药有效的投料指导、确保质量的可靠具有积极作用；操作简便、快捷，对中药玄参提取物质量进行评价，结论较为客观、准确。

【技术实现步骤摘要】
测定玄参提取物指纹图谱的方法
本专利技术涉及一种识别化合物方法，尤其涉及一种获得提取自玄参提取物指纹图谱的方法，以实现对利用玄参开发药物的质量监测，使得检测过程更稳定。
技术介绍
玄参为玄参科植物玄参(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根。性甘、苦、咸，微寒。归肺、胃、肾经。功能清热凉血，滋阴降火，解毒散结。用于热入营血，温毒发斑，热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘，骨蒸劳嗽，目赤，咽痛，白喉，瘰疬，痈肿疮毒。始载于《神农本草经》，被列为中品。玄参在传统方剂中有大量应用，如养阴清肺汤、清营汤、百合固金汤等。同时玄参在《中华人民共和国药典》收录的现代中成药中也有广泛使用，如养阴清肺膏、清热解毒口服液、清瘟解毒丸等。玄参中主要含环烯醚萜类、苯丙素苷类和芳香糖苷类等成分。其中，环烯醚萜苷类化合物哈巴苷(C15H24O10)和哈巴俄苷(C24H30O11)为《中国药典》规定的含测指标成分。然而仅测定某类成分的含量，难以客观、有效地评价或控制玄参药材的质量。中国专利技术专利ZL200810184570.5公开了一种玄参配方颗粒及其制备方法和质量控制方法，将红外光谱技术应用于中药的质量控制，快速地解决了中药宏观质量控制中的一个首要问题——中药真伪的鉴定，但是该方法所采用的红外指纹图谱进行质量鉴别，其专属性不强。中国专利技术专利申请201610423663.3公开了一种建立玄参的药物制剂的指纹图谱的方法，采用高效液相法建立指纹图谱，获得了哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸等化合物的3个色谱峰，但特征峰较少。此外，采用通用的反相C-18柱，使得分析所用的时间偏长。因此，建立一种能够快速全面地、快速地检测玄参提取物的方法，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种测定玄参提取物指纹图谱的方法，该方法可有效地监控玄参药材、饮片、中间品和制剂的质量，保证其在临床或生产应用时的有效、安全和稳定。本专利技术提供的一种测定玄参提取物指纹图谱的方法，包括：取玄参提取物，加水，35KHz～60KHz超声提取2分钟～10分钟，过滤(如：采用孔径为0.22μm滤膜过滤)，取续滤液，即得供试品溶液；取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品、毛蕊花糖苷对照品、桃叶珊瑚苷对照品、安格洛苷C对照品和肉桂酸对照品，制成对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别吸取2μl，分别于高效液相色谱仪上样，流速为0.7ml·min-1，检测波长205nm～215nm，流动相A为0.03v/v％磷酸水溶液，流动相B为乙腈，采用流动相A和流动相B相混合的洗脱方式洗脱，流动相B在各个洗脱时间的用量变化如下：0min～5min：流动相B为2v/v％，5min～12min：流动相B由2v/v％提高至10v/v％，12min～25min：流动相B由10v/v％提高至33v/v％，25min～30min：流动相B由33v/v％提高至35v/v％，30min～32min：流动相B为35v/v％。一种玄参提取物的获取方式如：取玄参饮片，加9倍量水，浸泡0.5小时～1小时，加热提取0.5小时～2小时，即一煎；一煎后，按玄参饮片7倍量向药渣加水，提取0.5小时～2小时，即二煎；合并一煎和二煎的药液，减压浓缩干燥，得玄参提取物。另一种玄参提取物的获取方式如：取玄参饮片，加9倍量水，浸泡0.5小时～1小时，加热提取0.5小时～2小时，即一煎；一煎后，按玄参饮片7倍量向药渣加水，提取0.5小时～2小时，即二煎；合并一煎和二煎的药液，减压浓缩至相对密度1.00～1.15的浓缩液，浓缩液真空冷冻干燥，得玄参提取物。另一种玄参提取物的获取方式如：取玄参饮片，加9倍量水，浸泡0.5小时～1小时，加热提取0.5小时～2小时，即一煎；一煎后，按玄参饮片7倍量向药渣加水，提取0.5小时～2小时，即二煎；合并一煎和二煎的药液，减压浓缩至相对密度1.00～1.15的浓缩液，浓缩液喷雾干燥，得玄参提取物。本专利技术提供的测定玄参提取物指纹图谱的方法，所用玄参提取物与水的比例为：1g(生药量)∶25ml～50ml。每ml对照品溶液中分别含浓度10g/ml～100g/ml哈巴苷对照品、浓度10g/ml～100g/ml哈巴俄苷对照品、浓度10g/ml～100g/ml毛蕊花糖苷对照品、浓度10g/ml～100g/ml桃叶珊瑚苷对照品、浓度10g/ml～100g/ml安格洛苷C对照品和浓度10g/ml～100g/ml肉桂酸对照品。对照品溶液以甲醇溶液为溶剂，优先选择30v/v％以上甲醇溶液或甲醇。高效液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，规格为4.6mm×100mm，填料粒度为2.7μm。玄参提取物指纹图谱中10个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确定相对保留时间0.407±1％的峰2为桃叶珊瑚苷，相对保留时间0.477±1％的峰3为哈巴苷，相对保留时间0.817±1％的峰5为毛蕊花糖苷，相对保留时间0.882±1％的峰8为安格洛苷C，相对保留时间1.000±1％的峰9为哈巴俄苷，以及相对保留时间1.054±1％的峰10为肉桂酸。本专利技术技术方案实现的有益效果：本专利技术测定玄参提取物指纹图谱的方法，特玄参药材、饮片的指纹图谱进行了研究，建立了玄参液相指纹图谱测定条件，并进行了方法学考察。本专利技术提供的方法，根据6个产地13批样品，制定了玄参提取物液相指纹图谱标准，在生产过程中可有效的指导投料、规范生产操作，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。对所测得的指纹图谱的辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对药材指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。附图说明图1为本专利技术提供的对照品指纹图谱；其中，峰1为桃叶珊瑚苷，峰2为哈巴苷，峰3为毛蕊花糖苷，峰4为安格洛苷C，峰5为哈巴俄苷，峰6为肉桂酸；图2为本专利技术提供的测定方法应用于13个批次玄参提取物而得到的指纹图谱；图3为本专利技术测定玄参提取物的标准指纹图谱；其中，峰2为桃叶珊瑚苷，峰3为哈巴苷，峰5为毛蕊花糖苷，峰8为安格洛苷C，峰9为哈巴俄苷，峰10为肉桂酸。具体实施方式以下详细描述本专利技术的技术方案。本专利技术实施例仅用以说明本专利技术的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本专利技术进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本专利技术的权利要求范围中。实施例1玄参药材采集玄参采集信息如下表1表1实施例2获得玄参提取物指纹图谱(1)实验仪器、试剂及样品对照品：哈巴苷、哈巴俄苷、桃叶珊瑚苷、毛蕊花糖苷、安格洛苷C和肉桂酸(中国药品生物制品检定研究院)。仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪(2)色谱条件及方法验证①波长选择玄参主要的活性成分为环烯醚萜类化合物，由于分子母核结构中缺少共轭双键类结构，大部分环烯醚萜类化合物，如：哈巴苷，在250nm以上的波长处没有吸收，因此在280nm～290nm波长下测得的玄参提取物的指纹图谱会丢失很多峰信息，故检测波长定为210nm。②流动相选择玄参指纹图谱所用流动相系统多为乙腈-磷酸水系统、乙腈-甲酸水系统、甲醇-甲酸水系统、甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定玄参提取物指纹图谱的方法，其特征在于包括如下步骤：取玄参提取物，加水，35KHz～60KHz超声提取2分钟～10分钟，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品、毛蕊花糖苷对照品、桃叶珊瑚苷对照品、安格洛苷C对照品和肉桂酸对照品，制成对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别吸取2μl，分别于高效液相色谱仪上样，流速为0.7ml·min

【技术特征摘要】
1.一种测定玄参提取物指纹图谱的方法，其特征在于包括如下步骤：取玄参提取物，加水，35KHz～60KHz超声提取2分钟～10分钟，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品、毛蕊花糖苷对照品、桃叶珊瑚苷对照品、安格洛苷C对照品和肉桂酸对照品，制成对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别吸取2μl，分别于高效液相色谱仪上样，流速为0.7ml·min-1，检测波长205nm～215nm，流动相A为0.03v/v％磷酸水溶液，流动相B为乙腈，采用流动相A和流动相B相混合的洗脱方式洗脱，流动相B在各个洗脱时间的用量变化如下：0min～5min：流动相B为2v/v％，5min～12min：流动相B由2v/v％提高至10v/v％，12min～25min：流动相B由10v/v％提高至33v/v％，25min～30min：流动相B由33v/v％提高至35v/v％，30min～32min：流动相B为35v/v％。2.根据权利要求1所述的测定玄参提取物指纹图谱的方法，其特征在于所述的玄参提取物的获取方式为：取玄参饮片，加9倍量水，浸泡0.5小时～1小时，加热提取0.5小时～2小时，即一煎；一煎后，按玄参饮片7倍量向药渣加水，提取0.5小时～2小时，即二煎；合并一煎和二煎的药液，减压浓缩干燥，得玄参提取物。3.根据权利要求1所述的测定玄参提取物指纹图谱的方法，其特征在于所述的玄参提取物的获取方式为：取玄参饮片，加9倍量水，浸泡0.5小时～1小时，加热提取0.5小时～2小时，即一煎；一煎后，按玄参饮片7倍量向药渣加水，提取0.5小时～2小时，即二煎；合并一煎和二煎的药液，减压浓缩至相对密度1.00～1.15的浓缩液，浓缩液真空冷冻干燥，得玄参提取物。4.根据权利要求1所述的测定玄参提取物指纹图谱的方法，其特征在于所述的玄...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红敏，盛卫国，范明松，刘承伟，何爱琴，
申请(专利权)人：扬子江药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32