一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法，包括如下步骤：采用乙醇加热回流方法提取核桃花药材，浓缩、复溶、超声、过滤后得到供试品溶液，将所述供试品溶液采用超高效液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱方法进行检测，获得化合物的二级质谱信息，并对检测结果中的化学成分信息进行分析。本发明专利技术的方法能够快速、高效地对核桃花中黄酮类化合物进行分析，为核桃花的药效物质研究、快速准确鉴定提供了依据，有利于核桃花的开发与利用。

【技术实现步骤摘要】
一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法
本专利技术涉及一种化学成分的分析方法，特别是涉及一种基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术的核桃花中黄酮类化学成分的分析方法。
技术介绍
核桃花即核桃的花柱，又称核桃纽，长寿菜，龙须菜。民间将其作为凉菜食用，临床上将其制成酊剂去除疣子。其主要成分有亚油酸甘油酯、蛋白质、碳水化合物及维生素等，具有促进人体造血功能、预防动脉硬化及定喘润肠等作用。目前，对核桃花成分的研究主要以黄酮类化合物为主，尚未有关于采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术的核桃花中黄酮类化学成分分析的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法，通过超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术，为核桃花中黄酮类化学成分分析提供了一种快速、高效的分析方法。一种核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，包括如下步骤：采用乙醇加热回流方法提取核桃花药材，浓缩、复溶、超声、过滤后得到供试品溶液，将所述供试品溶液采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法进行检测。本专利技术所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其中，应用AnalystTF1.7.1软件对所述超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法中的色谱条件进行设定，参数设置如下：色谱柱为ACQUITYBEHC18，100mm×2.1mm，1.7μm；以0.1％甲酸-水为流动相A，以甲醇为流动相B，线性梯度洗脱，0～1min，20％～35％B；1min～5min，35％～80％B；5min～15min，80％～100％B；15min～17min，100％B；17.1min～20min,20％B，体积流量为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量10μL。本专利技术所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其中，应用AnalystTF1.7.1软件对所述超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法中的质谱条件进行设定，参数设置如下：UPLC-Triple-TOF5600+飞行时间液质联用仪：正离子扫描模式；扫描范围：m/z100～1200；离子源温度：15℃；离子源电压：4500V；去溶剂气N2：110psi；去溶剂气温度：600℃；气帘气N2：35psi；一级扫描：去簇电压DP：80V；二级扫描：使用TOFMS～ProductIon～IDA模式采集质谱数据，CID能量为20～50eV。本专利技术所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其中，所述供试品溶液制备具体包括如下步骤：取核桃花药材1.0g至50mL烧瓶，50mL50％乙醇加热回流提取2次，第一次提取30min，第二次提取1h，过滤，合并两次滤液，减压浓缩至干，5mL甲醇复溶，超声30min，用甲醇补齐至原总重量，0.22μm微孔滤膜过滤，并保存在4℃冰箱中作为供试液。一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法，包括如下步骤：采用本专利技术的方法对核桃花中黄酮类化学成分进行检测，获得化合物的总离子流图、一级质谱信息以及二级质谱信息，并应用PeakView2.2软件对检测结果中的化学成分信息进行分析，所述PeakView2.2中包括MasterView1.1插件：(1)在MasterView1.1中打开采集的核桃花样品信息，设置分析参数如下：Intensity(响应值)：>1000counts；S:N(信噪比)：>10；DefaultXICWidth(提取离子宽度)：0.02Da；DefaultRetentionTimeWidth(保留时间宽度)：2min；DefaultThreshold(阈值)：100cps；MinimumRetentionTime(最小保留时间)：0.3min；MassError(分子量误差)：<10ppm；(2)根据现有包含948种中药中黄酮类化合物的数据库以及已有文献报道在胡桃属中发现的黄酮化合物为依据，将其分子式导入MasterView1.1，同时在MasterView1.1中设置每个化合物分子离子的加和形式为[M+H]+或者[M+Na]+，依据分子式及分子量与核桃花数据利用MasterView1.1进行匹配，得到所有导入的化合物信息与实验所得数据匹配的结果列表；结果中符合步骤(1)中所设置参数的化合物信息则显示绿色，不符合则不显示绿色，通过MasterView1.1软件筛选出结果中符合参数设置，即显示为绿色的化合物，并将符合参数设置的化合物列表中的信息导出，所述信息包括Formula(分子式)，Mass(理论分子量)，Adduct(实际分子量)，Extraction(加和形式)，Error(误差)，Intensity(响应值)和FoundAtRT(保留时间)；同时将点击每个化合物信息，在MasterView1.1中显示的与点击的化合物对应的一级质谱图以及二级质谱图逐个导出并保存，以便下一步分析；(3)为了防止数据库及文献报道的化合物在软件匹配过程中由于误差造成有效信息被过滤，所以在步骤(1)中设置的参数中MassError(分子量误差)：<10ppm，此范围较大，因此需要进一步进行逐个分析筛选；应用AnalystTF1.7.1＞＞Calculators＞＞IsotopicDistribution计算每一个化合物分子式分子离子的精确质量数，与步骤(2)中记录的化合物一级质谱信息，根据公式：误差(ppm)＝(实际分子量-理论分子量)/理论分子量×106剔除计算结果误差大于5ppm的化合物；(4)为提高鉴定的可信度，将步骤(3)中剔除部分化合物后的结果进行二级质谱分析：根据文献、mzCloud质谱数据库以及黄酮类化合物的裂解规律分析化合物的裂解途径，若实验中所得二级质谱信息有两个碎片离子符合该化合物的裂解规律，且碎片离子的实际分子量与理论分子量的误差范围小于15ppm，则认为实验样品中存在该化合物，误差计算公式与步骤(3)中相同。本专利技术核桃花中黄酮类化学成分的分析方法与现有技术不同之处在于：本专利技术核桃花中黄酮类化学成分的分析方法首次对其用UHPLC-Triple-TOF-MS进行分析测定，为核桃花中化学成分鉴定提供了一种快速、高效的鉴定方法，同时为核桃花中化学成分的药效物质基础研究与质量控制提供技术参考。下面结合附图对本专利技术的核桃花中黄酮类化学成分的分析方法作进一步说明。附图说明图1为本专利技术实施例中36种化合物提取离子流图。具体实施方式一、仪器与材料核桃花样品经北京中医药大学雷海民教授鉴定为胡桃科胡桃属植物核桃花柱；甲醇、甲酸为色谱纯(美国PA公司)，水为Milli-Q超纯水，其余试剂均为分析纯(北京化工厂公司)。UPLC-Triple-TOF/MS系统：ExionLCTMAD型高效液相色谱仪(美国ABSCIEX公司)，TripleTOF5600+质谱仪，配有ESI离子源(美国ABSCIEX公司)二、核桃花中黄酮类化学成分的检测方法：1、色谱及质谱条件色谱条件色谱柱为ACQUITYBEHC18(100mm×2.1mm，1.7μm)；以0.1％甲酸-水为流动相A，以甲醇为流动相B，线性梯度洗脱，0～1min，20％～35％B；1min～5min，35％～80％B；5min～15min，80％～100％本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：采用乙醇加热回流方法提取核桃花药材，浓缩、复溶、超声、过滤后得到供试品溶液，将所述供试品溶液采用超高效液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱方法进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：采用乙醇加热回流方法提取核桃花药材，浓缩、复溶、超声、过滤后得到供试品溶液，将所述供试品溶液采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法进行检测。2.根据权利要求1所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：应用AnalystTF1.7.1软件对所述超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法中的色谱条件进行设定，参数设置如下：色谱柱为ACQUITYBEHC18，100mm×2.1mm，1.7μm；以0.1％甲酸-水为流动相A，以甲醇为流动相B，线性梯度洗脱，0～1min，20％～35％B；1min～5min，35％～80％B；5min～15min，80％～100％B；15min～17min，100％B；17.1min～20min,20％B，体积流量为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量10μL。3.根据权利要求2所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：应用AnalystTF1.7.1软件对所述超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法中的质谱条件进行设定，参数设置如下：UPLC-Triple-TOF5600+飞行时间液质联用仪：正离子扫描模式；扫描范围：m/z100～1200；离子源温度：15℃；离子源电压：4500V；去溶剂气N2：110psi；去溶剂气温度：600℃；气帘气N2：35psi；一级扫描：去簇电压DP：80V；二级扫描：使用TOFMS～ProductIon～IDA模式采集质谱数据，CID能量为20～50eV。4.根据权利要求3所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：所述供试品溶液制备具体包括如下步骤：取核桃花药材1.0g至50mL烧瓶，50mL50％乙醇加热回流提取2次，第一次提取30min，第二次提取1h，过滤，合并两次滤液，减压浓缩至干，5mL甲醇复溶，超声30min，用甲醇补齐至原总重量，0.22μm微孔滤膜过滤，并保存在4℃冰箱中作为供试液。5.一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法，其特征在于：包括如下步骤：采用权利要求3的方法对核桃花中黄酮类化学成分进行检测，获得化合物的总离子流图、一级质谱信息以及二级质谱信息，并应用PeakView2.2软件对检测结果中的化学成分信息进行分析，所述PeakView2....

【专利技术属性】
技术研发人员：马强，闫萌萌，孙永飞，陈萌，白桦，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，北京鑫民和医药研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京,11