一种表达α‑氨基酸酯酰基转移酶的重组工程菌及其构建方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种表达α‑氨基酸酯酰基转移酶的重组工程菌及其构建方法和用途，本发明专利技术基因工程菌与现有技术的区别在于：是由克隆得到的saet‑QC基因插入到表达载体pET28a(+)中得到的重组表达质粒pET28a(+)/saet‑QC，于宿主菌E.Coli BL21(DE3)中转化得到的重组工程菌saet‑QC 01，它具有表达α‑氨基酸酯酰基转移酶且酶活较高的特性。

【技术实现步骤摘要】
一种表达α-氨基酸酯酰基转移酶的重组工程菌及其构建方法和用途
本专利技术涉及一种基因工程菌及其表达方法和用途，特别涉及大肠杆菌构建的基因工程菌和用途，具体是一种表达α-氨基酸酯酰基转移酶基因工程菌。
技术介绍
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Alanyl-glutamine，Ala-Gln)，简称丙谷二肽，是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺脱水缩合形成的二肽，其分子式为C8H15N3O4，分子量为217.22，丙谷二肽具有高热稳定性和高水溶性(586g/L，20℃)，在体内能够迅速地分解为L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，具有不同于L-谷氨酰胺的理化性质，丙谷二肽克服了L-谷氨酰胺的溶解度低、热不稳定性等缺点，并能够被有效利用(血液及尿液中仅能检测到少量丙谷二肽)。常常被用作L-谷氨酰胺的替代品而应用于临床。因此采用与谷氨酰胺具有相同代谢效应且稳定性好的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺作为注射液，不但在以往的研究中获得肯定，而且已经成为目前国内外公认的替代谷氨酰胺的方法。Yokozeki等从765株细菌，206株酵母中筛选出了E.brevisATCC14234作为丙谷二肽的高产菌。Isao等研究了E.brevi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种α‑氨基酸酯酰基转移酶重组工程菌，其特征在于：是由克隆得到的α‑氨基酸酯酰基转移酶基因(saet‑QC)插入到表达载体pET28a(+)中得到的重组表达质粒pET28a(+)/saet‑QC，于宿主菌E.Coli BL21(DE3)中转化得到的重组工程菌saet‑QC 01。

【技术特征摘要】
1.一种α-氨基酸酯酰基转移酶重组工程菌，其特征在于：是由克隆得到的α-氨基酸酯酰基转移酶基因(saet-QC)插入到表达载体pET28a(+)中得到的重组表达质粒pET28a(+)/saet-QC，于宿主菌E.ColiBL21(DE3)中转化得到的重组工程菌saet-QC01。2.一种权利要求1所述的重组工程菌的构建方法，包括引物设计、构建重组表达质粒和宿主菌转化，其特征在于：所述引物设计是根据已克隆得到的α-氨基酸酯酰基转移酶基因序列和载体pET28a(+)的序列特征，借助PrimerPremier5.0软件设计引物如下：正向引物：5’CGGGGATCCATGAAGAACACCATCTCCTG3’，反向引物：5’CCCAAGCTTATCTTTCAGAACAGAAAATTC3’；所述构建重组表达质粒是以已经合成的由鞘氨醇杆菌中克隆的α-氨基酸酯酰基转移酶基因序列经过密码子优化后基因为模板，利用PCR扩增技术，得到含BamHI和HindIII酶切位点的基因克隆产品，将所述基因克隆产品用BamHI和HindIII双酶切，将酶切产物连接到载体pET28a(+)的双酶切位点上，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪斌，刘鹏飞，秦川，胡雪芹，
申请(专利权)人：合肥工业大学，合肥川迪医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34