生产左旋多巴大肠杆菌重组菌株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供一种生产左旋多巴的大肠杆菌(Escherichia coli)重组菌株T002，其通过上调3‑脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达而增强3‑脱氢莽草酸脱氢酶酶活，进而可生产左旋多巴。该菌株可以利用葡萄糖无机盐培养基发酵生产左旋多巴，降低了培养基成本，从而降低了左旋多巴的生产成本。且上述重组菌株不含质粒，遗传性稳定。

Recombinant strains of Escherichia coli producing levodopa and its construction method and Application

The invention provides a method for producing levodopa Escherichia coli (Escherichia coli) recombinant strain T002, which increased 3 dehydrogenase by shikimate dehydrogenase (aroE) expression increased 3 3-Dehydroshikimic acid dehydrogenase activity, and can produce levodopa. The strain can be fermented by glucose inorganic salt medium to produce levodopa, which reduces the cost of culture medium and reduces the production cost of levodopa. The recombinant strain has no plasmid and has a stable heredity.

【技术实现步骤摘要】
生产左旋多巴大肠杆菌重组菌株及其构建方法与应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及生产左旋多巴重组大肠杆菌及其构建方法与应用。
技术介绍
左旋多巴(L-DOPA)又名3-羟基-L-酪氨酸，是一种在医药卫生、保健美容等诸方面有显著功效的氨基酸衍生物。自1908年以来，世界各国将其广泛应用于临床。目前左旋多巴是治疗震颤麻痹最有效的药物。它通过血脑屏障进入脑组织，发挥作用。适用于原发性震颤麻痹症及非药原性震颤麻痹综合征。同时它对强直、运动障碍、流涎、动脉危象等均有疗效。左旋多巴是由酪氨酸形成儿茶酚胺的中间产物，即多巴胺的前体。被吸收入血的L-多巴约95％被外围组织中多巴脱羧酶脱羧，形成儿茶酚胺，不易通过血脑屏障，反而引起许多不良反应。仅有1％的L-多巴进入脑循环，到达中枢神经系统，转变为儿茶酚胺发挥治疗作用。L-DOPA及复方左旋多巴(如美多芭)治疗常见老年病帕金森氏病己有40多年的历史，至今仍是治疗帕金森病最有效的药物，且耐受性好，不但能改善运动迟缓，缓解主要症状，而且能延长帕金森病患者的寿命。据统计，普通人群帕金森病的发病率为0.1％，60岁以上老人的发病率为1％，80岁以上的发病率本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产左旋多巴的大肠杆菌(Escherichia coli)重组菌株T002，其通过上调3‑脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达而增强3‑脱氢莽草酸脱氢酶酶活。

【技术特征摘要】
1.生产左旋多巴的大肠杆菌(Escherichiacoli)重组菌株T002，其通过上调3-脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达而增强3-脱氢莽草酸脱氢酶酶活。2.如权利要求1所述的重组菌株T002，其是通过上调大肠杆菌重组菌株WJ060中的3-脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达而制得，其中所述重组菌株WJ060的保藏编号为CGMCCNo.14602。3.如权利要求2所述的重组菌株T002，其通过敲除和/或替换调控元件P1(P1位于aroE起始密码子上游，其序列如SEQIDNO:1所示)而上调3-脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达，优选地，重组菌株T002通过替换调控元件P1而上调3-脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达；优选地，重组菌株T002通过调控元件P2和/或P3和/或P4替换调控元件P1而上调3-脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达；优选地，重组菌株T002通过在aroE起始密码子上游插入调控元件P2和/或P3和/或P4而上调3-脱氢酶莽草酸脱氢酶(aroE)的表达；优选地，在aroE起始密码子ATG上游插入调控元件P2和/或P3和/或P4；优选地，所述调控元件P2的序列如SEQIDNO:2所示；调控元件P3的序列如SEQIDNO:3所示；调控元件P4的序列如SEQIDNO:4所示；优选地，在aroE起始密码子ATG上游插入调控元件P4。4.如权利要求1-3中任一项所述的重组菌株T002，所述aroE的起始密码子TTG替换为密码子ATG。5.权利要求1-4中任一项所述的重组菌株T002的构建方法，包括如下步骤：通过同源重组方法，在3-脱氢莽草酸脱氢酶aroE起始密码子上游插入调控元件P2和/或P3和/或P4；优选地，在3-脱氢莽草酸脱氢酶aroE起始密码子ATG上游插入调控元件P2和/或P3和/或P4；优选地，调控元件P2的序列如SEQIDNO:2所示；调控元件P3的序列如SEQIDNO:3所示；调控元件P4的序列如SEQIDNO:4所示；优选地，插入调控元件P4；以及任选地，用密码子ATG替换原始起始密码子TTG来上调aroE的表达。6.权利要求1-4中任一项所述的重组菌株T002或由其传代而产生的菌株或权利要求5所构建的重组菌株T002或由其传代而产生...

【专利技术属性】
技术研发人员：王钦宏，陈五九，曹鹏，彭彦峰，吴凤礼，张媛媛，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12