一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法技术

本发明专利技术提供了一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，包括以下步骤：菌体分离培养、一级种子平板培养、二级种子固体培养、稳定处理、三级种子固体培养、规模固体培养；所述二级种子固体培养，将麸皮和玉米粉按10‑1:1的比例混合得料，水和料按1：1‑10比例混合，灭菌，接种孢子悬浮液，待料表面全部变白后，3天翻料一次，移入室温条件下继续培养10d；所述稳定处理：将二级种子放入恒温箱，以0.5‑1℃的升温速率升温至28℃，然后以0.5‑1℃的降温速率降温至‑4℃，再升温至25℃；本发明专利技术所述的生产方法得到的一种淡紫拟青霉菌剂，有效孢子量为2.0‑2.2×10

A method of producing solid Paecilomyces culture

The invention provides a production method of solid Paecilomyces culture, which comprises the following steps: isolation, primary seed plate cultivation and two stage seed processing, solid culture and stable solid culture, three stage seed scale solid culture mycelia; the two stage seed solid culture, the bran and corn powder according to the proportion of 10 1:1 mixed material, and water mixture, according to the proportion of 10 1:1 sterilization, inoculation with spore suspensions for material surface all become white after 3 days feeding time, continue to develop 10d into the room temperature; the stability of treatment: the two stage seed into the oven, the heating heating rate 0.5 1 C to 28 C, and 0.5 to 1 DEG C cooling rate cooling to 4 DEG C, and then heated to 25 DEG C; get the production method of a Paecilomyces spore, effective volume of 2 2.2 * 10

【技术实现步骤摘要】
一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法
本专利技术属于微生物农业
，涉及一种淡紫拟青霉菌剂的培养方法，具体涉及一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法。
技术介绍
淡紫拟青霉作为一种生物防治菌剂，在防治蔬菜、水果花卉的根结线虫病和青枯病、黄枯萎病、根腐病等根部死棵病方面效果非常优秀。市场销售上的淡紫拟青霉菌剂采用液体发酵培养和固体吸附烘干的生产方法，虽然生产菌剂的纯度和孢子含量很高，但是生产成本和销售价格以及每亩土地的防治成本也很高，致使淡紫拟青霉菌剂难以推广。
技术实现思路
本专利技术针对以上不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法。本专利技术可以实现以下专利技术目的：本专利技术的生产方法简单，生产成本极低，纯度和孢子含量高，杂菌少，脱落率低，稳定性高，在蔬菜和花卉方面的应用效果显著。为解决上述技术问题，采用以下技术方案：一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：菌体分离培养、一级种子平板培养、二级种子固体培养、稳定处理、三级种子固体培养、规模固体培养。一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：1）菌体分离培养：用淡紫拟青霉菌株在PDA培养基上培养，并进行转管培养；2）一级种子平板培养：向转管培养后的菌种管中加入含吐温80的无菌水，制成孢子悬浮液，吸取孢子悬浮液接到PDA平板培养基上在温箱里培养；3）二级种子固体培养：将麸皮和玉米粉混合得料，水和料混合，灭菌；接种孢子悬浮液后培养，待料表面全部变白后，移入室温条件下继续培养；4）稳定处理：将二级种子放入恒温箱，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，再升温至25℃；5）三级种子固体培养：将二级种子菌种和水、料混合，连续培养2-10天；6）规模固体培养：所述的规模培养，包括培养料的准备、混合方法、平面培养和粉粹包装。作为本专利技术优选的技术方案，所述稳定处理，将二级种子放入恒温箱，22℃保持45min后，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，恒温40min，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，恒温15min，再以1.5-2℃的升温速率升温至25℃，保持恒温。作为本专利技术优选的技术方案，其特征在于，所述二级种子固体培养，将麸皮和玉米粉按10-1:1的比例混合得料，水和料按1：1-10比例混合，灭菌；接种孢子悬浮液，置于25℃温箱培养，待料表面全部变白后，3天翻料一次，移入室温条件下继续培养10d。作为本专利技术优选的技术方案，所述三级种子固体培养，将麸皮和玉米粉按10-1:1的比例混合，二级种子淡紫拟青霉菌种和水、料按1：10-100:1-100的比例混合，然后将培养料铺在瓷盘上，在室温条件下培养，控制好温度，连续培养2-10天，然后封闭阴干后粉粹，包装存放。作为本专利技术优选的技术方案，所述三级种子固体培养，培养料铺在瓷盘上的厚度为1-10cm。作为本专利技术优选的技术方案，所述平面培养，将混合后的培养料摊铺在平整的地面上，厚度为1-10cm，在18-28℃条件下进行发酵培养；1天后和培养基干燥结块，在培养基内布满白色菌丝后翻动一次，连续培养2-10天后，进行通风阴干。作为本专利技术优选的技术方案，所得到的一种淡紫拟青霉菌剂，有效孢子量为2.0-2.2×108cfu/g，杂菌率≤0.1%，脱落率≤3%。本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：（1）本专利技术生产的淡紫拟青霉菌剂的有效孢子量为2.0-2.2×108cfu/g，杂菌率≤0.1%，脱落率≤3%。在本专利技术生产的淡紫拟青霉菌剂高效、低毒，杀虫效果稳定，且对人畜和作物安全，安全性高。（2）本专利技术的生产方法工艺简单，生产成本极低，纯度和孢子含量高，具有很高的经济价值和社会价值。具体实施方式实施例1一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法本专利技术提供了一种生产工艺简单，生产成本极低，纯度和孢子含量高的淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，本专利技术的一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，包括以下步骤：1、菌体分离培养用常规组织分离法分离出淡紫拟青霉菌株，在PDA培养基上进行培养，并进行转管培养。2、一级种子平板培养向转管培养后的菌种管中加入含有少量吐温80的无菌水，制成孢子悬浮液；吸取1ml孢子悬浮液接到PDA平板培养基上，在25℃的温箱里培养15d。3、二级种子固体培养将麸皮和玉米粉按10-1:1的比例混合得料，水和料按1：1-10比例混合，装到罐头瓶子的1/3处，大约50g左右，灭菌；在每瓶中加入10ml步骤2中配制好的孢子悬浮液，置于25℃温箱培养，待料表面全部变白后，3天翻料一次，移入室温条件下继续培养10d。4、稳定处理将步骤3制备的二级种子放入恒温箱，22℃保持45min后，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，恒温40min，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，恒温15min，再以1.5-2℃的升温速率升温至25℃，保持恒温备用；在实际操作中专利技术人专利技术采用上述稳定处理后，二级种子菌体的稳定性明显提高，制备的二级种子中活菌含量60天内不减少。5、三级种子固体培养将麸皮和玉米粉按10-1:1的比例混合，二级种子菌种或者购买成品菌种或者购买的商品淡紫拟青霉菌剂和水、料按1：10-100:1-100的比例混合，然后将培养料铺在瓷盘上，厚度1-10cm，在室温条件下培养，控制好温度，连续培养2-10天，然后封闭阴干后粉粹，包装存放。6、规模固体培养①培养料的准备培养料一：麸皮：玉米粉以10-1:1比例；培养料二：烘干木薯渣：麸皮：玉米粉按10-1:10-1:1比例。②混合方法先将制作的三级种子菌种或者购买成品菌种或者购买的商品淡紫拟青霉菌剂与玉米粉按照1:5-100的比例搅拌混合，然后再与麸皮、木薯渣搅拌混合，混合后在加入适量的水，再进行搅拌混合。③平面培养将混合后的培养料摊铺在平整的地面上，厚度为1-10cm，在室温条件下（18-28℃）进行发酵培养；1天后和培养基干燥结块，在培养基内布满白色菌丝后翻动一次，连续培养2-10天后，进行通风阴干。④粉粹包装将发酵好的淡紫拟青霉菌块用粉粹机粉粹，粉粹后将菌粉平铺在地面上，厚度1-20cm，进行散热和阴干，得到本专利技术所述的淡紫拟青霉菌剂；阴干后装袋避光储存或销售。按照本专利技术实施例1所述的生产方法生产的淡紫拟青霉菌剂的有效孢子量为2.0-2.2×108cfu/g，杂菌率≤0.1%，脱落率≤3%。在本专利技术生产的淡紫拟青霉菌剂高效、低毒，杀虫效果稳定，且对人畜和作物安全，安全性高。实施例2本专利技术生产的淡紫拟青霉菌剂在黄瓜种植中的应用在实际生产应用中，专利技术人发现：在连续2年以上种植黄瓜的田块中，黄瓜生长中后期，生长缓慢，果实严重偏小，畸形率高，经检测，普遍存在重茬导致的黄瓜根的根尖腐烂以及根尖不长病症；将黄瓜种植区随机分为等面积的3个区域，每个区域50株；1区对应施用本专利技术实施例1的淡紫拟青霉菌剂，将本专利技术的淡紫拟青霉菌剂溶于水灌根施用，施用量为每株植物2g菌剂，每7天施用一次，共施用3次；2区对应施用对比例的淡紫拟青霉菌剂，所述的对比例为制备方法与本专利技术的实施例1相同，区别在于仅没有实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：菌体分离培养、一级种子平板培养、二级种子固体培养、稳定处理、三级种子固体培养、规模固体培养。

【技术特征摘要】
1.一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：菌体分离培养、一级种子平板培养、二级种子固体培养、稳定处理、三级种子固体培养、规模固体培养。2.一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：1）菌体分离培养：用淡紫拟青霉菌株在PDA培养基上培养，并进行转管培养；2）一级种子平板培养：向转管培养后的菌种管中加入含吐温80的无菌水，制成孢子悬浮液，吸取孢子悬浮液接到PDA平板培养基上在温箱里培养；3）二级种子固体培养：将麸皮和玉米粉混合得料，水和料混合，灭菌；接种孢子悬浮液后培养，待料表面全部变白后，移入室温条件下继续培养；4）稳定处理：将二级种子放入恒温箱，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，再升温至25℃；5）三级种子固体培养：将二级种子菌种和水、料混合，连续培养2-10天；6）规模固体培养：所述的规模培养，包括培养料的准备、混合方法、平面培养和粉粹包装。3.根据权利要求2所述的一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述稳定处理，将二级种子放入恒温箱，22℃保持45min后，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，恒温40min，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，恒温15min，再以1.5-2℃的升温速...

【专利技术属性】
技术研发人员：王友福，
申请(专利权)人：王友福，
类型：发明
国别省市：山东,37