一种灵芝菌丝体的发酵方法技术

本发明专利技术涉及一种灵芝菌丝体的发酵方法，属于真菌培养技术领域。本发明专利技术提供的灵芝菌丝体的发酵方法包括以下步骤：1)将活化后的灵芝菌种接种于液体发酵培养基中，23～26℃培养5～7d，通气量为0.6～1V/V·min，气压为0.03～0.06Mpa，得到发酵菌种；2)将步骤1)得到的发酵菌种接种于固体发酵培养基中进行暗培养，所述暗培养的时间为30～40d。本发明专利技术提供的灵芝菌丝体发酵方法将固体发酵与液体发酵技术相结合，具有生产规模大、生产周期短、生产工艺简便、有效成分含量高、产物回收率高的优点。

A method of fermentation of ganoderma mycelium

The invention relates to a fermentation method of Ganoderma lucidum mycelium, which belongs to the field of fungal culture. Fermentation method of Ganoderma lucidum mycelium provided by the invention comprises the following steps: 1) the ganoderma inoculation after activation in the liquid fermentation medium and cultured for 23 ~ 26 DEG C for 5 ~ 7d, the ventilation volume of 0.6 ~ 1V/V / min, the pressure is 0.03 ~ 0.06Mpa, fermentation bacteria; 2) in step 1) inoculation fermentation from the solid fermentation medium in dark culture, the dark culture time is 30 ~ 40d. The fermentation method of Ganoderma lucidum mycelium is combined with solid fermentation and liquid fermentation technology, and has the advantages of large production scale, short production cycle, simple production process, high effective ingredient content and high product recovery rate.

【技术实现步骤摘要】
一种灵芝菌丝体的发酵方法
本专利技术涉及真菌培养
，具体涉及一种灵芝菌丝体的发酵方法。
技术介绍
灵芝多糖具有抗肿瘤、提高免疫力、抗衰老、降血脂等多种生理功能，有较大的药用和保健价值，受到当今医药界和食品工业的共同关注，其制成的药物和保健品深受人们喜爱，具有广阔的开发前景。灵芝有效成分的提取方式包括：子实体提取、菌丝体提取，二者提取的成分有所差异，成分含量各有高低，都有其无法相互替代的特点。其中菌丝体提取所采用菌丝培养工艺包含：液体发酵培养与固体发酵培养，液体发酵最终是提取菌球以及浸出液浓缩物中的真菌多糖、蛋白等有效成分，优点是提取物的纯度或含量较高，应用在制备高效药物的方面较多，其缺点是发酵工艺要求高，投入高，提取工艺复杂、提取率较低。固体发酵的优点是投入低、工艺简便，产物回收率高，缺点是提取含量低，培养周期长，只能应用在常效类保健药物和保健品的方面。现有技术并没有一种高效的灵芝菌丝体的发酵方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵芝菌丝体的发酵方法。本专利技术提供的灵芝发酵方法将固体发酵与液体发酵技术相结合，具有生产规模大、生产周期短、生产工艺简便、有效成分含量高、产物回收率高的优点。本专利技术提供了一种灵芝菌丝体的综合发酵方法，包括以下步骤：1)将活化后的灵芝菌种接种于液体发酵培养基中，23～26℃培养5～7d，通气量为0.6～1V/V·min，气压为0.03～0.06Mpa，得到发酵菌种；所述液体发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：葡萄糖0.5～1％，豆粕0.1～0.2％，玉米粉0.1～0.2％，小麦粉0.1～0.2％，酵母膏0.1～0.3％，硫酸镁0.003～0.005％，磷酸二氢钾0.08～0.1％，复合维生素B0.001％和消泡剂0.03～0.05％，余量为水；2)将步骤1)得到的发酵菌种接种于固体发酵培养基中进行暗培养，所述暗培养的时间为30～40d。优选的是，所述步骤1)中活化后的灵芝菌种在液体发酵培养基中的接种量为0.1％～0.2％。优选的是，所述步骤1)得到的发酵菌种的生物量为(2.00±0.50)×10-2g/mL、菌球平均直径为1.00±0.10mm，菌球密度为120.00±2.00个/mL，pH值为5～6.5。优选的是，所述步骤2)的固体发酵培养基为菌包袋固体发酵培养基。优选的是，所述步骤2)中发酵菌种的接种量为50～100mL/kg。优选的是，所述固体发酵培养基中的碳氮比为(20～28)：1，含水量为42～50％，灭菌前培养基的pH值为7～8。优选的是，所述固体发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：大米5～10％，小麦10～15％，玉米粉35％～45％，玉米芯5～8％，豆粕5～10％，麸皮15～25％，氢氧化钙1～2％和轻质碳酸钙1～2％。优选的是，所述步骤2)暗培养的湿度为60～65％；所述暗培养包括以下4个阶段：第1～9d，所述暗培养的温度为25～26℃，CO2浓度为1000～1500ppm；第10～15d，所述暗培养的温度为23～24℃，CO2浓度为1500～2000ppm；第16～30d，所述暗培养的温度为24～25℃，CO2浓度为2000～3000ppm；第30d至培养完成，所述暗培养的温度为25～26℃，CO2浓度为1500～2000ppm。优选的是，所述步骤2)暗培养后还包括脱袋、切片和烘烤过程。本专利技术提供了一种灵芝菌丝体的综合发酵方法。本专利技术提供的灵芝菌丝体发酵方法将固体发酵与液体发酵技术相结合，综合了固体、液体发酵的优势，具有生产规模大、生产周期短、生产工艺简便、污染率低、有效成分含量高、产物回收率高的优点。有利于后续有效成分的高效提取和产物的回收。本专利技术的发酵方法相较于现有的固体发酵，有着生产规模大、生产周期短、污染率低的优点，相较于液体发酵培养，有生产工艺简便、有效成分含量高、产物回收率高的优点。所述综合发酵方法培养的菌丝体混合物，灵芝挥发油提取率高达0.03％，灵芝菌酸提取率达3.2％，含酸固体产品酸纯度可达25％以上，灵芝多糖提取率可达10.1％，多糖纯度可达45％以上。具体实施方式本专利技术提供了一种灵芝菌丝体的综合发酵方法，包括以下步骤：1)将活化后的灵芝菌种接种于液体发酵培养基中，23～26℃培养5～7d，通气量为0.6～1V/V·min，气压为0.03～0.06Mpa，得到发酵菌种；所述液体发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：葡萄糖0.5～1％，豆粕0.1～0.2％，玉米粉0.1～0.2％，小麦粉0.1～0.2％，酵母膏0.1～0.3％，硫酸镁0.003～0.005％，磷酸二氢钾0.08～0.1％，复合维生素B0.001％和消泡剂0.03～0.05％，余量为水；2)将步骤1)得到的发酵菌种接种于固体发酵培养基中进行暗培养，所述暗培养的时间为30～40d。本专利技术首先进行的是活化后灵芝菌种的制备。在本专利技术中，所述菌种的活化次数优选为2次，通过在活化培养基中进行培养得到一级菌种和二级菌种，本专利技术选取二级菌种作为活化后的灵芝菌种用于液体发酵培养。在本专利技术中，所述一级菌种活化培养基优选采用本领域技术人员熟知的加富马铃薯培养基，二级菌种活化培养基优选为每升水中包括葡萄糖：10～20g，蛋白胨：2～4g，酵母膏：1～2g，磷酸二氢钾：1～2g，七水硫酸镁：0.75～1.5g和复合维生素B：0.25～0.5g。本专利技术对所述灵芝菌种的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售灵芝菌种即可，本专利技术优选选取来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号为CGMCC5.743的灵芝菌种。本专利技术优选选取生长速度为5.5～6.5mm/d的菌丝作为一级菌种。本专利技术在一级菌种的选取过程中，优选选取菌落边缘整齐，洁白且强壮的菌株。本专利技术一级菌种的制备能够筛除出生长较弱的原始菌种，保证菌种的活性。本专利技术所述一级菌种培养的条件优选为22～28℃暗培养5～8d，更优选为23℃暗培养7d。得到一级菌种后，本专利技术优选选取一级菌种菌落边缘1.5～2.5mm的菌丝置于二级菌种活化培养基中进行培养，所述活化培养的条件优选为恒温振荡培养5～7d，选取生物量为1.5～2.5×10-2g/mL的菌种，作为二级菌种。本专利技术在恒温振荡培养前，优选将一级菌种在二级活化培养基中静置至菌丝块萌发，所静置的条件优选为黑暗条件下，23～25℃静置28～32h，更优选为24℃静置30h。在本专利技术中，所述振荡培养的温度优选为23～26℃，更优选为24℃。本专利技术振荡培养优选采用恒温摇床进行，所述摇床的转速优选为140～160r/min，更优选为150r/min。在本专利技术中，第二次活化培养能够保证菌种的同源性和同步性。在本专利技术中，第二次活化后得到的菌种优选大小、分布均匀，不下沉，球面长满绒毛，培养基颜色较灭菌后明显变浅且透明。现有的灵芝液体发酵技术中，容易产生次生代谢产物，而本方法严格通过两次菌种的活化、筛选，能够保证菌种的同源性和同步性，同时接种量按照本方法保证在0.1～0.2％，能够极大缩短液体发酵时间，保证发酵产物的活性同步达到峰值，有利于后续的固体发酵。得到活化后的灵芝菌种后，本专利技术将活化后的灵芝菌种接种于液体发酵培养基中，23～26℃培养5～7d，通气量为0.6～1V/V·min，气压本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝菌丝体的综合发酵方法，包括以下步骤：1)将活化后的灵芝菌种接种于液体发酵培养基中，23～26℃培养5～7d，通气量为0.6～1V/V·min，气压为0.03～0.06Mpa，得到发酵菌种；所述液体发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：葡萄糖0.5～1％，豆粕0.1～0.2％，玉米粉0.1～0.2％，小麦粉0.1～0.2％，酵母膏0.1～0.3％，硫酸镁0.003～0.005％，磷酸二氢钾0.08～0.1％，复合维生素B 0.001％和消泡剂0.03～0.05％，余量为水；2)将步骤1)得到的发酵菌种接种于固体发酵培养基中进行暗培养，所述暗培养的时间为30～40d。

【技术特征摘要】
1.一种灵芝菌丝体的综合发酵方法，包括以下步骤：1)将活化后的灵芝菌种接种于液体发酵培养基中，23～26℃培养5～7d，通气量为0.6～1V/V·min，气压为0.03～0.06Mpa，得到发酵菌种；所述液体发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：葡萄糖0.5～1％，豆粕0.1～0.2％，玉米粉0.1～0.2％，小麦粉0.1～0.2％，酵母膏0.1～0.3％，硫酸镁0.003～0.005％，磷酸二氢钾0.08～0.1％，复合维生素B0.001％和消泡剂0.03～0.05％，余量为水；2)将步骤1)得到的发酵菌种接种于固体发酵培养基中进行暗培养，所述暗培养的时间为30～40d。2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述步骤1)中活化后的灵芝菌种在液体发酵培养基中的接种量为0.1％～0.2％。3.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述步骤1)得到的发酵菌种的生物量为(2.00±0.50)×10-2g/mL、菌球平均直径为1.00±0.10mm，菌球密度为120.00±2.00个/mL，pH值为5～6.5。4.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述步骤2)的固体发酵培养基为菌包袋固体发酵培养基。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦路宁，
申请(专利权)人：湖南和平生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43