一种提高茯苓液体发酵菌丝体中茯苓酸产量的方法技术

本发明专利技术涉及一种提高茯苓液体发酵菌丝体中茯苓酸产量的方法，所述方法包括采用茯苓(Poria cocos)菌株ZJ2进行液体发酵，以及在茯苓发酵用液体种子培养基和/或液体发酵培养基中加入马尾松浸提物、纤维素和复合维生素B。利用本发明专利技术提供的方法可以实现茯苓菌丝体产量的最优最大化，同时提高菌丝体中茯苓酸的含量，可工业化生产茯苓酸，不仅解决了利用松树兜来栽培茯苓菌核对野生松林资源的破坏，而且为将来茯苓药食用价值的综合开发和工厂化生产奠定基础和提供技术保障；本发明专利技术工艺简单、有效、发酵周期短、在工业化生产中具有应用价值，可成功实现明显提高表达产物产量的目的。

Method for improving yield of tuckahoe in liquid fermented mycelia of Poria cocos

The invention relates to a method for improving the yield of pachymic acid in Poria mycelium liquid fermentation, the method includes using Fuling (Poria cocos) strain ZJ2 by liquid fermentation, and the fermentation liquid in Fuling seed medium and / or liquid fermentation culture medium adding pine extract, cellulose and vitamin B complex. The method provided by the invention can realize the maximization of the optimal yield of Poria cocos mycelia, and increase the content of pachymic acid in mycelia, the industrialized production of pachymic acid, not only solved by pocket to check pine tuckahoe cultivation bacteria wild pine resources destruction, and lay the foundation and provide technical support for the comprehensive development of the Fuling drugs the edible value and factory production; the process of the invention is simple, effective, short fermentation period and has application value in industrial production, can successfully improve the expression product yield to.

【技术实现步骤摘要】
一种提高茯苓液体发酵菌丝体中茯苓酸产量的方法
本专利技术涉及药用真菌液体发酵领域，尤其涉及一种提高茯苓液体发酵菌丝体中茯苓酸产量的方法。
技术介绍
茯苓属药用真菌，不仅具有医疗保健作用，还可以食用，是我国传统的名贵中药材和历史悠久的食品。茯苓味甘、淡、平，具有利水渗湿、健脾补中、宁心安神等功效。茯苓酸是茯苓特有的一种四环三萜化合物，也是茯苓的主要活性成分之一，具有多种与药效有关的药理活性。据研究报道茯苓酸在干燥茯苓菌核中的含量在0.1462％-0.2996％。茯苓酸具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降血糖、镇静催眠等方面的作用。目前茯苓酸主要来源于茯苓菌核，而利用松树兜来栽培茯苓菌核对松林破坏严重。开发研究新方法来获取茯苓酸十分必要。CN104357524A公开了一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基，表明了一套测定纯小麦栽培料培养过程中的总三萜、多糖和三萜酸的方法与步骤，通过该方法测定的固体栽培料在培养到25天使三萜酸达到最大量，其中胞外三萜酸高达130mg/L，是液体发酵胞外三萜酸浓度的2倍以上。然而，其发酵周期较长，不利于加快工业化生产。因此，如何研发一种发酵周期短、茯苓菌丝体和茯苓酸产量高的培养方法已成为目前亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高茯苓液体发酵菌丝体中茯苓酸产量的方法，利用该方法可以实现茯苓菌丝体产量的最大化，同时提高菌丝体中茯苓酸的含量，可工业化生产茯苓酸，不仅解决了利用松树兜来栽培茯苓菌核对野生松林资源的破坏，而且为将来茯苓药食用价值的综合开发和工厂化生产奠定基础和提供技术保障。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种茯苓(Poriacocos)菌株ZJ2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏日期为2016年1月15日，保藏编号为GDMCCNo.60007。该菌为多孔科菌真菌，菌丝为多核菌丝体，无锁状联合，粗壮分枝少，具有明显的隔膜。该菌在马铃薯葡萄糖琼脂平板上的生长状态为：5-7天菌丝铺满直径为75mm的平板，具有茯苓特有的芳香味。培养基基底黄色，菌丝乳白色，气生菌丝发达，爬壁能力强，常有网状交联，交联处有细小淡黄色水珠，形成菌索。本专利技术所述茯苓菌株ZJ2经分子生物学技术鉴定，包括进行ITS-PCR扩增和测序，将获得的序列与Genbank中所登录的茯苓序列比对，与茯苓(Poriacocos)相似性为99％。第二方面，本专利技术还提供了一种茯苓发酵用液体种子培养基，以每升计，所述液体种子培养基的组成为：马铃薯150-200g，葡萄糖5-10g，纤维素5-10g，马尾松根浸提物20-30g，甘油1-3g，(NH4)2SO42-3g，MgSO4·7H2O1.5-2g，KH2PO42-4g，复合维生素B0.1-0.2g，其余为水；并调节pH至6.5-7。本专利技术所提供的茯苓发酵用液体种子培养基中，由于在原料中增加了马尾松浸提物、纤维素和复合维生素B组分，三者产生协同增效作用，可以大幅增加茯苓菌丝体产量，同时提高菌丝体中茯苓酸的含量，并解决了利用松树兜来栽培茯苓菌核而带来的对野生松林资源破坏的技术问题。根据本专利技术，以每升计，所述马铃薯的含量为150-200g，例如150g、155g、160g、165g、170g、175g、180g、185g、190g、195g或200g；所述葡萄糖的含量为5-10g，例如5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g或10g；所述纤维素的含量为5-10g，例如5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g或10g；所述马尾松根浸提物的含量为20-30g，例如20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g或30g；所述甘油的含量为1-3g，例如1g、1.2g、1.5g、1.8g、2g、2.3g、2.5g、2.8g或3g；所述(NH4)2SO4的含量为2-3g，例如2g、2.3g、2.5g、2.8g或3g；所述MgSO4·7H2O的含量为1.5-2g，例如1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g或2g；所述KH2PO4的含量为2-4g，例如2g、2.3g、2.5g、2.8g、3g、3.3g、3.5g、3.8g或4g；所述复合维生素B的含量为0.1-0.2g，例如0.11g、0.12g、0.15g、0.18g、0.19g或0.2g。本专利技术中，所述茯苓发酵用液体种子培养基，以每升计，所述液体种子培养基优选的组成为：马铃薯180-200g，葡萄糖8-10g，纤维素5-8g，马尾松根浸提物25-30g，甘油1-2g，(NH4)2SO42-2.5g，MgSO4·7H2O1.5-1.8g，KH2PO42-2.5g，复合维生素B0.12-0.18g，其余为水；并调节pH至6.5-6.8。本专利技术中，所述茯苓发酵用液体种子培养基，以每升计，所述液体种子培养基进一步优选的组成为：马铃薯200g，葡萄糖10g，纤维素5g，马尾松根浸提物30g，甘油1g，(NH4)2SO42g，MgSO4·7H2O1.5g，KH2PO42.5g，复合维生素B0.14g，其余为水；并调节pH至6.5。根据本专利技术，所述马尾松浸提物可以采用如下方法进行制备：将马尾松树根洗净放入干燥箱中，在40-45℃下干燥至恒重，粉碎后，过30-40目筛；称取20-30g马尾松根粉末放入容器中，加入2-3倍体积的蒸馏水，加热煮沸后，小火煎熬20-40min，纱布过滤除去沉淀；滤液经6000-8000r/min离心5-15min后，取上清液，得到所述马尾松浸提物。示例性地，所述马尾松浸提物具体采用如下方法进行制备：将马尾松树根洗净放入干燥箱中，在40℃下干燥至恒重，粉碎后，过40目筛；称取30g马尾松根粉末放入500mL的烧杯中，加入2-3倍体积的蒸馏水，加热煮沸后，小火煎熬30min，纱布过滤除去沉淀，滤液经6000r/min离心10min后，把上清液定容至相当于含原材料30g/L，得到所述马尾松浸提物。本专利技术中的马尾松浸提物优选采用上述方法制得，但并非仅限该方法，只要本领域技术人员根据公知技术可实现对马尾松树根的浸提即可。根据本专利技术，所述纤维素，例如可以是食品级的微晶纤维素，其粒径为20-80μm，极限聚合度≤350。但并非仅限于此，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择。根据本专利技术，所述复合维生素B是指：每0.1g复合维生素B中含有维生素B13mg，维生素B21.5mg，维生素B60.2mg，烟酰胺10mg和泛酸钙1mg。根据本专利技术，所述茯苓发酵用液体种子培养基可以应用于第一方面所述茯苓(Poriacocos)菌株ZJ2的液体发酵培养，也可应用于其它公知的茯苓菌株，其对于实现茯苓菌丝体产量的增加，同时提高菌丝体中茯苓酸的含量都起到至关重要的作用。第三方面，本专利技术还提供了一种茯苓发酵用液体发酵培养基，以每升计，所述液体发酵培养基的组成为：葡萄糖20-30g，纤维素5-10g，马尾松根浸提物20-30g，甘油1-3g，(NH4)2SO42-3g，MgSO4·7H2O1.5-2g，KH2PO41-2g，KNO31-2g，复合维本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茯苓(Poria cocos)菌株ZJ2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期为2016年1月15日，保藏编号为GDMCC No.60007。

【技术特征摘要】
1.一种茯苓(Poriacocos)菌株ZJ2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期为2016年1月15日，保藏编号为GDMCCNo.60007。2.一种茯苓发酵用液体种子培养基，其特征在于，以每升计，所述液体种子培养基的组成为：马铃薯150-200g，葡萄糖5-10g，纤维素5-10g，马尾松根浸提物20-30g，甘油1-3g，(NH4)2SO42-3g，MgSO4·7H2O1.5-2g，KH2PO42-4g，复合维生素B0.1-0.2g，其余为水；并调节pH至6.5-7。3.一种茯苓发酵用液体发酵培养基，其特征在于，以每升计，所述液体发酵培养基的组成为：葡萄糖20-30g，纤维素5-10g，马尾松根浸提物20-30g，甘油1-3g，(NH4)2SO42-3g，MgSO4·7H2O1.5-2g，KH2PO41-2g，KNO31-2g，复合维生素B0.1-0.2g，其余为水；并调节pH至6.5-7。4.一种提高茯苓液体发酵菌丝体中茯苓酸产量的方法，其特征在于，所述方法包括：采用如权利要求1所述的茯苓(Poriacocos)菌株ZJ2进行液体发酵；优选地，在茯苓发酵用液体种子培养基和/或液体发酵培养基中加入马尾松浸提物；以每升培养基计，所述马尾松浸提物的加入量优选为20-30g；进一步优选地，在茯苓发酵用液体种子培养基和/或液体发酵培养基中还加入纤维素和复合维生素B；以每升培养基计，所述纤维素的加入量优选为5-10g；所述复合维生素B的加入量优选为0.1-0.2g。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求2所述的茯苓发酵用液体种子培养基和/或如权利要求3所述的茯苓发酵用液体发酵培养基；优选地，所述马尾松浸提物采用如下方法制备得到：将马尾松树根洗净放入干燥箱中，在40-45℃下干燥至恒重，粉碎后，过30-40目筛；称取20-30g马尾松根粉末放入容器中，加入2-3倍体...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹娟，胡兴，刘胜贵，彭程，吴清旻，
申请(专利权)人：怀化学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43