一种冬虫夏草液体培养基及利用培养基培养冬虫夏草的方法技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，公开了一种冬虫夏草液体培养基，其按照如下工艺制备而得：取纤维状物质50‑60g，酒糟水解物50‑60g，土豆浸出液70‑80g，葡萄糖30‑40g，硫酸镁2克、链霉素1克、青霉素1克、维生素B1 0.01g，添加到容器中，然后加水定容至1L，调节pH为6.5‑6.8，高压锅内灭菌，温度达到121℃时保压15min，出锅，冷却至室温，即得。本发明专利技术还公开了利用上述的液体培养基培养冬虫夏草的方法。本发明专利技术培养基配伍合理，成本低廉，栽培的产品质量大大提高。

A liquid culture medium for Cordyceps sinensis and the method of culture medium for Cordyceps sinensis

The invention belongs to the technical field of the microorganism, discloses a liquid culture medium of Cordyceps sinensis, which is prepared according to the following process: fibrous material 50 60g, 50 60g Lees Hydrolysate, potato extract 70 glucose 30 80g, 40g, Magnesium Sulfate 2 grams, 1 grams, 1 grams of streptomycin, penicillin vitamin B1 0.01g, added to the container, then adding water volume to 1L, pH was adjusted to 6.5 6.8, autoclave sterilization, the temperature reached 121 degrees when holding 15min, pan, cooling to room temperature, namely. The invention also discloses a method for the cultivation of Cordyceps sinensis by using the liquid medium. The culture medium of the invention is reasonable, the cost is low, and the quality of the cultivated products is greatly improved.

【技术实现步骤摘要】
一种冬虫夏草液体培养基及利用培养基培养冬虫夏草的方法
本专利技术属于微生物领域，具体的说是涉及一种冬虫夏草液体培养基及利用培养基培养冬虫夏草的方法。
技术介绍
冬虫夏草是冬虫夏草菌(Cordycepssinensis)感染并寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上长出的子座（子实体）及幼虫虫体的复合体，属于可食用的真菌，是我国一种传统的名贵滋补中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。蝙蝠蛾幼虫被冬虫夏草菌(Cordycepssinensis)感染，菌丝充满整个虫体组织，结成坚硬的假菌核，在冬季低温干燥土壤内保持虫形不变达数月之久（冬虫），待夏季温湿适宜时从菌核长出棒状子实体（子座）并露出地面（夏草），因此得名冬虫夏草。野生的冬虫夏草仅生长在青藏高原海拔3000-5000米的高山草甸、高原草甸等高寒植被中，由于近年来过度采挖使其产量下降，其价格与20多年前相比已经上涨了1000多倍。因此，我国科研人员一直在进行利用冬虫夏草菌的无性型人工发酵菌丝和培植子实体来替代野生冬虫夏草的产业化研究（即模拟虫体营养成分做成培养基接种冬虫夏草菌的无性型-中国被毛孢菌丝，形成有性型-子实体），力图让昂贵的冬虫夏草能够走进寻常百姓家。目前国内许多个人和单位研究和公开冬虫夏草培养基和发酵生产方法，但是，这些技术多采用微生物发酵常用培养基，基本上以蛋、奶、马铃薯作为发酵食源，虽然都是按照微生物学的发酵原理使菌种能够生长，但食源的不同必然造成菌丝体的性质有所差异，而且培养基成本较高，所生产的冬虫夏草发酵产品在化学成分和活性物质与天然冬虫夏草有差异，因而现有技术中培育出的冬虫夏草普遍存在质量差，营养成分含量较低的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种冬虫夏草液体培养基及利用培养基培养冬虫夏草的方法。本专利技术解决该技术问题的技术方案是：一种冬虫夏草液体培养基，其按照如下工艺制备而得：取纤维状物质50-60g，酒糟水解物50-60g，土豆浸出液70-80g，葡萄糖30-40g，硫酸镁2克、链霉素1克、青霉素1克、维生素B10.01g，添加到容器中，然后加水定容至1L，调节pH为6.5-6.8，高压锅内灭菌，温度达到121℃时保压15min，出锅，冷却至室温，即得。具体地，所述纤维状物质的制备方法包括如下步骤：将锯末和秸秆粉混合，然后放入浓度为2-3mol/L的NaOH溶液中浸泡3-5h，捞出丝状纤维，放清水中高速搅拌漂洗2-3遍，然后置于60-70℃烘干，得到纤维状物质。具体地，所述酒糟水解物的制备方法包括如下步骤：将酒糟投入到反应器中，然后添加两倍重量的浓度为5mol/L的盐酸，300rpm搅拌水解2小时，然后添加氨水，调节溶液的pH为6.5-7.0，即得酒糟水解物。具体地，所述土豆浸出液的制备方法包括如下步骤：将土豆去皮，切成块状，然后添加到两倍重量的蒸馏水中，煮沸30min，自然冷却，然后用纱布过滤，收集滤液，即得土豆浸出液。本专利技术还公开了利用上述液体培养基培养冬虫夏草的方法，包括如下步骤：第一步：冬虫夏草一级母种斜面培养；第二步：冬虫夏草一级母种斜面的扩大培养获得冬虫夏草二级母种；第三步：冬虫夏草液体菌种的培养：将冬虫夏草二级母种转接到所述液体培养基中，接种后放到恒温箱里在25℃，恒温培养3天，然后转移到磁力搅拌机上在25℃振荡培养20天，得冬虫夏草液体菌种；第四步：冬虫夏草的栽培。进一步地，所述方法包括如下步骤：第一步、冬虫夏草一级母种斜面培养：(1)、培养基配方：玉米200克、小麦200克、磷酸二氢钾4克、葡萄糖20克、硫酸镁1克、蛋白胨20克、链霉素1克、青霉素1克，琼脂20克、维生素B10.01g、水1000毫升；(2)、配制方法：将洗净玉米、小麦，加水1000毫升，大火烧开小火煮沸40分钟，用纱布滤去玉米跟小麦的残渣，取汁液于锅中加入磷酸二氢钾4克、葡萄糖20克、硫酸镁1克、蛋白胨20克、链霉素1克、青霉素1克，琼脂20克、维生素B10.01g并搅拌均匀，继续加热至琼脂完全溶化，趁热迅速分装试管，试管规格采用16厘米长×口径16毫米，每个试管装培养基的量与试管的体积比是1：5，装完后塞上硅胶塞，然后把试管每10支扎成一捆，用报纸包好，外层用聚丙烯塑料布包好放入高压锅灭菌，加热到压力达到0.5Kg/m2时，开排气阀，排出冷空气，使指针回到0点，然后关上排气阀继续加热至121℃时保压40分钟出锅，并趁热把试管摆成斜面，冷却后得固体试管斜面备用；(3)、菌种分离培养：将新鲜健壮子座饱满含有孢子粉的青海玉树野生冬虫夏草清洗后用70%乙醇溶液对其进行消毒处理，再用无菌水清除其表面的乙醇，冬虫夏草表面消毒处理后，用无菌刀片切去冬虫夏草子座的外层，用接种刀切取其内部组织1立方毫米的小块迅速移接到试管斜面上，并迅速塞上硅胶塞，然后放入25℃的恒温箱中培养12天即得冬虫夏草一级母种斜面；第二步、冬虫夏草二级母种斜面的扩大培养：将分离的一级母种斜面试管再进行扩大培养，得二级母种斜面试管，二级母种斜面试管的培养基与一级母种斜面试管的培养基相同，移接时严格无菌操作，一支一级母种斜面试管移接30-50支二级母种斜面试管，接种完毕后放入25℃的恒温箱中培养10天即得冬虫夏草二级母种；第三步、冬虫夏草液体菌种的培养：转接过程是将冬虫夏草二级母种转接到所述液体培养基中，接种后放到恒温箱里在25℃，恒温培养3天，待液体菌种培养液面上的母种块长到直径为2cm的菌块时，就将盐水瓶转移到磁力搅拌机上在25℃振荡培养20天，得冬虫夏草液体菌种；第四步、冬虫夏草的栽培。本专利技术研究的出发点以及取得的有益效果主要包括以下几个部分：研究表明，冬虫夏草液体培养基培养获得菌液直接用于感染蝙蝠虫，其对所生产的冬虫夏草发酵产品在化学成分和活性物质影响较大，如何配置适合冬虫夏草的液体培养基，是需要解决的技术问题。本专利技术对废弃物进行了处理，使得氮、磷、钾、钙、镁等得到有效利用；本专利技术将木屑和秸秆制备成纤维状物质，成为培养基的骨架，比表面积大，菌株附着性能好，增大了与加入其他养料的嵌合力，提高了菌株对养料的吸收率；酒糟属于废弃物，其含有大量的蛋白质，脂肪，糖以及维生素等，但是菌株利用率较低，通过生化处理后，提高了各养分的浸出率，菌株利用率大大提高；土豆浸出汁中含有菌体生长所需的碳源、氮源以及微量元素；本专利技术培养基组分采用多种废弃物物料，成本低廉，实现了变废为宝，提高了工业附加值，企业利润大大提高；本专利技术培养基各原料配伍合理，更加适合菌体生长，培养获得的虫草各方面性能指标优于现有技术。具体实施方式本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的产品及方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的一种冬虫夏草子实体及其制备方法进行详细说明。实施例1一种冬虫夏草液体培养基，其按照如下工艺制备而得：：1）将锯末和秸秆粉混合，然后放入浓度为2mol/L的NaOH溶液中浸泡5h，捞出丝状纤维，放清水中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冬虫夏草液体培养基，其按照如下工艺制备而得：取纤维状物质50‑60g，酒糟水解物50‑60g，土豆浸出液70‑80g，葡萄糖30‑40g，硫酸镁2克，链霉素1克，青霉素1克，维生素B1 0.01g，添加到容器中，然后加水定容至1L，调节pH为6.5‑6.8，高压锅内灭菌，温度达到121℃时保压15min，出锅，冷却至室温，即得。

【技术特征摘要】
1.一种冬虫夏草液体培养基，其按照如下工艺制备而得：取纤维状物质50-60g，酒糟水解物50-60g，土豆浸出液70-80g，葡萄糖30-40g，硫酸镁2克，链霉素1克，青霉素1克，维生素B10.01g，添加到容器中，然后加水定容至1L，调节pH为6.5-6.8，高压锅内灭菌，温度达到121℃时保压15min，出锅，冷却至室温，即得。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述纤维状物质的制备方法包括如下步骤：将锯末和秸秆粉混合，然后放入浓度为2-3mol/L的NaOH溶液中浸泡3-5h，捞出丝状纤维，放清水中高速搅拌漂洗2-3遍，然后置于60-70℃烘干，得到纤维状物质。3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述酒糟水解物的制备方法包括如下步骤：将酒糟投入到反应器中，然后添加两倍重量的浓度为5mol/L的盐酸，300rpm搅拌水解2小时，然后添加氨水，调节溶液的pH为6.5-7.0，即得酒糟水解物。4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述土豆浸出液的制备方法包括如下步骤：将土豆去皮，切成块状，然后添加到两倍重量的蒸馏水中，煮沸30min，自然冷却，然后用纱布过滤，收集滤液，即得土豆浸出液。5.利用权利要求1-4任其一所述的液体培养基培养冬虫夏草的方法，包括如下步骤：第一步：冬虫夏草一级母种斜面培养；第二步：冬虫夏草一级母种斜面的扩大培养获得冬虫夏草二级母种；第三步：冬虫夏草液体菌种的培养：将冬虫夏草二级母种转接到所述液体培养基中，接种后放到恒温箱里在25℃，恒温培养3天，然后转移到磁力搅拌机上在25℃振荡培养20天，得冬虫夏草液体菌种；第四步：冬虫夏草的栽培。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：第一步、冬虫夏草一级母种斜面培养：(1)、培养基配方：玉米200克、小麦200克、磷酸二氢钾4克、葡萄糖20克、硫酸镁1克、蛋白胨20克、链霉素...

【专利技术属性】
技术研发人员：邸超，
申请(专利权)人：邸超，
类型：发明
国别省市：山东,37