一种玫烟色拟青霉的发酵生产方法及玫烟色拟青霉二级液体培养基技术

本发明专利技术提供了一种玫烟色拟青霉发酵生产方法，将玫烟色拟青霉菌种活化，一级种子液体培养基促使菌体集中在菌体生产上，得到更加强健的菌体，在二级种子液培养基中，强健的菌体可以产生更多的液生孢子，同时玫烟色拟青霉液生孢子可在二级液体培养基中萌发，并繁殖出大量的强壮的菌丝体，进而在固体培养培养阶段，快速产生大量的孢子，在3.0×1010个孢子/g以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物发酵
，尤其涉及一种玫烟色拟青霉的发酵生产方法及玫烟色拟青霉二级液体培养基。
技术介绍
我国是农业大国，农业是国民经济的基础，是人类的衣食之源、生存之本，因此农业的发展状况直接影响着国民经济的全局发展。但是在农业生产过程中，虫害往往会严重影响农作物正常的生长，使农作物大量减产，给种植者带来巨大的经济损失。因此，对农作物虫害必须要进行有效地防治，保证粮食安全和种植者的经济利益。现今侵害农作物的害虫有很多种，最主要的是昆虫、鳞翅目害虫、膜翅目害虫、双翅目、半翅目害虫和鞘翅目害虫，常见的害虫有烟粉虱、小菜蛾、蚕蛾、玉米螟、蚧壳虫、金龟子、桃蚜、白粉虱等等，严重导致农作物大量减产或质量下降，直接损害种植者的经济利益。玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroeus)地理分布广泛，昆虫寄主多样，是重要的昆虫病原真菌之一，为拟青霉属，主要特征是分生孢子梗呈瓶状或近球形，在菌丝端或短侧枝上轮生。玫烟色拟青霉的寄主范围广，能寄生多种昆虫，包括同翅目、鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目等，如烟粉虱、褐飞虱、蚧壳虫、蚜虫、蚕蛾、云尺蛾、家蝇等等。近年来，国内外的研究学者对玫烟色拟青霉进行了广泛而深入的研究，因此在生物学、生态学等方面取得了一系列的研究成果，在生物防治上表现出巨大的潜力，市场前景广阔，虽然传统的真菌发酵方法能够实现工业化生产，但是存在发酵时间长，成本高，收率低等问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种玫烟色拟青霉发酵生产方法及玫烟色拟青霉二级液体培养基。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种玫烟色拟青霉发酵生产方法，包括以下步骤：1)将玫烟色拟青霉菌种活化；2)将所述步骤1)得到的活化后的玫烟色拟青霉接种于玫烟色拟青霉一级液体培养基中进行一级液体培养，得到玫烟色拟青霉一级种子液；3)将所述步骤2)得到的一级种子液接种于玫烟色拟青霉二级液体培养基中进行二级液体培养，得到玫烟色拟青霉二级种子液；所述二级液体培养基包括以下质量含量的组分：黄豆粉20～30g/L，白砂糖20～40g/L，硝酸钠0.05～0.15g/L，玉米粉5～15g/L，磷酸氢二钾0.1～0.8g/L，氯化钾0.20～0.30g/L，硫酸铁0.01～0.08g/L，硫酸镁0.01～0.08g/L，硫酸锰0.01～0.08g/L，余量为水；4)将所述步骤3)得到的二级种子液接种于玫烟色拟青霉固体培养基中，进行固体培养，得到玫烟色拟青霉。进一步，所述的玫烟色拟青霉选自生物保藏编号为CGMCCNo.7993的菌种。进一步，所述步骤2)中一级液体培养的条件为：培养的时间为25～40h，培养的温度为20～30℃，培养的初始pH值为6.0～7.0，接种量为0.5～1.5％；培养在搅拌下进行，搅拌的频率为1～2次/h，每次搅拌的时间为10～20min；培养的过程进行通气，具体为：进入培养24h内，通气量为10～20m3/h，培养24h后，通气量为15～24m3/h；培养在光照下进行。进一步，所述步骤3)中二级液体培养的条件为：培养的时间为40～56h，培养的温度为20～30℃，培养的初始pH值为6.0～7.0，培养的接种量为5～15％；培养的过程需要通气，具体为：进入培养24h内，通气量为130～170m3/h，培养24h后，通气量为200～260m3/h；培养在搅拌下进行，搅拌的频率为1～2次/h，每次搅拌的时间为10～20min；培养在光照下进行。进一步，所述步骤4)中固体培养的条件为：固体培养的过程进行温度和湿度的控制，所述温度和湿度的控制程序具体为：在进入固体培养1～3d之内控制环境湿度为80～99％，环境温度为24～30℃，菌料温度控制为24～30℃；在进入固体培养4～5d之内控制环境湿度为40～50％，环境温度为25～30℃，菌料温度为自然条件下温度；6～7d之内环境温度为28～38℃，环境湿度和菌料温度为自然条件下温度；所述固体培养28～32h时翻盘散热；所述固体培养45～55h时将营养液喷洒到菌料上。进一步，所述营养液包括以下质量含量的组分：5％葡萄糖和0.001％硫酸铜。进一步，所述营养液的喷洒量为菌料质量的5～10％。进一步，所述玫烟色拟青霉一级液体培养基包括以下质量含量的组分：马铃薯粉25～40g/L，白砂糖15～25g/L，蛋白胨0.5～15g/L，硝酸钠0.05～0.15g/L，氯化钾0.20～0.30g/L，硫酸镁0.01～0.08g/L，硫酸铁0.01～0.08g/L，硫酸锰0.01～0.08g/L，磷酸氢二钾0.1～0.8g/L，余量为水。进一步，所述玫烟色拟青霉固体培养基包括以下质量含量的组分：麦麸70～90％，玉米粉5～15％，谷壳5～15％，硫酸铵0.5～1.5％。本专利技术提供了上述方案所述的玫烟色拟青霉二级液体培养基，括以下质量含量的组分：黄豆粉20～30g/L，白砂糖20～40g/L，硝酸钠0.05～0.15g/L，玉米粉5～15g/L，磷酸氢二钾0.1～0.8g/L，氯化钾0.20～0.30g/L，硫酸铁0.01～0.08g/L，硫酸镁0.01～0.08g/L，硫酸锰0.01～0.08g/L，余量为水。本专利技术提供了一种玫烟色拟青霉发酵生产方法，将玫烟色拟青霉菌种活化，一级种子液体培养基促使菌体集中在菌体生产上，得到更加强健的菌体。在二级种子液培养基中，强健的菌体可以产生更多的孢子，同时玫烟色拟青霉孢子可在二级液体培养基中萌发，进而在固体培养培养阶段，快速产生大量的菌体，在3.0×1010个孢子/g以上。进一步的，本专利技术通过温度与湿度梯度化管理来完成产孢子，在刚进行固体培养时，给予高温高湿的环境，让菌丝在固体培养基中迅速适应环境；在密集发酵期即进入发酵第20h～40h时，物料温度将会急速升高，应降低环境温度，防止烧盘，同时在30h左右将发酵料翻动，以便于扇热的同时为菌种更好的提供空气；在产孢阶段，降低房间湿度和温度，有利于促进菌丝产生孢子；在50h左右补液能够给菌丝充足的葡萄糖和无机盐以促进产孢子。生物保藏说明玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosa-roseus)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，生物保藏编号为CGMCCNo.7993。具体实施方式本专利技术提供了一种玫烟色拟青霉发酵生产方法，包括以下步骤：1)将玫烟色拟青霉菌种活化；2)将所述步骤1)得到的活化后的玫烟色拟青霉接种于玫烟色拟青霉一级液体培养基中进行一级液体培养，得到玫烟色拟青霉一级种子液；3)将所述步骤2)得到的一级种子液接种于玫烟色拟青霉二级液体培养基中进行二级液体培养，得到玫烟色拟青霉二级种子液；所述二级液体培养基包括以下质量含量的组分：黄豆粉20～30g/L，白砂糖20～40g/L，硝酸钠0.05～0.15g/L，玉米粉5～15g/L，磷酸氢二钾0.1～0.8g/L，氯化钾0.20～0.30g/L，硫酸铁0.01～0.08g/L，硫酸镁0.01～0.08g/L，硫酸锰0.01～0.08g/L，余量为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玫烟色拟青霉的发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将玫烟色拟青霉菌种活化；2)将所述步骤1)得到的活化后的玫烟色拟青霉接种于玫烟色拟青霉一级液体培养基中进行一级液体培养，得到玫烟色拟青霉一级种子液；3)将所述步骤2)得到的一级种子液接种于玫烟色拟青霉二级液体培养基中进行二级液体培养，得到玫烟色拟青霉二级种子液；所述二级液体培养基包括以下质量含量的组分：黄豆粉20～30g/L，白砂糖20～40g/L，硝酸钠0.05～0.15g/L，玉米粉5～15g/L，磷酸氢二钾0.1～0.8g/L，氯化钾0.20～0.30g/L，硫酸铁0.01～0.08g/L，硫酸镁0.01～0.08g/L，硫酸锰0.01～0.08g/L，余量为水；4)将所述步骤3)得到的二级种子液接种于玫烟色拟青霉固体培养基中，进行固体培养，得到玫烟色拟青霉。

【技术特征摘要】
1.一种玫烟色拟青霉的发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将玫烟色拟青霉菌种活化；2)将所述步骤1)得到的活化后的玫烟色拟青霉接种于玫烟色拟青霉一级液体培养基中进行一级液体培养，得到玫烟色拟青霉一级种子液；3)将所述步骤2)得到的一级种子液接种于玫烟色拟青霉二级液体培养基中进行二级液体培养，得到玫烟色拟青霉二级种子液；所述二级液体培养基包括以下质量含量的组分：黄豆粉20～30g/L，白砂糖20～40g/L，硝酸钠0.05～0.15g/L，玉米粉5～15g/L，磷酸氢二钾0.1～0.8g/L，氯化钾0.20～0.30g/L，硫酸铁0.01～0.08g/L，硫酸镁0.01～0.08g/L，硫酸锰0.01～0.08g/L，余量为水；4)将所述步骤3)得到的二级种子液接种于玫烟色拟青霉固体培养基中，进行固体培养，得到玫烟色拟青霉。2.根据权利要求1所述的发酵生产方法，其特征在于，所述的玫烟色拟青霉选自生物保藏编号为CGMCCNo.7993的菌种。3.根据权利要求1所述的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤2)中一级液体培养的条件为：培养的时间为25～40h，培养的温度为20～30℃，培养的初始pH值为6.0～7.0，接种量为0.5～1.5％；培养在搅拌下进行，搅拌的频率为1～2次/h，每次搅拌的时间为10～20min；培养的过程进行通气，具体为：进入培养24h内，通气量为10～20m3/h，培养24h后，通气量为15～24m3/h；培养在光照下进行。4.根据权利要求1所述的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤3)中二级液体培养的条件为：培养的时间为40～56h，培养的温度为20～30℃，培养的初始pH值为6.0～7.0，培养的接种量为5～15％；培养的过程需要通气，具体为：进入培养24h内，通气量为130～170m3/h，培养24h后，通气量为200～260m3/h；培养在搅拌下进行，搅拌的频率为1～2次/h，每次搅拌的时间为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李英武，罗双燕，石仕福，梁小文，王根豪，严艺波，李肖宇，吴俊杰，石峥，曾升华，罗建辉，
申请(专利权)人：江西天人生态股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36