松茸液态菌种的培养方法技术

本发明专利技术提供一种松茸液态菌种的培养方法，包括制备一种松茸液态菌种培养基，将松茸原种接种到所述松茸液态菌种培养基中进行密封培养，当所述松茸原种的菌丝萌发后，每天摇动所述松茸液态菌种培养基1次，直至获得松茸液态菌种。本发明专利技术提供的松茸液态菌种培养方法操作简单，培养出的松茸液态菌种菌丝生长快，受其它菌种污染小，且菌丝产出率高、成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体的说，涉及一种松茸液态菌种的培养方法。
技术介绍
松茸是一种珍贵稀有的野生食用菌，营养价值高，目前在人工培育中，松茸菌种仍采用原始的培育方法，培育过程缺乏有效的控制和管理，营养成分分布不均匀，在松茸菌种培养过程中需要经过接种、静置培养和摇瓶培养等多个步骤，而且还需要向培养器皿中人工通入无菌空气，造成培养步骤繁琐、劳动强度高。为了解决以上存在的问题，人们一直在寻求一种理想的技术解决方案。
技术实现思路
由鉴于此，本专利技术确有必要提供一种培养步骤简单、成本低廉的松茸液态菌种的培养方法，以解决上述问题。本专利技术所采用的技术方案是一种松茸液态菌种的培养方法，具体包括以下步骤：提供一种松茸液态菌种培养基；将松茸原种接种到所述松茸液态菌种培养基中进行密封培养，当所述松茸原种的菌丝萌发后，每天摇动所述松茸液态菌种培养基1次，直至获得松茸液态菌种。基于上述，提供所述松茸液态菌种培养基的步骤包括：将松树枝200～300克、土豆200～400克和水1200～1800mL进行混合，然后依次经过煮沸、冷却、过滤处理后得到滤液；分别将碳源10～150克、氮源10～200克加入到1000mL所述滤液中，混合制得松茸液态菌种营养滤液；分别将谷壳15～30克、KH2PO40.2～2克、MgSO40.1～2克、柠檬酸0.1～3克加入到150mL所述松茸液态菌种营养滤液中进行混合，制得pH值为5～7的松茸液态菌种培养基。基于上述，所述碳源为乳糖、蔗糖、玉米粉、果糖中的一种或几种的组合。基于上述，所述氮源为酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、尿素中的一种或几种的组合。优选地，所述碳源为蔗糖10～80克；所述氮源为豆粉10～90克。基于上述，所述松茸原种的菌丝萌发后，每24小时定时摇动所述松茸液态菌种培养基1次，使得所述松茸液态菌种培养基中的谷壳完全被浸湿。简言之，在培养期间，每天定时摇动所述羊肚菌液态菌种培养基1次，比如每天早上9点、每天上午11点或每天下午4点摇动所述羊肚菌液态菌种培养基1次，使所述谷壳完全浸没在所述松茸液态菌种培养基中等。基于上述，所述松茸原种的培养步骤包括：将麸皮15～25克、谷壳20～30克、玉米粉8～12克，分别用水浸泡、过滤后，分别加水煮沸、过滤沥干，然后混合制得混合料；向所述混合料中加入葡萄糖5～10克、酵母粉1～2克、碳酸钙1～5克、磷肥1～5克；混合制得松茸原种培养基；将所述松茸母种接种到所述松茸原种培养基中进行培养，获得所述松茸原种。基于上述，所述松茸母种的培养步骤包括：将土豆50～60克、琼脂8～14克、蛋白胨0.5～0.8克和葡萄糖5～7克加入到1500mL～1800mL的水中进行加热，直至所述琼脂全部煮化，得到松茸母种培养基；将松茸菌株的菌丝接入到所述松茸母种培养基中进行培养，获得所述松茸母种。为了更好的了解不同时期羊肚菌菌种的生长情况，确定液态培养时间，在培育时间为0～240h范围内，利用专用的采样器24h取样1次，测定所述松茸菌种的菌丝体干重。具体操作步骤为：在松茸菌种每阶段培养结束后，选用采样器抽取每阶段培养瓶中适量的液体，以转速为4000r/min的速度离心15min，然后弃去清液，将得到的所述松茸菌丝体用蒸馏水清洗数次后，置于真空干燥箱中，40℃下烘干至恒重，计算培养得到的所述松茸菌丝体干重。实验中，每组进行3次平行试验，所得数据取3次试验结果的平均值，以培养时间为横坐标，以松茸菌丝体干重为纵坐标，绘制松茸菌丝体的生长曲线，松茸菌丝体干重计算公式如下：Y=M/V式中；Y代表松茸菌丝体干重，单位g/L；M代表菌丝体干燥后的质量，单位g；V代表抽取液体的体积，单位L。本专利技术相对现有技术具有突出的实质性特点和显著的进步，具体的说，本专利技术所提供的松茸液态菌种培养方法，在松茸液态菌种培养的过程中，不需要对培养基进行连续摇动，只需每天对所述松茸液态菌种培养基摇动一次即可，降低了培养过程所用设备的利用率，从而降低了生产成本，而且该培养方法简单、易于操作；每天采用定时摇动保证了所述松茸液态菌种营养液的均匀性。进一步讲，松茸液态菌种菌丝的生长以谷壳为载体，利用谷壳之间的间隙吸收营养，并附着在液态表面上的谷壳上进行生长，无需额外向其培养基中通入无菌空气，就可以成功培养出松茸液态菌种，减少了繁杂的操作和许多昂贵的无菌设备，节约了成本并缩短了菌种的培育时间。更进一步讲，本专利技术中所述松茸液态菌种培养基的原料经过煮汁后再使用，使得所述松茸液态菌种培养基的养料分布比较均匀，有利于松茸液态菌种菌丝吸收利用；并在菌种培育的各阶段采用不同的培养基原料，使得不同培养阶段的松茸菌种菌丝能够对培养基中的营养成分充分吸收，达到最好的培育效果，成功实现了对松茸的人工栽培。附图说明图1是实施例1中的培养时间对松茸液态菌种的菌丝体干重影响曲线图。具体实施方式下面通过具体实施方式，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。本实施例提供一种松茸液态菌种的培养方法，具体包括以下步骤：实施例1将松树枝200克、土豆200克加水1500mL进行混合、煮沸并保持30分种，然后过滤、冷却制得滤液；向1000mL所述滤液中加入碳源、氮源，充分溶解后取150mL装入培养瓶中，然后向所述培养瓶加入15克洗净烘干谷壳、0.3克KH2PO4、0.3克MgSO4和0.5克柠檬酸，混合均匀制得松茸液态菌种培养基；将装有所述松茸液态菌种培养基的培养瓶经灭菌锅高温灭菌、冷却后，放置于密封的无菌接种箱中，向所述培养瓶中接入所述松茸原种，置于24℃恒温箱中进行培养，当所述松茸原种的菌丝萌发后，每天早上9点定时充分摇动所述松茸液态菌种培养基1次，培养一定时间获得所述松茸液态菌种。本实施例中所提供的一种松茸液态菌种的培养方法，在具体培养过程中，外界条件会对所述松茸液态菌种的生长产生较大影响；下面分别从所述松茸液态菌种培养基的初始pH值、碳源、氮源方面对本实施例所提供的松茸液态菌种的生长趋势影响作进一步的阐述。1.不同碳源对松茸菌丝体生长趋势的影响将松树枝200克、土豆200克加水1500mL进行混合、煮沸并保持30分种，然后过滤、冷却制得滤液；分别向1000mL所述滤液中加入20g的作为碳源的乳糖、蔗糖、玉米粉和果糖，充分溶解后取150mL装入培养瓶中，然后向所述培养瓶加入15克洗净烘干谷壳、0.3克KH2PO4、0.3克MgSO4和0.5克柠檬酸，然后利用该培养基对所述松茸原种进行培养5天，以考察不同碳源对所述松茸菌丝体生长趋势的影响。实验结果如表1所示，从表中可以看出，影响所述松茸液态菌丝体生长趋势的碳源从大到小依次为蔗糖、玉米粉、果糖、乳糖，因此优选蔗糖作为松茸液态菌种培养基的碳源；同时还可以看出当培养基中只有碳源没有氮源情况下，松茸液态菌丝体生长趋势较缓慢。表1.不同碳源对松茸液态本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种松茸液态菌种的培养方法，包括以下步骤：提供一种松茸液态菌种培养基；将松茸原种接种到所述松茸液态菌种培养基中进行密封培养，当所述松茸原种的菌丝萌发后，每天摇动所述松茸液态菌种培养基1次，直至获得松茸液态菌种。

【技术特征摘要】
1.一种松茸液态菌种的培养方法，包括以下步骤：
提供一种松茸液态菌种培养基；
将松茸原种接种到所述松茸液态菌种培养基中进行密封培养，当所述松茸原种的菌丝萌发后，每天摇动所述松茸液态菌种培养基1次，直至获得松茸液态菌种。
2.根据权利要求1所述的松茸液态菌种的培养方法，其特征在于，提供所述松茸液态菌种培养基的步骤包括：
将松树枝200～300克、土豆200～400克和水1200～1800mL进行混合，然后依次经过煮沸、冷却、过滤处理后得到滤液；
分别将碳源10～150克、氮源10～200克加入到1000mL所述滤液中，混合制得松茸液态菌种营养滤液；
分别将谷壳15～30克、KH2PO40.2～2克、MgSO40.1～2克、柠檬酸0.1～3克加入到150mL所述松茸液态菌种营养滤液中进行混合，制得pH值为5～7的松茸液态菌种培养基。
3.根据权利要求2所述的松茸液态菌种的培养方法，其特征在于，所述碳源为乳糖、蔗糖、玉米粉、果糖中的一种或几种的组合。
4.根据权利要求3所述的松茸液态菌种的培养方法，其特征在于，所述氮源为酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、尿素中的一种或几种的组合。
5.根据权利要求4所述的松...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋瑞鹏，
申请(专利权)人：宋瑞鹏，
类型：发明
国别省市：江苏;32