本发明专利技术属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种生产蝉拟青霉分生孢子的培养基、培养方法和培养产物及其应用。该生产蝉拟青霉分生孢子的培养基包括固相培养基和液体培养基。本发明专利技术的培养方法能够产生大量蝉拟青霉分生孢子，且其培养产物中含有多糖、虫草酸、腺苷、三萜类、多种氨基酸等成分，具有免疫调节、解热镇痛、改善肾功能、降血压、抗辐射、抗肿瘤及降血糖等功能，可以应用于人们的健康生活领域，同时发酵过程能够产生大量孢子，且培养产生的孢子可以作为生物防治的有效手段，从源头上解决农产品农药残留超标的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物发酵
，具体涉及一种生产蝉拟青霉分生孢子的培养基、培养方法和培养产物及其应用。
技术介绍
蝉花即蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)，是一种虫生真菌，因其与冬虫夏草一样同属虫菌复合体，且含有相近的化学、营养成分，所以常用被用作冬虫夏草的代用品。蝉花具有免疫调节、解热镇痛、改善肾功能、镇静催眠、抗辐射等多种药理作用，可被应用到食品、保健品、药品、化妆品等领域。研究发现，在蝉拟青霉孢子中检测出与其他部位如孢梗束、菌质中同样的营养成分，甚至含量更高。此外，蝉拟青霉作为拟青霉属的虫生真菌，其分生孢子同样可作为生物防治的有效手段，从源头上解决农产品农药残留超标的问题。现有专利中蝉花的人工培育方法只是为了获得菌丝体、孢梗束或带虫体的子实体而设计的培养基和方法，并没有专门为了获得蝉花孢子粉而设计的培养基和培养方法。另外，现有的培养方法中，单纯的液体培养并不能获得蝉拟青霉分生孢子，而固体培养存在生产周期长、菌剂含孢量低、成本高等弊端。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种生产蝉拟青霉分生孢子的培养基、培养方法和培养产物及其应用。本专利技术采用如下技术方案解决上述技术问题一种生产蝉拟青霉分生孢子的固相培养基，所述固相培麸皮20 45 ■量份；玉米粉5 30重量份；蔗糖0. 5 5 ■量份；蚕蛹粉0. 5 5 ■量份；KNO30. 1 3 1I量份；KH2PO40. 05 1重量份；MgSO40. 05 0.8重量份；H2O25 70I量份。或者，所述固相培养基的原料组分包括麸皮40 70重量份；营养液30 60重量份；贝壳粉0. 01 2 ■量份；蚕蛹粉0. 01 5 ■量份；其中，所述I爹养液中含有的组分名称及其重量百分比为KNO3蔗糖KH2PO,0. 1 5% ； 1 20% ； 0. 05 3%MgSO4 0.01 0.5%:柠檬酸铵 0.01 0.1%;H2O余量。本专利技术还提供了一种生产蝉拟青霉分生孢子的液相培养基，所述液相培养基中含有的组分名称及其重量百分比为马铃薯 10 30%;蔗糖1 10%;柠檬酸0.01 1%;H2O余量。本专利技术还提供了一种蝉拟青霉孢子的培养方法，该培养方法采用上述固相培养基及液相培养基，且所述培养方法包括如下步骤1)斜面菌种制备将蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)菌株接种到斜面培养基上，20 25°C下，培养3 5天；2)种子液的制备从斜面上刮取菌丝接种到以PDA液体为基础的三角瓶液体培养基中，20 25°C下，140 160rpm，培养3 5天即可制得蝉拟青霉种子液；3)将步骤幻中制得的蝉拟青霉种子液按重量百分比为10 15%接入所述液体培养基中，在20 25°C下，140 160rpm，振荡发酵3 5天；4)将步骤3)中制得的发酵液按重量百分比为3% 10%接入灭菌后的所述固相培养基中，在温度为18 23°C，湿度为50 90%的条件下，静置开放式培养15 25天。较佳的，步骤1)中，所述斜面培养基为PDA固相培养基，其制备可由本领域技术人员参考现有技术进行确认。进一步优选的，所述PDA固相培养基的制备方法为挑取新鲜马铃薯，去皮洗净并切碎后与水混合，其中，马铃薯和水的重量比例为1 (3 7)，灭菌后过滤，其滤液为马铃薯煮汁，然后在所述马铃薯滤液中加入琼脂2 %份，蔗糖2 %份，加热溶解后加水补足使得体积至原来马铃薯滤液体积，然后分装至试管，在121°C，1. 05Kg/cm2灭菌30min后摆斜面， 冷却后使用。优选的，步骤4)中，所述的生产蝉拟青霉分生孢子的固相培养基，其特征在于，所述固体培养基的制备方法为先将玉米粉和麸皮煮熟，将蔗糖、KN03、KH2P04、MgS04在水中溶解，再与蚕蛹粉、煮熟后的玉米粉和麸皮按照比例混合均勻。较佳的，步骤4)中，所述静置开放式培养过程中，周围环境为万级洁净空间，同时通无菌风保证培养室内空气交换流通；进一步优选的，在静置开放式培养过程中，还需要在培养基上面覆盖多层厚度为0. 1 0. 3mm/层，含水量为饱和的无菌吸水纸进行固相发酵。 更佳的，所述静置开放式培养过程中，在培养基上面覆盖多层厚度为0. 1 0. 3mm/层，在所述固相培养基的营养液中浸泡至饱和的无菌吸水纸进行固体发酵。本专利技术第三方面提供了一种由上述蝉拟青霉孢子的培养方法所产生的发酵产物， 该发酵产物包括发酵过程产生的孢子、次生代谢产物以及剩余培养基等。本专利技术的培养产物中含有多糖、虫草酸、腺苷、多种氨基酸等成分，具有免疫调节、 解热镇痛、改善肾功能、降血压、抗辐射、抗肿瘤及降血糖等功能，可以应用于人们的健康生活领域，比如用于制备功能食品、药品或日化洗护用品等。同时发酵过程能够产生大量孢子，且培养产生的孢子可以作为生物防治的有效手段，从源头上解决农产品农药残留超标的问题，因此，可以用于生物防治领域，比如生物农药等。附图说明图1 人工培养蝉拟青霉分生孢子对PHA刺激或未刺激的淋巴细胞作用M小时时对淋巴细胞增殖的影响。图2 人工培养蝉拟青霉分生孢子对PHA刺激或未刺激的淋巴细胞作用48小时时对淋巴细胞增殖的影响。图3 人工培养蝉拟青霉分生孢子对PHA刺激或未刺激的淋巴细胞作用72小时时对淋巴细胞增殖的影响。图4 蝉拟青霉分生孢子对PHA刺激的人淋巴细胞细胞周期的影响试验结果。 具体实施例方式下面通过具体实施例进一步描述本专利技术的技术方案。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例11、培养基的制备1.PDA斜面制备(固体)挑取新鲜无发芽无病害的马铃薯，去皮洗净，切成小薄片，称200g，加水lOOOmL， 煮沸30min后过滤，其滤液为马铃薯煮汁。然后加入琼脂20g，蔗糖20g，加热溶解后补足水至IOOOmL,分装试管，121°C，1. 05Kg/cm2,灭菌30min后，摆成斜面，冷却后使用。2.固相培养基的制备称取麸皮800g，玉米粉 150g，H20 720ml，混合蒸煮 lh，蔗糖 10g，KNO3 5g，KH2P043g， MgSO4 2g，用少量H2O溶解后，与蚕蛹粉10g，与煮熟后的麸皮和玉米粉混合均勻，121°C， 1. 05Kg/cm2，灭菌 30min 后使用。所述固体培养基还可为称取麸皮1200g，蚕蛹粉20g，贝壳粉15g，营养液IOOOmL,混合后，121°C，1. 05Kg/ cm2,灭菌30min后使用。其中，所述营养液具体组成如下=KNO3为0. 5 %，蔗糖为10 %，KH2PO4 为1 %, MgSO4 % 1%，柠檬酸铵为0. 05%，H2O为余量。3.液体培养基的制备挑取新鲜无发芽无病害的马铃薯，去皮洗净，切成小薄片，称200g，加水lOOOmL， 煮沸30min后过滤，其滤液为马铃薯煮汁。然后加入蔗糖20g，柠檬酸0. Ig加热溶解后补足水至 lOOOmL，混合后，121°C，1. 05Kg/cm2，灭菌 30min 后使用。2、蝉拟青霉孢子的培养过程1.蝉拟青霉菌种的制备将蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)接到PDA斜面固体培养基上，22°C恒温培养4 6天，备用。2.液固双相发酵生产蝉拟青霉本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种生产蝉拟青霉分生孢子的固相培养基，所述固相培养基的原料组分包括：麸皮 ２０～４５重量份；玉米粉 ５～３０重量份；蔗糖 ０．５～５重量份；蚕蛹粉 ０．５～５重量份；ＫＮＯ３ ０．１～３重量份；ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５～１重量份；ＭｇＳＯ４ ０．０５～０．８重量份；Ｈ２Ｏ ２５～７０重量份。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈祝安，孙长胜，赵伟，李成，
申请(专利权)人：浙江泛亚生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：33
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