一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒，该试剂盒包括：1)具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸‑Cu(II)复合物溶液；2)3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺‑乙醇溶液；3)过氧化氢水溶液；4)pH为4.0的缓冲溶液；5)1xS1核酸酶缓冲液，所述1xS1核酸酶缓冲液包括30mM pH为4.6的乙酸钠‑乙酸缓冲溶液,280mM氯化钠水溶液和1mM的硫酸锌水溶液。利用本发明专利技术的试剂盒能方便的用于S1核酸酶的测定，其灵敏度高、选择性好、操作简便，且直观可视，价格低廉。

A kit for visual detection of S1 nuclease

The invention discloses a kit for visual detection of S1 nuclease, the kit includes: 1) with peroxidase activity of DNA Cu (II) complex solution; 2) 3,3 '5,5' four methyl benzidine ethanol solution; 3) aqueous solution of hydrogen peroxide; 4) pH 4 buffer solution; 5) 1xS1 nuclease buffer, the buffer including 30mM 1xS1 nuclease pH 4.6 sodium acetate acetic acid buffer solution, water solution of zinc sulfate 280mM sodium chloride aqueous solution and 1mM. The reagent box of the invention can be conveniently used for the determination of S1 nuclease, which has high sensitivity, good selectivity, simple operation, visual visual and low price.

【技术实现步骤摘要】
一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒
本专利技术属于纳米技术和生物检测领域，具体的是涉及一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒。
技术介绍
S1核酸酶，来源于稻谷曲霉(Aspergillusoryzae)，是一种高度单链特异的核酸内切酶，在最适的酶催反应条件下，降解单链脱氧核糖核酸或核糖核酸，产生带5'-磷酸的单核苷酸或寡核苷酸。它在诸多领域中都起到重要作用，例如生物技术和药理学以及很多涉及脱氧核糖核酸复制、脱氧核糖核酸重组、脱氧核糖核酸修复、分子克隆和聚合酶链式反应等重要的生物学领域。[AnalyticalMethods.2015,7,5600–5605]因此，建立一种快速、灵敏、直观的S1核酸酶检测方法是至关重要的。到目前为止，S1核酸酶的检测方法有光致发光法、荧光光谱法等。[ACSAppl.Mater.Interfaces.2016,8,827-833]但是在这些方法中，光致发光法的重复性较差，并且由于对核酸酶有一定的损伤率从而限制了他们在实际样品中的应用；[中国专利201110245341.1]公开了一种利用荧光光谱检测核酸酶的方法，但是该方法不可视，并且需要对核酸进行化学修饰，使得该方法具有一定的复杂性。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒。本专利技术的第二个目的是提供另一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒。本专利技术的技术方案概述如下：一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒，包括：1)具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液；2)3,3’,5,5’-四甲基联苯胺-乙醇溶液；3)过氧化氢水溶液；4)pH为4.0的缓冲溶液；5)1xS1核酸酶缓冲液，所述1xS1核酸酶缓冲液包括30mMpH为4.6的乙酸钠-乙酸缓冲溶液,280mM氯化钠水溶液和1mM的硫酸锌水溶液。具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液是用下述方法制成：将5-200μL浓度为5-200μM的脱氧核糖核酸水溶液、20-150μL0.2-1.5M氯化钠水溶液、10-100μL10-100mMpH为3.0-9.0的缓冲液混合，加水至300μL得到脱氧核糖核酸缓冲溶液，再加入2-15μL浓度为0.4mM-3mM二价铜离子水溶液，在20-40℃下震荡混合2～10min，在20-40℃下静置0.5-4h，得到具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液。脱氧核糖核酸序列优选为：Gm，其中m＝4～200；(TG4)n；(T2G3)n；(T3G2)n；(AG4)n；(A2G3)n；(A3G2)n；AG2(T2AG2)n；TG2(TA2G2)n；AG3(T2AG3)n；TG3(TA2G3)n；AG4(T2AG4)n；TG4(TA2G4)n；其中n＝1～40。3,3’,5,5’-四甲基联苯胺-乙醇溶液的浓度为0.01-5mM，所述过氧化氢水溶液的浓度为0.01-3M。pH为4.0的缓冲溶液优选2-(N-吗啡啉)乙磺酸-氢氧化锂缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液，所述pH为4.0的缓冲溶液的浓度为10-100mM。另一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒，包括：1)具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液；2)亚甲基蓝水溶液；3)过氧化氢水溶液；4)pH为11.0的缓冲溶液；5)1xS1核酸酶缓冲液，所述1xS1核酸酶缓冲液包括30mMpH为4.6的乙酸钠-乙酸缓冲溶液,280mM氯化钠水溶液和1mM的硫酸锌水溶液。具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液是用下述方法制成：将5-200μL浓度为5-200μM的脱氧核糖核酸水溶液、20-150μL0.2-1.5M氯化钠水溶液、10-100μL10-100mMpH为3.0-9.0的缓冲液混合，加水至300μL得到脱氧核糖核酸缓冲溶液，再加入2-15μL浓度为0.4mM-3mM二价铜离子水溶液，在20-40℃下震荡混合2～10min，在20-40℃下静置0.5-4h，得到具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液。脱氧核糖核酸序列为：Gm，其中m＝4～200；(TG4)n；(T2G3)n；(T3G2)n；(AG4)n；(A2G3)n；(A3G2)n；AG2(T2AG2)n；TG2(TA2G2)n；AG3(T2AG3)n；TG3(TA2G3)n；AG4(T2AG4)n；TG4(TA2G4)n；其中n＝1～40。亚甲基蓝水溶液的浓度为0.1μM-300μM，所述过氧化氢水溶液的浓度为0.01-3M。pH为11.0的缓冲溶液优选为磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钾-氢氧化钠缓冲液、硼酸-氢氧化钠缓冲溶液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸-氢氧化钠缓冲液，所述pH为11.0的缓冲溶液浓度为10-100mM。利用本专利技术的试剂盒能方便的用于S1核酸酶的测定，其灵敏度高、选择性好、操作简便，且直观可视，价格低廉。附图说明图1是实施例1中制备的具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液的质谱图；图2是实施例2中制备的具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液的质谱图；图3是实施例3中制备的具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液的质谱图；图4是实施例1、2和3中过氧化氢水溶液浓度为0.125M，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺乙醇溶液浓度为0.25mM的紫外动力学曲线图；图5是实施例1中过氧化氢水溶液浓度为0.125M，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺乙醇溶液浓度为0.25mM，S1核酸酶的浓度分别为0U/mL、0.01U/mL、0.03U/mL、0.05U/mL、0.07U/mL、0.1U/mL、0.5U/mL、1U/mL、5U/mL、10U/mL、20U/mL，反应30min后紫外652nm处吸收值的点图；具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。下面的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本专利技术，但不对本专利技术作任何限制。实施例1具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液的制备方法：将60μL浓度为100μM的AG3(T2AG3)3水溶液、100μL0.4M氯化钠水溶液、60μL50mMpH为7.0的2-(N-吗啡啉)乙磺酸-氢氧化锂缓冲液混合，加水至300μL得到脱氧核糖核酸缓冲溶液，再加入8μL浓度为1mM氯化铜水溶液，在25℃下震荡混合6min，在35℃下静置1h，得到具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液。测定脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液的过氧化物酶活性：在4mL比色皿中，加入300μL实施例1获得的具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液、750μL40mMpH为4.0的2-(N-吗啡啉)乙磺酸-氢氧化锂缓冲液、38.2μL9.8M过氧化氢水溶液和30μL25mM3,3’,5,5’-四甲基联苯胺乙醇溶液，加入三蒸水使终体积为3000μL，混合反应30min，采用紫外分光光度计扫描652nm处紫外吸收的动力学图谱。(见图4)用电喷雾四级杆飞行时间串联质谱仪(ESIMS)表征了该复合物溶液中AG3(T2AG3)3和Cu2+的结合情况。(见图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒，其特征包括：1)具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸‑Cu(II)复合物溶液；2)3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺‑乙醇溶液；3)过氧化氢水溶液；4)pH为4.0的缓冲溶液；5)1xS1核酸酶缓冲液，所述1xS1核酸酶缓冲液包括30mM pH为4.6的乙酸钠‑乙酸缓冲溶液,280mM氯化钠水溶液和1mM的硫酸锌水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种可视化检测S1核酸酶的试剂盒，其特征包括：1)具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液；2)3,3’,5,5’-四甲基联苯胺-乙醇溶液；3)过氧化氢水溶液；4)pH为4.0的缓冲溶液；5)1xS1核酸酶缓冲液，所述1xS1核酸酶缓冲液包括30mMpH为4.6的乙酸钠-乙酸缓冲溶液,280mM氯化钠水溶液和1mM的硫酸锌水溶液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是所述具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液是用下述方法制成：将5-200μL浓度为5-200μM的脱氧核糖核酸水溶液、20-150μL0.2-1.5M氯化钠水溶液、10-100μL10-100mMpH为3.0-9.0的缓冲液混合，加水至300μL得到脱氧核糖核酸缓冲溶液，再加入2-15μL浓度为0.4mM-3mM二价铜离子水溶液，在20-40℃下震荡混合2～10min，在20-40℃下静置0.5-4h，得到具有过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸-Cu(II)复合物溶液。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征是所述脱氧核糖核酸序列为：Gm，其中m＝4～200；(TG4)n；(T2G3)n；(T3G2)n；(AG4)n；(A2G3)n；(A3G2)n；AG2(T2AG2)n；TG2(TA2G2)n；AG3(T2AG3)n；TG3(TA2G3)n；AG4(T2AG4)n；TG4(TA2G4)n；其中n＝1～40。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是所述3,3’,5,5’-四甲基联苯胺-乙醇溶液的浓度为0.01-5mM，所述过氧化氢水溶液的浓度为0.01-3M。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是所述pH为4.0的缓冲溶液为2-(N-吗啡啉)乙磺酸-氢氧化锂缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液，所述pH为4.0的缓冲溶液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：付雁，何钏，李韡，张金利，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12