一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，将CD8leader、人源化抗TNFR2的单链抗体、CD8的铰链区和跨膜区、CD3ζ胞内信号区依次串联构成，得到融合基因片段Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ，将所述融合基因片段Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ插入慢病毒表达载体，包装成携带Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，得到靶向免疫检测点TNFR2的CIK，该发明专利技术能够针对恶性肿瘤精准治疗。

Preparation and application of a target immune detection point TNFR2 CIK

The invention discloses a targeted immune detection point TNFR2 CIK preparation, the hinge region of CD8leader, a humanized single chain antibody, anti CD8 TNFR2 and transmembrane region, CD3 zeta intracellular signal area which are connected in series to form, get the Leader fusion gene fragment scFv (TNFR2) CD8 CD3. And the Leader fusion gene fragment scFv (TNFR2) CD8 CD3 zeta inserted into the lentiviral expression vector carrying Leader scFv package (TNFR2) CD8 CD3 zeta gene encoding the lentivirus carrying Leader scFv (TNFR2) CD8 CD3 zeta gene encoding lentiviral infected patients with autologous lymphocytes induced by CIK, by targeting the immune detection of TNFR2 CIK, the invention can according to the accurate treatment of malignant tumor.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备及其应用
本专利技术涉及新医药
，更具体的说，是一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备及其应用。
技术介绍
恶性肿瘤发病率和死亡率居高不下，是威胁人类健康的头号杀手。传统治疗方法对中晚期患者疗效非常有限，临床上亟待研究更为有效的治疗方法。免疫细胞治疗中的CIK(cytokineinducedkiller)细胞疗法已在临床广泛应用并取得一定的治疗效果。然而由于恶性肿瘤微环境相对复杂，免疫细胞浸润不足，且浸润的免疫细胞受不同调节性T细胞亚群(regulatoryTcells，Treg)及其产生的转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素(IL)4、IL-10等抑制分子的严密控制，阻止其激活与趋化，从而形成了肿瘤免疫逃逸，使免疫细胞不仅不能清除肿瘤细胞，还通过其分泌的细胞因子促进肿瘤生长。因此如何突破肿瘤微环境的限制，提高免疫治疗的效果是目前研究的热点和难点。免疫检测点治疗如抗CTLA-4和抗PD-1/PD-L1治疗是以效应T细胞(Teffectorcell，Teff)的调节通路为靶点来提高抗肿瘤效应的治疗方法，已取得重要临床进展并成为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，其特征在于：将CD8leader、人源化抗TNFR2的单链抗体、CD8的铰链区和跨膜区、CD3ζ胞内信号区依次串联构成，得到融合基因片段Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ，将所述融合基因片段Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ插入慢病毒表达载体，包装成携带Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，得到靶向免疫检测点TNFR2的CIK。

【技术特征摘要】
1.一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，其特征在于：将CD8leader、人源化抗TNFR2的单链抗体、CD8的铰链区和跨膜区、CD3ζ胞内信号区依次串联构成，得到融合基因片段Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ，将所述融合基因片段Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ插入慢病毒表达载体，包装成携带Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，得到靶向免疫检测点TNFR2的CIK。2.如权利要求1所述的一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，其特征在于：所述融合基因片段Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ为序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，其特征在于，所述患者自体淋巴细胞诱导的CIK如下制取：取患者自体外周血，分离外周血单个核细胞；用含有重组干扰素的培养基诱导培养24小时后，加入重组白细胞介素2、OKT-3和5％的患者自体血浆诱导继续培养24小；每隔两天倍比加液，培养至第14天，流式细胞术检测T...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明录，王立新，姜夕锋，金海峰，冯建海，马洪华，韩庆梅，万磊，韩国英，
申请(专利权)人：山东兴瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37