靶向间皮素的重组免疫毒素制造技术

间皮素是一种存在于卵巢癌、间皮瘤和几种其它类型的人癌症的表面上的分化抗原。由于在正常组织间，间皮素仅存在于间皮细胞上，它代表一种用于抗体介导的细胞毒剂投递的良好靶物。本发明专利技术涉及改善的重组免疫毒素，其包含抗间皮素抗体(包括对间皮素具有特别高的亲和力的Fv分子)和假单胞菌外毒素模块，该假单胞菌外毒素模块已经修饰为降低其免疫原性和蛋白酶敏感性，并且对表达间皮素的细胞提供较好的细胞毒性。RIT非常适合于治疗表达间皮素的卵巢癌、胃癌、鳞状细胞癌、间皮瘤和其它恶性细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向间皮素的重组免疫毒素对相关申请的交叉引用本申请要求2011年5月6日提交的美国临时专利申请系列号61/483531的优先权权益，并且其通过全文提述并入本文。关于在联邦资助的研究和开发下得到的专利技术的权利的声明不适用。参考光盘上提交的“序列表”、表或计算机程序表附录不适用。专利技术背景重组免疫毒素(RIT)是组合抗体片段与源自细菌或植物来源的细胞毒性蛋白的工程化治疗性蛋白质。RIT设计成选择剂，用于在没有多种与化学治疗策略有关的继发毒性的情况下靶向消除细胞。用于治疗癌症的RIT可以通过融合针对肿瘤关联细胞表面抗原的抗体的可变片段(Fv)与假单胞菌(Pseudomonas)外毒素A(PE)的片段来构建。使用假单胞菌外毒素A的38-kDa截短(PE38)得到的RIT已经在临床试验中获得值得注意的成功，但是具有限制，其包括较差的实体瘤穿透、高免疫原性、和非特异性毒性(Kreitman RJ 等，Clin Cancer Res.，15(16): 5274-9 (2009; Hassan R等,Clin Cancer Res.，13(17):5144-9(2007);Wayne AS 等,C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合分子，其包含具有式M?L1?FCS?FL?功能性PE域III的融合多肽，其中M是特异性结合间皮素的抗体，或其特异性结合间皮素的片段；L1由1至10个连续的氨基酸残基组成；FCS是弗林蛋白酶切割位点，其由能够被弗林蛋白酶切割的连续氨基酸残基组成；FL由3至8个连续的氨基酸残基组成，所述氨基酸残基独立选自甘氨酸和丝氨酸；功能性PE域III由在序列上与SEQ?ID?NO:1从位置395至613相同的连续氨基酸残基组成，任选地，所述连续氨基酸残基包含(i)与SEQ?ID?NO:1的609?613对应的一个或多个残基的取代，(ii)甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、或异亮氨酸对与SEQ?ID?NO...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.05.06 US 61/483,5311.一种嵌合分子，其包含具有式M-Ll-FCS-FL-功能性PE域III的融合多肽，其中 M是特异性结合间皮素的抗体，或其特异性结合间皮素的片段； LI由I至10个连续的氨基酸残基组成； FCS是弗林蛋白酶切割位点，其由能够被弗林蛋白酶切割的连续氨基酸残基组成； FL由3至8个连续的氨基 酸残基组成，所述氨基酸残基独立选自甘氨酸和丝氨酸； 功能性PE域III由在序列上与SEQ ID NO:1从位置395至613相同的连续氨基酸残基组成，任选地，所述连续氨基酸残基包含(i)与SEQ ID NO:1的609-613对应的一个或多个残基的取代，(ii)甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、或异亮氨酸对与SEQ ID NO:1的位置490对应的位置处的精氨酸的取代，(iii)与SEQ ID NO:1的残基对应的一个或多个残基的取代，所述SEQ ID NO:1的残基维持PE域III的表位或亚表位的免疫原性，或(iv)(i)-(iii)中任一项的组合。2.权利要求1的分子，其中所述抗体是微型抗体(minibody)、双抗体(diabody)、三抗体(triabody)、Fab’片段、F(ab) ’ 2片段、单链Fv蛋白(“scFv”)、或二硫化物稳定化的Fv蛋白(“dsFv”)片段。3.权利要求1的分子，其中所述抗体片段包含经由重链与LI的连接与所述分子的剩余部分融合的二硫化物稳定化的轻链和重链免疫球蛋白可变区。4.权利要求1的分子，其中所述抗体包含: VH链，该VH链包含CDRl氨基酸序列GYTMN(SEQ ID NO: 51)、CDR2氨基酸序列LITPYNGASSYNQKFRG(SEQ ID NO:52)、和 CDR3 氨基酸序列 GGYDGRGFDY(SEQ ID NO:53)，和 Vl链，该VL链包含CDRl氨基酸序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO:54)、CDR2氨基酸序列DTSKLAS (SEQ ID N0:55)、和选自下组的 CDR3 氨基酸序列:QQWSGYPLT(SEQ ID NO:56),QQffSKHPLT(SEQ ID NO:57), QQffSGHPLT(SEQ ID NO:58), QQffSAHPLT(SEQ ID NO:59)，QQffSQIPLT(SEQ ID NO:60), QQffGFNPLT(SEQ ID NO:61), QQffGTNPLT(SEQ ID NO:62)，QQffGSHPLT(SEQ ID NO:63), QQffGDFPLT(SEQ ID NO:64), QQffGDHPLT(SEQ ID NO:65)，QQffSAHPLT(SEQ ID NO:66)，和 QQWSGYPTT(SEQ ID NO:67)。5.权利要求4的分子，其中所述ICDR3氨基酸序列是QQWSKHPLT(SEQ ID NO: 57)。6.权利要求1的分子，其中LI的长度是3至5个氨基酸。7.权利要求1的分子，其中LI是ASGG(SEQ ID NO: 19)。8.权利要求1的分子，其中所述PE域III具有丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸对至少一个与SEQ ID NO:1中...

【专利技术属性】
技术研发人员：IH帕斯坦，J维尔顿，R比尔斯，
申请(专利权)人：由卫生与公共服务部部长代表的美国政府，
类型：
国别省市：