用于制备疫苗组合物的方法技术

一种制备包含一种或多种吸附至氨基酸的抗原的组合物的方法，其中所述方法包括：(i)在中和溶液混合物的情况中混合一种或多种抗原的溶液与氨基酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述一种或多种抗原和所述氨基酸的吸附物；(ii)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入期望的缓冲液中，由此形成所述组合物；并(iii)回收所述组合物；其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤(i)至(iii)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及用于制造无菌组合物的方法，所述无菌组合物包含结合至氨基酸的经修饰的抗原。专利技术背景疫苗接种是免疫学原则对人类健康的公知且最成功的应用。为了得到引入和批准，疫苗必须是有效的，并且所有疫苗的效力经常受到审查。有效的疫苗必须:诱导期望的免疫应答；在贮存时是稳定的；并且具有足够的免疫原性。在非活疫苗的情况中，特别地，经常必需控制施用后的抗原释放。已经显示了抗原与悬浮氨基酸的结合导致施用后抗原的缓慢释放，由此通过延长暴露在优化效力的情况中提高安全性。然而，包含此类抗原的配制剂的制造是成问题的，因为抗原吸附至氨基酸生成需要除去的不想要的化学副产物。此外，必须在无菌条件下实施方法。由于终产物是悬浮液，它不能通过过滤来灭菌，且由于活性成分是生物学的，它不能热灭菌。因而，经常通过在无菌套间内离心制造无菌悬浮液。美国专利4，070, 455描述了细碎的酪氨酸微粒，其具有其中分散的经戊二醛处理的变应原。该微粒通过混合酪氨酸在含水强酸中的溶液与经戊二醛处理的豚草花粉的溶液，然后中和所得的溶液来制备。通过离心取出含有经修饰的变应原的酪氨酸微细颗粒。EP0988862描述了用于免疫接种的抗原、TH-1诱导性佐剂和水微溶性氨基酸的配制剂。该配制剂如下制备，即在中和溶液混合物的情况中混合抗原和THl诱导性佐剂的溶液与微溶性氨基酸或衍生物在含水强酸中的溶液，由此共沉淀微溶性氨基酸和抗原。将所得的沉淀物通过离心自溶液取出，用新鲜缓冲液重建，并添加佐剂。使用离心取出氨基酸/抗原沉淀物需要实质性程度的无菌暴露和对操作员交互(operator interaction)的高度依赖性。本专利技术解决此问题。专利技术概述本专利技术克服了现有技术的问题，其通过创建使用交叉流过滤分出抗原/氨基酸吸附物的系统实现。该系统改编死端式(dead end)过滤中常规使用的蒸汽可灭菌的烧结不锈钢滤器，这通过在定制设计的闭合循环回路系统中纳入它们来进行。由于添加新的缓冲液以维持体积和规格，这容许抗原/氨基酸吸附物和化学副产物经由滤器取出。技术要求基于不能末端灭菌或过滤经修饰的变应原酪氨酸吸附物(MATA)产物而发生，所述产物是不溶性的 ，并且必须在无菌设施中制造。为了确保无菌性，必需开发密闭的原地清洗(CIP)原地蒸汽(SIP)系统。该系统的密闭性质意味着不得不将不溶性MATA成分在配制和缓冲液更换步骤期间在溶液中维持悬浮。为了实现这点，如本文中描述的那样开发连续交叉流过滤系统。由于闭合性质和蒸汽灭菌的能力，有可能在无菌套间外部定位硬件(尽管仍在受控生产区内)。因此，本专利技术与现有生产方法相比具有独特的优点。本专利技术的方法通过具有闭合无菌系统来实质性降低抗原产物对环境的暴露。该方法还降低对物理干预的需要，这使该方法避免错误(error)和微生物污染两者的风险。依照本专利技术的第一方面，提供了一种制备包含一种或多种吸附至氨基酸的抗原的组合物的方法，其中所述方法包括:⑴在中和溶液混合物的情况中混合一种或多种抗原的溶液与氨基酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述一种或多种抗原和所述氨基酸的吸附物；(ii)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入缓冲液中，由此形成所述组合物；并(iii)回收所述组合物；其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤⑴至(iii)。优选地，氨基酸是微溶性氨基酸。优选地，氨基酸是酪氨酸、色氨酸或其衍生物。更优选地，氨基酸是酪氨酸。优选地，所述一种或多种抗原是用戊二醛修饰的。在一个特别优选的实施方案中，所述一种或多种抗原自花粉、螨、霉、细菌或病毒衍生。在一个实施方案中，所述方法包括制备组合物，该组合物包含一种或多种用戊二醛修饰且吸附至酪氨酸的花粉抗原，所述方法包括:(i)用戊二醛修饰一种或多种花粉抗原；(ii)使用交叉流过滤除去过量的戊二醛以形成经修饰的花粉溶液；(iii)在中和溶液混合物的情况中混合所述经修饰的花粉溶液与酪氨酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述经修饰的花粉和所述酪氨酸的吸附物；(iv)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入缓冲液中，由此形成所述组合物；并(V)回收所述组合物；其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤(iii)至(V)。优选地，在EU GMP‘C’级/IS07类环境中实施步骤(iii)至(V)。优选地，在EU GMP ‘B’级/IS05类环境内实施步骤⑴和(ii)。在另一个实施方案中，所述方法包括制备组合物，该组合物包含一种或多种用戊二醛修饰且吸附至酪氨酸的花粉抗原，其中所述方法包括:(i)将所述一种或多种花粉抗原提取到溶液中以形成花粉提取物溶液；(ii)过滤所述花粉提取物溶液以除去固体；(iii)实施交叉流过滤，并分离包含所述花粉抗原的保留物；(iv)用戊二醛修饰所述一种或多种花粉抗原；(V)使用交叉流过滤除去过量的戊二醛以形成经修饰的花粉溶液；(vi)无菌过滤所述经修饰的花粉溶液；(vii)在中和溶液混合物的情况中混合所述经修饰的花粉溶液与酪氨酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述经修饰的花粉和所述酪氨酸的吸附物；(viii)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入缓冲液中，由此形成所述组合物；并(ix)回收所述组合物；其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤(vii)至(ix)。优选地，在EU GMP‘C’级/IS07类环境中实施步骤(vii)至(ix)。优选地，在EU GMP ‘B’级/IS05类环境内实施步骤⑴和(vi)。花粉抗原可以是但不限于剪股颖(Bent)花粉、狐尾草(Foxtail)花粉、黄花茅(Sweet vernal)花粉、三毛草(False oat)花粉、雀麦(Brome)花粉、洋狗尾草(Cresteddogstail)花粉、鸭茅(Cocksfoot)花粉、羊茅(Fescue)花粉、绒毛草(Yorkshire fog)花粉、麦草(Rye grass)花粉、梯牧草(Timothy)花粉、草甸(Meadow)花粉和栽培黑麦(Cultivated rye)花粉。优选地，所述一种或多种抗原由剪股颖花粉、狐尾草花粉、黄花茅花粉、三毛草花粉、雀麦花粉、洋狗尾草花粉、鸭茅花粉、羊茅花粉、绒毛草花粉、麦草花粉、梯牧草花粉、草甸花粉和栽培黑麦花粉组成。[0041 ] 优选地，使用0.2 μ m孔径滤器过滤花粉提取物溶液；换言之，优选地，组合物包含下组中的所有花粉，所述组由剪股颖花粉、狐尾草花粉、黄花茅花粉、三毛草花粉、雀麦花粉、洋狗尾草花粉、鸭茅花粉、羊茅花粉、绒毛草花粉、麦草花粉、梯牧草花粉、草甸花粉和栽培黑麦花粉组成。优选地，将花粉于约2至约8°C，更优选地，约5°C提取到酚缓冲盐水溶液，优选为PH6.5(优选地，其含有氯化钠、磷酸二氢钾、十二水合磷酸二钠、80%w/w液化酚和注射用水(WFI))中。优选地，将提取实施约12-30小时，更优选地约14至约24小时，仍更优选约18小时。优选地，使用5-10kDa分子量截留的膜实施如本文中描述的用于分离保留物和/或除去过量戊二醛的交叉流过滤。更优选地，膜具有IOkDa分子量截留。优选地，使用多烧结不锈钢滤器，更优选5μπι多烧结不锈钢滤器，优选用1.1-1.3巴的压力实施用于分出吸附物的交叉流过滤。通过在中和混合物(优选用NaOH进行)的情况中混合抗原与强酸，优选无机酸，优选氢氯酸(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备包含一种或多种吸附至氨基酸的抗原的组合物的方法，其中所述方法包括：(i)在中和溶液混合物的情况中混合一种或多种抗原的溶液与氨基酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述一种或多种抗原和所述氨基酸的吸附物；(ii)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入缓冲液中，由此形成所述组合物；并(iii)回收所述组合物；其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤(i)至(iii)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.21 GB 1106802.01.一种制备包含一种或多种吸附至氨基酸的抗原的组合物的方法，其中所述方法包括: (i)在中和溶液混合物的情况中混合一种或多种抗原的溶液与氨基酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述一种或多种抗原和所述氨基酸的吸附物； (?)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入缓冲液中，由此形成所述组合物；并 (iii)回收所述组合物； 其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤(i)至(iii)。2.依照权利要求1的方法，其中所述氨基酸是酪氨酸。3.依照权利要求1或2的方法，其中所述一种或多种抗原是用戊二醛修饰的。4.依照任一前述权利要求的方法，其中所述一种或多种抗原是自花粉衍生的。5.依照权利要求1的方法，其包括制备包含一种或多种用戊二醛修饰且吸附至酪氨酸的花粉抗原的组合物，其中所述方法包括: (i)用戊二醛修饰所述一种或多种花粉抗原； (?)使用交叉流过滤除去过量的戊二醛以形成经修饰的花粉溶液； (iii)在中和溶液混合物的情况中混合所述经修饰的花粉溶液与酪氨酸在含水酸中的溶液，由此形成包含所述经修饰的花粉和所述酪氨酸的吸附物；` (iv)通过交叉流过滤将所述吸附物分出入缓冲液中，由此形成所述组合物；并 (V)回收所述组合物； 其中在无菌环境中且在闭合系统内实施步骤(iii)至(V)。6.依照权利要求1的方法，其包括制备包含一种或多种用戊二醛修饰且吸附至酪氨酸的花粉抗原的组合物，其中所述方法包括: (i)将所述一种或多种花粉抗原提取到溶液中以形成花粉提取物溶液； (?)过滤所述花粉提取物溶液以除去固体； (iii)实施交叉流过滤，并分离包含所述花粉抗原的保留物； (iv)用戊二醛修饰所述一种或多种花粉抗原； (v)使用交叉流过滤除去过量的戊二醛以形成经修饰的花粉溶液； (vi)无菌过滤所述经修饰的花粉溶液； (vii)在中和溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：M斯金纳，S休英斯，D帕克，R波伦，
申请(专利权)人：过敏疗法英国有限责任公司，
类型：
国别省市：