叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测制造技术

本申请提供叠加的除草剂耐受性大豆事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测，包括新颖的表达盒和转基因插入物，其包含赋予对草甘膦、芳氧基链烷酸酯、和草丁磷除草剂的抗性的多种性状。还提供控制抗性杂草的方法、植物育种和除草剂耐受性植物。在一些实施方案中，事件序列可以与其它性状，包括例如其它除草剂耐受性基因和/或昆虫抑制性蛋白质“叠加”。还提供用于检测大豆及相关植物材料中的事件pDAB8264.44.06.1的端点TaqMan PCR测定法。一些实施方案可以实施对植物材料的高通量接合性分析，并且可以使用其它实施方案来独特地鉴定包含本发明专利技术事件的任何育种大豆系的接合性。还提供可用于进行这些测定法的试剂盒和条件。

Superimposed herbicide tolerance events 8264.44.06.1, related transgenic soybean lines, and their detection

This application provides detection of herbicide tolerant soybean event superimposed 8264.44.06.1, transgenic soybean lines, and, including the novel expression cassette and transgenic insert, which contains a variety of traits that confer resistance to glyphosate, aryloxyalkanoate and glufosinate herbicides. Methods for controlling resistant weeds, plant breeding and herbicide tolerance plants are also provided. In some embodiments, event sequences can be superimposed with other traits, including other herbicide tolerance genes and / or insect inhibitory proteins. Also provides for the detection of soybean and related plant materials in the event pDAB8264.44.06.1 TaqMan PCR endpoint determination. Some implementations can carry out high-throughput conjugation analysis of plant materials, and other embodiments can be used to uniquely identify the articulation of any breeding soybean line containing the invention. The kits and conditions that can be used for these measurements are also provided.

【技术实现步骤摘要】
叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测本申请是2011年12月2日提交的申请号为201180066807.X(PCT申请号PCT/US2011/063129)、专利技术名称为“叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测”的专利技术专利申请的分案申请。专利技术背景草甘膦(N-膦酰基甲基甘氨酸(phosphonomethylglycine))，即一种广谱除草剂，抑制5-烯醇丙酮酰莽草酸(enolpyruvylshikimate)-3-磷酸合酶(EPSPS)，即一种在生成植物细胞中必需的芳香族氨基酸的莽草酸生物合成途径中的酶。对EPSPS的抑制有效破坏蛋白质合成，由此杀死受影响的植物细胞。由于草甘膦是非选择性的，它杀死杂草和作物植物两者。如此，当可以将作物植物修饰为对草甘膦有抗性，容许期望的植物幸免于对草甘膦的暴露时，它在作物植物的情况下是有用的。已经使用重组DNA技术来分离草甘膦抗性的突变体EPSP合酶。此类草甘膦抗性突变体EPSP合酶可以转化到植物中，并且对经转化的植物赋予草甘膦抗性。举例而言，自土壤杆菌(Agrobacterium)菌株CP4分离草甘膦耐受性基因，如美国专利No.5,633,435中所描述的。在此通过提及而并入此参考文献及本文中引用的所有参考文献。已经经由引入突变创建其它草甘膦耐受性基因。这些包括由Comai分离并记载于美国专利No.5,094,945,4,769,061和4,535,060的AroA基因。已经利用通过用丙氨酸残基取代氨基酸位置80和120之间的甘氨酸残基得到的单一突变体，如记载于美国专利No.5,310,667的。双重突变体已经记载于美国专利No.6,225,114和5,866,775，其中在上述突变外，将第二处突变(用苏氨酸残基取代位置170和210之间的丙氨酸残基)引入野生型EPSPS基因中。其它工作导致草甘膦抗性玉米的生成，其经由导入携带由GenBank登录号X63374编码的氨基酸序列的残基102(将苏氨酸改变为异亮氨酸)和残基106(将脯氨酸改变为丝氨酸)处的突变的经修饰的玉米EPSPS基因进行。参见美国专利No.6,566,587和6,040,497。在大豆中提供对草甘膦的抗性的事件的例子包括大豆系GTS40-3-2(Padgette等1995)、大豆事件MON89788(美国专利No.7,608,761)，美国专利No.7,608,761涉及大豆事件MON89788，其中每种通过将cp4epsps基因插入大豆中生成。草甘膦耐受性耕种系统的普遍采用和草甘膦日益增加的使用已经促成近年来草甘膦抗性且难以控制的杂草的流行。在种植者面对草甘膦抗性杂草或向更难以控制的杂草物种的转变的地区，种植者可以通过与会控制漏过的杂草的其它除草剂罐混合或交替来补偿草甘膦的弱点。一种在许多情况中控制阔叶逃脱的流行的且有效的罐混合物(tankmix)配偶(partner)是2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)。2,4-D，其已经作为除草剂使用超过60年，提供对许多一年生、二年生、和多年生阔叶杂草(包括玉米、大豆和棉中的几种关键杂草)的广谱、出土后控制。中耕作物生产中受到2,4-D(560–1120gae/ha比率)控制的关键杂草包括豚草(Ambrosiaartemisiifolia)、三裂叶豚草(Ambrosiatrifida)、瘤突苍耳(Xanthiumstrumarium)、藜(Chenopodiumalbum)、向日葵(Helianthusannuus)、番薯属(Ipomoea)物种、苘麻(Abutilontheophrasti)、小酒白草(ConyzaCanadensis)、和决明子(Sennaobtusifolia)。2,4-D提供对几种关键杂草的部分控制，所述杂草包括宾夕蓼(Polygonumpensylvanicum)、春蓼(Polygonumpersicaria)、丝路蓟(Cirsiumarvense)、药用蒲公英(Taraxacumofficinale)、和苋属(Amaranthus)物种，包括西部苋(Amaranthusrudis)和长芒苋(Amaranthuspalmeri)。2,4-D的进一步使用的限制是其在双子叶作物如大豆或棉中的选择性是非常差的，并且因此2,4-D通常不在敏感性双子叶作物上(及一般不在其附近)使用。另外，2,4-D在禾本科作物中的使用稍受限于可以发生的作物损伤的性质。可以在种植不整地种植大豆和棉前使用与草甘膦组合的2,4-D来提供更稳健的烧毁处理；然而，由于这些双子叶物种对2,4-D的敏感性，这些烧毁处理必须在种植前至少14-30天发生(Agriliance,2005)。一种已经对其降解2,4-D的能力进行过广泛研究的生物体是真养产碱杆菌(Ralstoniaeutropha)，其含有编码tfdA(Streber等,1987)，即一种催化矿化途径中的第一步的酶的基因。(参见美国专利No.6,153,401和GENBANK登录号M16730)。已经报告了tfdA降解2,4-D(Smejkal等,2001)。与2,4-D相比，源自降解的产物具有很少至没有除草剂活性。tfdA已经在转基因植物中使用以在通常对2,4-D敏感的双子叶植物(例如棉和烟草)中赋予2,4-D抗性(Streber等(1989),Lyon等(1989),Lyon(1993),及美国专利No.5,608,147)。已经从环境中鉴定出许多编码能够降解2,4-D的蛋白质的tfdA型基因，并且将其存储于Genbank数据库中。许多同源物与tfdA类似(大于85％氨基酸同一性)。然而，存在许多如下的多核苷酸序列，其与tfdA具有显著较低的同一性(25-50％)，但具有与α-酮戊二酸双加氧酶Fe(II)双加氧酶有关的特征性残基。一个与tfdA具有低序列同一性(小于35％)的2,4-D降解基因的例子是来自食酸代尔夫特菌(Delftiaacidovorans)的aad-12基因(美国专利申请2011/0203017)。aad-12基因编码S-对映体特异性α-酮戊二酸依赖性加双氧酶，其已经在植物中使用以赋予对某些苯氧基生长素除草剂，包括但不限于：苯氧基乙酸除草剂诸如2,4-D和MCPA；及苯氧基丁酸除草剂，诸如2,4-DB和MCPB)和吡啶基氧基链烷酸除草剂(例如，吡啶基氧基乙酸(pyridyloxyaceticacid)除草剂，诸如定草酯(triclopyr)和氟草烟(fluroxypyr))，且包括活性成分的酸、盐、或酯形式的耐受性。(参见例如WO2007/053482)。草丁磷(Glufosinate-ammonium)(“草丁磷(glufosinate)”)是膦丝菌素类除草剂中的一种非系统性、非选择性除草剂。主要用于一大批阔叶和多草杂草的出土后控制的L-膦丝菌素(草丁磷中的活性成分)经由对谷氨酰胺合酶(一种对于植物中的氨解毒必需的酶)的不可逆抑制来控制杂草。草丁磷除草剂是例如在商标名称BASTA、和下商业出售。从土壤细菌绿灰链霉菌(Streptomycesviridochromogenes)分离的酶膦丝菌素N-乙酰基转本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含基因组的转基因大豆植物细胞，所述基因组包含与SEQ ID NO:14具有至少95％同一性的第一多核苷酸区段和与SEQ ID NO:15具有至少95％同一性的第二多核苷酸区段，其中所述细胞不是能再生为植物的细胞。

【技术特征摘要】
2010.12.03 US 61/419，706;2011.04.05 US 61/471，845;1.一种包含基因组的转基因大豆植物细胞，所述基因组包含与SEQIDNO:14具有至少95％同一性的第一多核苷酸区段和与SEQIDNO:15具有至少95％同一性的第二多核苷酸区段，其中所述细胞不是能再生为植物的细胞。2.权利要求1的植物细胞，其包含基因组，所述基因组包含如存在于以保藏号PTA-11336保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的代表性种子中的事件pDAB8264.44.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·崔，T·霍夫曼，N·周，S·N·诺瓦克，J·科隆，D·帕克赫斯特，S·托勒多，T·赖特，S·拉塞尔，B·海尔德，V·塞卡，
申请(专利权)人：陶氏益农公司，MS技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US