布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法，步骤如下：1)以2‑CTC树脂为载体，制备Fmoc‑Pro‑树脂；2)以固相合成方法制备全保护9肽树脂；3)裂解全保护9肽树脂，得到全保护9肽；4)将全保护9肽与盐酸一乙胺在偶联剂的作用下得到全保护布舍瑞林，或将全保护9肽与盐酸氨基脲在偶联剂的作用下得到全保护戈舍瑞林；5)将全保护布舍瑞林或全保护戈舍瑞林在溶剂Z中进行钯碳催化的氢解反应，反应完毕后滤除钯碳，得到布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液；6)布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液经过纯化，冻干得到布舍瑞林或戈舍瑞林；其中，步骤5)中的溶剂Z为5％吡啶盐酸盐的甲醇溶液或85～95％的醋酸水溶液。

Preparation method of Bushrui Lin or goserelin

Step method, the invention relates to a preparation of Bushrui Lin or Gore Sherry Lin are as follows: 1) to 2 CTC resin as the carrier, the preparation of Fmoc Pro resin; 2) by solid phase synthesis method for preparing full protection of 9 peptide resin; 3) the 9 peptide resin cracking protection, full protection of 9 peptides; 4 the 9 peptide and protection) ethylamine hydrochloride by coupling agent to get full protection of Bushrui Lin, or the full protection of 9 peptide and semicarbazide hydrochloride get full protection Gore Sherry Lin by coupling agent; 5) will protect Bushrui Lin or protect Gore Sherry Lin in solvent Z palladium carbon catalytic hydrogenolysis after the reaction, filtering the palladium carbon, Bushrui Lin solution or Gore Sherry Lin solution; 6) or Gore Sherry Lin Bushrui Lin solution solution is purified and freeze-dried to obtain Bushrui Lin or Gore Sherry Lin; among them, step 5) solvent Z is 5% pyridine hydrochloride The methanol solution of salt or 85 ~ 95% acetic acid solution.

【技术实现步骤摘要】
布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法
本专利技术涉及一种化合物的制备方法，具体涉及布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法。
技术介绍
布舍瑞林(Buserelin)和戈舍瑞林(Goserelin)都属于促性腺素释放激素(GnRH)类似物，其结构用氨基酸缩写表示为：Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-R，当布舍瑞林中R＝NHEt，戈舍瑞林中R＝Azgly-NH2，结构式如下：目前布舍瑞林和戈舍瑞林的合成方法包括固相合成法和液相合成法。液相合成方法多见于早期的文献，比如WO97/48726和EP1008656。但液相合成操作复杂，每合成一步都要进行纯化，不利于工业生产、应用价值不高。由于布舍瑞林和戈舍瑞林中的D-Ser侧链tBu与固相合成方法中广泛使用的Fmoc/tBu保护策略不兼容，文献中均采用改进的Fmoc/tBu固相反应体系来进行制备。目前采用固相合成的专利主要为几篇国内专利，各专利方法围绕保护基策略和脱保护方法，总结这些专利都是先合成一个全保护肽然后再通过不同方法脱除保护基。根据结构，可能有保护基的位点有His、Ser、Tyr和Arg的侧链。翰宇药业制备布舍瑞林的专利(申请号201010256054.6)采用His(Trt)、Ser(Trt)、Arg(HCl)的保护策略，脱保护试剂为5％TFA二氯甲烷溶液；翰宇药业制备戈舍瑞林的专利(申请号201210155366.7)采用His(Trt)、Ser(Trt)、Tyr(Bzl)、Arg(NO2)的保护策略，脱保护方法为氢转移反应；宁波三生药业制备布舍瑞林的专利(申请号201310557778.8)采用的保护策略为His(Trt)、Ser(Bzl)、Tyr(Bzl)、Arg(NO2)的保护策略，脱除条件为甲醇或乙醇溶液中钯碳催化氢解；承德医学院制备布舍瑞林的专利(申请号201410185283.1)采用的保护策略为His(Trt)、Tyr(Bzl)、Arg(NO2)，脱保护分两步首先采用氢转移反应脱除Bzl和NO2，然后再用约15％TFA二氯甲烷溶液脱除Trt；苏州天马制备制备戈舍瑞林的专利(申请号201510005951.2)采用的保护策略为His(Trt)、Tyr(Bzl)、Arg(NO2)，脱保护方法也分两步首先用20％TFA二氯甲烷溶液脱除Trt，再采用氢转移反应脱除Bzl和NO2。后两篇专利中的His(Trt)没有随着氢转移反应脱除，而是单独采用TFA进行脱除。这和我们的具体实验现象相吻合。我们发现，His(Trt)中的Trt保护基采用常规的氢转移反应或催化氢解很难脱除或者反应很慢，采用升温或加压等方法虽然可以略为提高反应速度，但又会明显加大杂质的含量。所以目前在实际生产中采用TFA的二氯甲烷溶液进行脱除，但这种方法不可避免的会有两个问题：(1)分子中需要保留的D-Ser的叔丁醚也是对酸敏感的基团，因此会有脱除该叔丁醚的副反应发生；(2)在反应完毕后减压蒸除反应溶剂时，反应体系TFA组成比例会持续发生变化，蒸馏时间也会受设备状态等因素影响而难以准确控制，而这些都会影响脱除叔丁醚的副反应，从而造成生产工艺不稳定，给实际生产带来不确定性。此外，在实际实验中，我们发现全保护的布舍瑞林和戈舍瑞林在甲醇和乙醇中的溶解度很小，由于常规的氢转移反应和氢解反应常用的溶剂是甲醇和乙醇，因此采用常规方法脱除Bzl和NO2保护基时由于溶解度的问题，使反应很慢或者催化剂用量太大而带来很多安全隐患。因此，开发一种反应条件温和，操作简单，易于实现产业化生产的、高选择性的脱保护基方法，对于布舍瑞林和戈舍瑞林的放大生产很有必要。
技术实现思路
为克服上述缺陷，本专利技术提供一种布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法，步骤如下：1)以2-CTC树脂为载体，制备Fmoc-Pro-树脂；2)以固相合成方法制备全保护9肽树脂Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-树脂；3)裂解全保护9肽树脂，得到全保护9肽Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH；4)将全保护9肽与盐酸一乙胺在偶联剂的作用下得到全保护布舍瑞林，或将全保护9肽与盐酸氨基脲在偶联剂的作用下得到全保护戈舍瑞林；5)将全保护布舍瑞林或全保护戈舍瑞林在溶剂Z中进行钯碳催化的氢解反应，反应完毕后滤除钯碳，得到布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液；6)布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液经过纯化，冻干得到布舍瑞林或戈舍瑞林；其中，步骤5)中的溶剂Z为5％吡啶盐酸盐的甲醇溶液或85～95％的醋酸水溶液。其中，步骤5)中的反应的温度为58℃-65℃；优选地，反应时间为2-5小时。其中，步骤1)制备中Fmoc-Pro-树脂是由Fmoc-Pro-OH与DIPEA活化，然后加入取代度0.6～1.0mmol/g的2-CTC树脂中进行偶联，反应完毕用甲醇封闭树脂20分钟获得。其中，步骤2)中所述的固相合成方法为Fmoc固相多肽合成方法，以Fmos保护氨基的氨基酸逐一合成；优选地，Fmoc固相多肽合成方法选用的偶联剂为DIPCDI+A或者DIPEA+A+B，其中，A选自HOBt、HOAt或其组合，B选自PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU或其至少两种的组合；更优选地，偶联剂中各成分的比例以摩尔比例计为DIPCDI:A＝1：0.8-1.5(1.2:1.1)，DIPEA:A:B＝2：0.8-1.5：0.8-1.5(2.0:1.1:1.0)；所述Fmoc保护氨基的氨基酸为Fmoc-Arg(NO2)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Bzl)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和Pyr-OH。其中，步骤3)中裂解所用试剂为1～3％的TFA/DCM溶液，裂解时间为2～3小时；优选地，所述TFA和DCM的体积比为1：45-55(1：48-50，1：49)；更优选地，裂解完成后还包含以冰醋酸进行沉淀，分离沉淀，并以乙醚洗涤的步骤。其中，步骤4)中的偶联剂为EDCI和NMM。其中，步骤6)中的纯化方法为以高效液相法。有益效果与已有技术相比，本工艺反应条件温和，操作简单，选择性好，所得粗肽纯度高，收率高，有利于放大生产。布舍瑞林合成路线图：具体实施方式实施例1全保护肽树脂的合成称取替代度为0.91mmol/g的2-CTC树脂55.0g(50mmol)，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。称取33.7g(100mmol)Fmoc-Pro-OH，加适量DMF溶解，冰水浴下加入12.9g(100mmol)DIPEA，搅拌4～6分钟后加入到树脂中，偶联反应5分钟后，再补加12.9g(100mmol)DIPEA，再偶联反应1小时后向反应液中加入甲醇55ml，封闭反应20分钟后，抽除反应液，DMF洗涤树脂三次，得到Fmoc-Pro-CTC树脂.加入DBLK脱保护5+7分钟，DMF洗涤树脂6次。称取66.2g(150mmol)Fmoc-Arg(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法，步骤如下：1)以2‑CTC树脂为载体，制备Fmoc‑Pro‑树脂；2)以固相合成方法制备全保护9肽树脂Pyr‑His(Trt)‑Trp‑Ser(Trt)‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(NO2)‑Pro‑树脂；3)裂解全保护9肽树脂，得到全保护9肽Pyr‑His(Trt)‑Trp‑Ser(Trt)‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(NO2)‑Pro‑OH；4)将全保护9肽与盐酸一乙胺在偶联剂的作用下得到全保护布舍瑞林，或将全保护9肽与盐酸氨基脲在偶联剂的作用下得到全保护戈舍瑞林；5)将全保护布舍瑞林或全保护戈舍瑞林在溶剂Z中进行钯碳催化的氢解反应，反应完毕后滤除钯碳，得到布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液；6)布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液经过纯化，冻干得到布舍瑞林或戈舍瑞林；其中，步骤5)中的溶剂Z为5％吡啶盐酸盐的甲醇溶液或85～95％的醋酸水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种布舍瑞林或戈舍瑞林的制备方法，步骤如下：1)以2-CTC树脂为载体，制备Fmoc-Pro-树脂；2)以固相合成方法制备全保护9肽树脂Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-树脂；3)裂解全保护9肽树脂，得到全保护9肽Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH；4)将全保护9肽与盐酸一乙胺在偶联剂的作用下得到全保护布舍瑞林，或将全保护9肽与盐酸氨基脲在偶联剂的作用下得到全保护戈舍瑞林；5)将全保护布舍瑞林或全保护戈舍瑞林在溶剂Z中进行钯碳催化的氢解反应，反应完毕后滤除钯碳，得到布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液；6)布舍瑞林溶液或戈舍瑞林溶液经过纯化，冻干得到布舍瑞林或戈舍瑞林；其中，步骤5)中的溶剂Z为5％吡啶盐酸盐的甲醇溶液或85～95％的醋酸水溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤5)中的反应的温度为58℃-65℃；优选地，反应时间为2-5小时。3.根据权利要求1-2任一项所述的制备方法，其中，步骤1)制备中Fmoc-Pro-树脂是由Fmoc-Pro-OH与DIPEA活化，然后加入取代度0.6～1.0mmol/g的2-CTC树脂中进行偶联，反应完毕用甲醇封闭树脂20分钟获得。4.根据权利要求1-3任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚志军，聂涛，宓鹏程，陶安进，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44