PD‑L1抗体及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人PD‑L1蛋白，该抗体或其抗原结合部分包含分别如SEQ ID NO.1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列及分别如SEQ ID NO.4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。本发明专利技术还公开了上述单克隆抗体或其抗原结合部分在制备治疗PD‑L1相关性疾病的药物中的用途。本发明专利技术的PD‑L1抗体，能高效特异地结合人PD‑L1分子，通过有效阻断PD‑L1与其配体PD‑1及CD80的结合，能有效促进人的免疫反应，并能促进人的免疫系统对肿瘤的杀伤作用，具有很好的应用前景。

PD L1 antibodies and uses thereof

The invention discloses a monoclonal antibody separation or antigen binding part, the combination of PD L1 protein, the antibody or antigen binding part contains respectively such as SEQ ID NO.1, 2 and 3 are shown in the variable region of heavy chain CDR1, CDR2 and CDR3 respectively, such as SEQ ID sequence and NO.4 5 and 6 shows light chain variable region CDR1 and CDR2 and CDR3 sequences. The present invention also discloses the monoclonal antibody or antigen binding by PD L1 uses of some related diseases in a drug for treating. PD L1 antibody of the invention can effectively and specifically binding to human PD L1 molecule, by effectively blocking the binding of PD and its ligand PD L1 1 and CD80, can effectively promote the immune response of human, and can promote the killing effect on tumor immune system, has good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
PD-L1抗体及其用途
本专利技术涉及基因工程抗体
，尤其涉及一种抗PD-L1(程序性死亡受体-配体1)抗体及其用途。
技术介绍
双信号理论是调控免疫反应的重要理论。T细胞的激活除了依靠T细胞受体刺激信号以外还需要通过CD28受体家族提供的第二信号来促进或者下调T细胞反应。CD28受体家族包括:CD28,CTLA-4,ICOS,PD-1,和BTLA等分子。其中CD28和ICOS这两种受体是用来传递共刺激信号来激活免疫反应(Hutloffetal.(1999)Nature397:263-266；Hansenetal.(1980)Immunogenics10:247-260)，CTLA-4，PD-1和BTLA分子用来传递共抑制信号来抑制免疫反应。PD-1(Programmedcelldeath1)程序性死亡受体1，CD279，在活化的T细胞而不是静息状态下的T细胞中表达。PD-1分子有两个配体：PD-L1和PD-L2。在其和配体结合时能够给T细胞传递抑制信号，从而抑制细胞的增殖并减少细胞因子的分泌例如IL-2和IFNγ等(Nishimuraetal.(1999)Immunity11:141；Nishimuraetal.(2001)Science291:319；Chemnitzetal.(2004)J.Immunol.173:945)。PD-L1分子能够与T细胞表面的PD-1分子或者B7-1(CD80)分子结合并抑制T细胞的激活(Butteetal.(2007)Immunity27:111)。PD-L1通常在静息状态下的淋巴细胞如B细胞、树突状细胞、巨噬细胞以及T细胞上低表达，然而在这些淋巴细胞活化以后会上调表达PD-L1。PD-L1也会在非淋巴细胞上表达例如：内皮细胞、心肌细胞、肺细胞、胰腺细胞、肌肉细胞、角质细胞等细胞。在非淋巴细胞上表达PD-L1表明该分子在控制自身反应性T细胞、B细胞以及骨髓细胞中起到重要的作用。PD-L1在上皮以及内皮细胞上的表达主要由IFNγ诱导。除此之外，PD-L1还在各种人癌症细胞上高表达(Dongetal(2002)Nat.Med8:787-9)并且PD-L1的表达与肿瘤的不良预后有着密切关系。PD-L1与PD-1结合致使肿瘤沁润淋巴细胞的活性受到抑制并导致了肿瘤的免疫逃逸(Dongetal.(2003)J.Mol.Med.81:281-7；Blanketal.(2005)CancerImmunol.Immunother.54:307-314；Konishietal.(2004)Clin.CancerRes.10:5094-100)。抑制PD-1与PD-L1的相互作用能够恢复这种肿瘤的免疫抑制现象(Iwaietal.(2002)Proc.Nat7.Acad.SciUSA99:12293-7；Brownetal.(2003)J.Immunol.170:1257-66)。除此之外，病毒感染也能导致宿主细胞上PD-L1的高表达。因此，PD-L1的阻断抗体能够被用于抑制肿瘤生长及促进宿主对病毒感染的有效控制。目前，FDA于2016年5月批准罗氏atezolizumab(MPDL3280A)PD-L1抗体作为二线药物用于治疗一种叫做urothelialcarcinoma的最常见晚期膀胱癌。但是由于进口大分子药物对于病人来说需要花费高昂的费用，因此，研发新的抗PD-L1单克隆抗体，减少病人负担，降低治疗费用是一个亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决目前临床上缺乏价格优惠、效果好的PD-L1抗体的技术问题，提供一种新的PD-L1抗体，该PD-L1抗体能高效特异地结合人PD-L1分子，并能够促进人的免疫系统对肿瘤的杀伤作用，同时还能减轻病人的治疗费用负担。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在本专利技术的一个方面，提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人PD-L1蛋白，该抗体或其抗原结合部分包含分别如SEQIDNO.1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列及分别如SEQIDNO.4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。在本专利技术中，所述“抗体”应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子。因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物以及抗体的功能等同物和同源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb或Fd，或者双链抗体(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆与表达在EP.A-0120694和EP.A-0125023中有所描述。本专利技术所述单克隆抗体可以是单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。抗体可以通过许多方式修饰，可用DNA重组技术来产生保留原来抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这种技术可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定区(CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。还可以对杂交瘤细胞或产生抗体的其它细胞进行遗传突变或其它改变，这可以改变或者不改变所产生抗体的结合特异性。本专利技术所述单克隆抗体除了重链和轻链中的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3和连接序列外，其它为框架区。框架区可在结合所需的三维结构不受影响的条件下被其他序列置换，抗体特异性的分子基础主要来自于它的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3，这些区域是与抗原结合的关键部位。为维持优选的结合特性，CDR的序列应尽可能保留，然而，可能需要一些氨基酸改变使结合特性最优化，本领域的技术人员可以用标准做法来达到此目的。本专利技术所述单克隆抗体在人源化过程中，为了保持抗体与PD-L1的结合活性，对于框架区的关键氨基酸位点予以保留(即回复突变位点)，这些氨基酸对于人源化以后的抗体活性有着至关重要的作用。优选的，所述重链可变区还包含下述回复突变位点的任意一个或任意两个以上的组合：1E、37V、44S、49A、91I、94R、108T、77N、40T。所述轻链可变区还包含下述回复突变位点的任意一个或任意两个以上的组合：43S、60D、63T、42Q。优选的，所述重链可变区还包含下述突变位点：52位D突变为E(D52E)、53位G突变为A(G53A)、或53位G突变为V(G53V)，这几个CDR区的定点突变能增加抗体的稳定性、提高抗体效价。拥有这些取代位置中任一个取代位置的抗体和拥有所有取代位置的抗体同样具有结合PD-1的活性。氨基酸取代可同时存在于框架区和CDR区，或单独出现在框架区或CDR区。优选的，本专利技术抗体或其抗原结合部分包含SEQIDNO.7～SEQIDNO.26中任意一条所示的重链可变区序列和SEQIDNO.27～SEQIDNO.33中任意一条所示的轻链可变区序列。在本专利技术的一个具体实施方案中，抗体可能包含a)一个重链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.18所示序列至少有95％的一致性和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人PD‑L1蛋白，该抗体或其抗原结合部分包含分别如SEQ ID NO.1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列及分别如SEQ ID NO.4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。

【技术特征摘要】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人PD-L1蛋白，该抗体或其抗原结合部分包含分别如SEQIDNO.1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列及分别如SEQIDNO.4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述重链可变区还包含下述回复突变位点的任意一个或任意两个以上的组合：1E、37V、44S、49A、91I、94R、108T、77N、40T。3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述轻链可变区还包含下述回复突变位点的任意一个或任意两个以上的组合：43S、60D、63T、42Q。4.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述重链可变区还包含下述突变位点：52位D突变为E、53位G突变为A、或53位G突变为V。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，该抗体或其抗原结合部分包含SEQIDNO.7～SEQIDNO.26中任意一条所示的重链可变区序列和SEQIDNO.27～SEQIDNO.33中任意一条所示的轻链可变区序列。6.根据权利要求5所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，该抗体或其抗原结...

【专利技术属性】
技术研发人员：方磊，王正毅，郭炳诗，臧敬五，
申请(专利权)人：臧敬五，
类型：发明
国别省市：上海,31