一种用动物组织提取蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及一种用动物组织提取蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将新鲜的动物组织破碎之后用蒸馏水洗涤8‑10次，去除血液成分，然后挤压处理成糊状；（2）将（1）中的组织中加入0.5mol/L的TRIS‑HCl pH7.6、1%脱氧胆酸钠和0.5g/mlPMSF以及加入细球菌酸酶，混合后搅拌1小时；（3）将（2）得到的混合物离心操作30min，分离上清和沉淀物；（4）将（3）中加入0.5mol/L的TRIS‑HCl pH7.6、0.5g/mlPMSF洗涤二次，再离心操作30min，放弃上清，得到组织细胞外基质混合物；（5）将（4）得到的混合物加入NaCl后搅拌提取；本发明专利技术的优点是工业化生产、工艺流程简单和生产材料来源广泛。

A method of extracting protein from animal tissues

The invention relates to a process for extracting protein in animal tissues, which comprises the following steps: (1) after fresh animal tissue crushing and washing with distilled water 8 10 times, the removal of blood components, and then extruded into paste; (2) (1) will join in 0.5mol/L TRIS in HCl pH7.6, 1% sodium deoxycholate and 0.5g/mlPMSF and adding mlicrococcus acid, mixing for 1 hours; (3) to (2) a mixture of centrifugal operation 30min, separated from the supernatant and precipitate; (4) to (3) the addition of 0.5mol/L TRIS HCl pH7.6 0.5g/ mlPMSF, washed two times, again centrifugal operation 30min, give up the supernatant obtained tissue extracellular matrix mixtures; (5) to (4) by adding a mixture of NaCl after stirring extraction; the invention has the advantages of simple process, industrial production and production of wide material sources .

【技术实现步骤摘要】
一种用动物组织提取蛋白的方法
本专利技术属于提取蛋白
，具体涉及一种用动物组织提取蛋白的方法。
技术介绍
目前在临床中使用较多的注射用填充材料有透明质酸、胶原蛋白等，然而它们具有易于被吸收，生物活性差等缺陷；细胞外基质是由动物细胞合成并分泌到细胞外，分布在细胞表面或细胞间的大分子，主要是一些多糖和蛋白或蛋白聚糖；细胞外基质不仅为细胞提供了一个支持结构和附着位点，而且通过与细胞的粘附分子、生长调节因子、结合蛋白、蛋白水解酶以及酶抑制剂相互作用，而对细胞的粘附、迁移、增殖、分化以及基因表达的调控发挥重要的调节作用；由于细胞外基质具有以上生物活性作用，具有与天然组织器官相似的三维空间结构，其作为支架材料被广泛应用于组织工程中；目前已被成功提取细胞外基质的组织器官包括小肠粘膜、心脏瓣膜、血管、皮肤、神经、骨骼肌、胎盘、膀胱和肝脏；组织的来源广，可以从组织中提取到丰富的细胞外基质和抗菌肽，进而提取出层粘连蛋白、纤连蛋白、胶原蛋白等动物蛋白，研究证明外基质作为生物材料能够促进多种组织再生。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服上述技术方面的不足，而研制出一种工业化生产、工艺流程简单和生产材料来源广泛的用动物组织提取蛋白的方法。本专利技术的目的是这样实现的：一种用动物组织提取蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将新鲜的动物组织破碎之后用蒸馏水洗涤8-10次，去除血液成分，然后挤压处理成糊状；（2）将（1）中的组织中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、1%脱氧胆酸钠和0.5g/mlPMSF以及加入细球菌酸酶，混合后搅拌1小时；（3）将（2）得到的混合物离心操作30min，分离上清和沉淀物；（4）将（3）中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、0.5g/mlPMSF洗涤二次，再离心操作30min，放弃上清，得到组织细胞外基质混合物；（5）将（4）得到的混合物加入NaCl后搅拌提取；（6）将（5）的混合物离心操作1小时，放弃沉淀后得到层粘连蛋白；（7）将（5）的混合物加入2mol/L的氨基己酸和脲，离心操作1小时，放弃沉淀，得到纤连蛋白；（8）将（5）的混合物加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6，搅拌后静置，待分离后，放弃上清液，取出沉淀结晶后，即为胶原蛋白；（9）将（3）中得到的上清稀释后通过离子交换柱，加入25mmol/L乙酸铵洗去非阳离子成分，加入10%乙酸洗脱阳离子成分，收集洗脱峰，用0.01%乙酸重悬，得到动物源抗菌肽。所述离心操作中采用的是冷冻高速离心机。本专利技术的有益效果：本专利技术的优点是利用来源广泛的组织来提取层粘连蛋白、纤连蛋白、胶原蛋白和抗菌肽，此方法可用于工业大批量生产，解决了有些方法只能在实验室成功的问题，为蛋白的提取提供了广泛的技术支持；因此，本专利技术的优点是工业化生产、工艺流程简单和生产材料来源广泛。具体实施方式实施例1一种用动物组织提取蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将新鲜的动物组织破碎之后用蒸馏水洗涤8-10次，去除血液成分，然后挤压处理成糊状；（2）将（1）中的组织中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、1%脱氧胆酸钠和0.5g/mlPMSF以及加入细球菌酸酶，混合后搅拌1小时；（3）将（2）得到的混合物离心操作30min，分离上清和沉淀物；（4）将（3）中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、0.5g/mlPMSF洗涤二次，再离心操作30min，放弃上清，得到组织细胞外基质混合物；（5）将（4）得到的混合物加入NaCl后搅拌提取；（6）将（5）的混合物离心操作1小时，放弃沉淀后得到层粘连蛋白；（7）将（5）的混合物加入2mol/L的氨基己酸和脲，离心操作1小时，放弃沉淀，得到纤连蛋白；（8）将（5）的混合物加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6，搅拌后静置，待分离后，放弃上清液，取出沉淀结晶后，即为胶原蛋白；（9）将（3）中得到的上清稀释后通过离子交换柱，加入25mmol/L乙酸铵洗去非阳离子成分，加入10%乙酸洗脱阳离子成分，收集洗脱峰，用0.01%乙酸重悬，得到动物源抗菌肽。本专利技术的优点是该工艺生产流程简单，生产材料简单，产率较原有方法有了很大提高；因此，本专利技术的优点是工业化生产、工艺流程简单和生产材料来源广泛。实施例2一种用动物组织提取蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将新鲜的动物组织破碎之后用蒸馏水洗涤8-10次，去除血液成分，然后挤压处理成糊状；（2）将（1）中的组织中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、1%脱氧胆酸钠和0.5g/mlPMSF以及加入细球菌酸酶，混合后搅拌1小时；（3）将（2）得到的混合物离心操作30min，分离上清和沉淀物；（4）将（3）中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、0.5g/mlPMSF洗涤二次，再离心操作30min，放弃上清，得到组织细胞外基质混合物；（5）将（4）得到的混合物加入NaCl后搅拌提取；（6）将（5）的混合物离心操作1小时，放弃沉淀后得到层粘连蛋白；（7）将（5）的混合物加入2mol/L的氨基己酸和脲，离心操作1小时，放弃沉淀，得到纤连蛋白；（8）将（5）的混合物再次加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6，搅拌后静置，待分离后，放弃上清液，取出沉淀结晶后，即为胶原蛋白；（9）将（3）中得到的上清稀释后通过离子交换柱，加入25mmol/L乙酸铵洗去非阳离子成分，加入10%乙酸洗脱阳离子成分，收集洗脱峰，用0.01%乙酸重悬，得到动物源抗菌肽，所述离心操作中采用的是冷冻高速离心机。具体实施方式是对本专利技术的进一步说明而非限制，对本领域普通技术人员来说在不脱离本专利技术实质内容的情况下对结构做进一步变换，而所有这些变换都应属于本专利技术所附权利要求的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用动物组织提取蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将新鲜的动物组织破碎之后用蒸馏水洗涤8‑10次，去除血液成分，然后挤压处理成糊状；（2）将（1）中的组织中加入0.5mol/L的TRIS‑HCl pH7.6、1%脱氧胆酸钠和0.5g/mlPMSF以及加入细球菌酸酶，混合后搅拌1小时；（3）将（2）得到的混合物离心操作30min，分离上清和沉淀物；（4）将（3）中加入0.5mol/L的TRIS‑HCl pH7.6、0.5g/mlPMSF洗涤二次，再离心操作30min，放弃上清，得到组织细胞外基质混合物；（5）将（4）得到的混合物加入NaCl后搅拌提取；（6）将（5）的混合物离心操作1小时，放弃沉淀后得到层粘连蛋白；（7）将（5）的混合物加入2mol/L的氨基己酸和脲，离心操作1小时，放弃沉淀，得到纤连蛋白；（8）将（5）的混合物加入0.5mol/L的TRIS‑HCl pH7.6，搅拌后静置，待分离后，放弃上清液，取出沉淀结晶后，即为胶原蛋白；（9）将（3）中得到的上清稀释后通过离子交换柱，加入25mmol/L乙酸铵洗去非阳离子成分，加入10%乙酸洗脱阳离子成分，收集洗脱峰，用0.01%乙酸重悬，得到动物源抗菌肽。...

【技术特征摘要】
1.一种用动物组织提取蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将新鲜的动物组织破碎之后用蒸馏水洗涤8-10次，去除血液成分，然后挤压处理成糊状；（2）将（1）中的组织中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、1%脱氧胆酸钠和0.5g/mlPMSF以及加入细球菌酸酶，混合后搅拌1小时；（3）将（2）得到的混合物离心操作30min，分离上清和沉淀物；（4）将（3）中加入0.5mol/L的TRIS-HClpH7.6、0.5g/mlPMSF洗涤二次，再离心操作30min，放弃上清，得到组织细胞外基质混合物；（5）将（4）得到的混合物加入NaCl后搅拌提取；（6）将...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴光，
申请(专利权)人：吴光，
类型：发明
国别省市：山东,37