一种动物组织提取DNA方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种动物组织提取DNA方法，包括如下步骤：将动物组织裂解后，得到裂解混合液；向所述裂解混合液中加入盐‑炭混合液，混匀后依次冰浴、离心，得到上清液；向所述上清液中加入异丙醇，混匀后得到絮状沉淀混合液；将所述絮状沉淀混合液离心后得到DNA沉淀。本发明专利技术采用的动物组织DNA提取方法，利用无毒的NaCl和活性炭代替现有方法中的苯酚、氯仿等有毒试剂，降低了提取动物组织DNA提取过程中的安全风险；本发明专利技术提取的基本原理是利用DNA在高盐度条件下与其他物质的溶解度差异以及活性炭的吸附作用，实现DNA与杂质物质的分离。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种动物组织提取DNA方法。
技术介绍
DNA(为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称脱氧核糖核酸，是染色体的主要化学成分，同时也是基因组成的，有时被称为“遗传微粒”。DNA是一种分子，可组成遗传指令，以引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存，可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的指令，是建构细胞内其他的化合物，如蛋白质与RNA所需。带有遗传信息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传信息的表现。DNA作为生物体内的遗传物质之一，广泛存在于动物、植物、微生物中，是分子生物学研究的重要实验材料，在动物的分子生物学研究中有，往往需要提取动物组织的DNA。虽然现在动物组织DNA提取的方法有很多，例如酚氯仿抽提法，操作繁琐，往往需要反复抽提，而且操作过程中多次用到氯仿、苯酚等多种有毒的有机试剂；高盐CTAB法，这种方法虽然操作简单，但是多用于植物组织中DNA的提取，对于动物内脏组织提取的成功率较低，而且该方法产物杂质较多。有鉴于此，特提出此专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种动物组织DNA提取方法，本方法主要利用高盐度条件下DNA与其他物质的溶解度差异以及活性炭的吸附作用，实现DNA与杂质物质的分离，并且本方法不仅操作简单、成功率高、产物质量好。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种动物组织提取DNA方法，包括如下步骤：将动物组织裂解后，得到裂解混合液；向所述裂解混合液中加入盐-炭混合液，混匀后依次冰浴、离心，得到上清液；向所述上清液中加入异丙醇，混匀后得到絮状沉淀混合液；将所述絮状沉淀混合液离心后得到DNA沉淀。本专利技术采用的动物组织DNA提取方法，利用无毒的NaCl和活性炭代替现有方法中的苯酚、氯仿等有毒试剂，降低了提取动物组织DNA提取过程中的安全风险；本专利技术提取的基本原理是利用DNA在高盐度条件下与其他物质的溶解度差异以及活性炭的吸附作用，实现DNA与杂质物质的分离。优选地，裂解方法是：向动物组织中加入裂解液和蛋白酶，在50℃～60℃条件下恒温振荡2～3Hr，得到裂解混合液。在动物组织DNA提取方法中，巨大的基因组DNA是很容易缠住大分子的蛋白质，对于这些缠绕住DNA的大分子蛋白质是非常难以去除的，影响提取的DNA纯度；因此，本专利提供的DNA提取方法中，裂解液的作用是破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白
与DNA分离,抑制细胞中脱氧核糖核酸酶的活性；蛋白酶的作用是使大分子的蛋白质变小，对蛋白质的游离有巨大的促进作用。当蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组DNA缠住，有利于蛋白质在纯化过程中的去除，使最终获得的DNA的纯度更高。该方法不仅操作简单、成功率高、产物质量好，而且解决了现有的动物组织DNA提取方法中组织裂解不彻底的问题，提高了提取效率。本专利技术采用的动物组织DNA提取方法中，裂解液和蛋白酶的选择均会影响提取的成功率及最终的产物纯度。优选地，每1升所述裂解液中，含有20ml 1M Tris-HCl(pH8.0)、10ml 0.5M EDTA、23.376g NaCl、100ml 10％SDS，余量为蒸馏水。更优选地，所述蛋白酶为蛋白酶K。经过多次验证，采用上述裂解液及蛋白酶K，使动物组织裂解非常彻底，增加了提取方法成功率、产物质量好，并且提高了提取的效率。优选地，在所述向所述裂解混合液中加入盐-炭混合液，混匀后依次冰浴、离心，得到上清液的步骤中：所述离心过程是在12000rpm条件下离心10～20min；所述冰浴过程是10～20min。本专利采用的动物组织DNA提取方法中，冰浴过程是为了使不溶性蛋白发生沉淀，保持10～20min的冰浴时间基本上实现了大部分不溶性蛋白的析出，通过12000rpm的离心10～20min，实现了沉淀及上清液的分离，提高了最终DNA的产物质量。更优选地，为保证提取出质量更好的DNA，离心过程是在12000rpm条件下离心15min；冰浴过程是15min。优选地，在得到所述絮状沉淀混合液之后还包括：将所述絮状沉淀混合液在-15℃～-25℃条件下放置1～3Hr；或将所述絮状沉淀混合液在0℃～6℃条件下放置8～16Hr。在本专利技术采用的动物组织DNA提取方法中，在加入异丙醇之后可能会出现絮状沉淀较少或不出现絮状沉淀的现象，因此将絮状沉淀混合液放置于-15℃～-25℃条件下放置1～3Hr或将所述絮状沉淀混合液在0℃～6℃条件下放置8～16Hr，在上述条件下能够使得絮状沉淀物的完全析出。更优选地的，为增加絮状沉淀物的析出，将絮状沉淀混合液放置于-20℃条件下放置2Hr；或将所述絮状沉淀混合液在4℃条件下放置12Hr。优选地，在得到所述DNA沉淀之后还包括：将所述DNA沉淀完全溶解于TE缓冲液中，得到DNA储存液。TE缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。因此，在本专利采用的动物组织DNA提取方法中，采用TE缓冲液溶解DNA，起到稳定储存DNA的目的。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们是蛋白质、重碳酸盐缓冲体系和磷酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各
类细胞和器官中是不同的；因此，本领域技术人员可以根据不同的动物组织选择不同的TE缓冲液。优选地，在得到所述DNA沉淀之后还包括：向所述DNA沉淀中加入乙醇冲洗后离心，吸除乙醇后风干，得到精制DNA沉淀。本专利采用的动物组织DNA提取方法中，将所述絮状沉淀混合液离心后得到的DNA沉淀可能还会包含一部分杂质，例如异丙醇。因此向所述DNA沉淀中加入乙醇进行冲洗，并采用枪头将乙醇吸除后风干，即可得到精制DNA。因此，DNA沉淀经过乙醇清洗后吸除并风干，基本上能偶去除DNA沉淀上残留的异丙醇，使最终得到的精制DNA沉淀产物质量高。优选地，在所述向DNA沉淀中加入乙醇冲洗后离心，吸除乙醇后风干，得到精制DNA沉淀的步骤中：所述离心过程是在12000rpm条件下离心0.5～2min。优选地，所述盐-炭混合液为每30ml饱和NaCl溶液中加入1g活性炭混合得到。由现有技术相比较，本专利技术提供的一种动物组织DNA提取方法，利用高盐度条件下DNA与其他物质的溶解度差异以及活性炭的吸附作用，实现DNA与杂质物质的分离，本方法不仅操作简单、成功率高，而且得到的产物质量好。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常
规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售获得的常规产品。实施例1为说明本专利所采用技术方案效果，本实施例1提供现有技术中的动物组织DNA提取方法——酚氯仿抽提法，其具体实验过程如下：1)、取组织样并剪碎置于1.5mL离心管中；2)、向离心管中加入组织裂解液和蛋白酶K混合液，在37℃水浴条件下放置12Hr；3)、向离心管中加平衡酚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动物组织提取DNA方法，其特征在于，包括如下步骤：将动物组织裂解后，得到裂解混合液；向所述裂解混合液中加入盐‑炭混合液，混匀后依次冰浴、离心，得到上清液；向所述上清液中加入异丙醇，混匀后得到絮状沉淀混合液；将所述絮状沉淀混合液离心后得到DNA沉淀。

【技术特征摘要】
1.一种动物组织提取DNA方法，其特征在于，包括如下步骤：将动物组织裂解后，得到裂解混合液；向所述裂解混合液中加入盐-炭混合液，混匀后依次冰浴、离心，得到上清液；向所述上清液中加入异丙醇，混匀后得到絮状沉淀混合液；将所述絮状沉淀混合液离心后得到DNA沉淀。2.根据权利要求1所述的动物组织提取DNA方法，其特征在于，所述裂解方法为：向动物组织中加入裂解液和蛋白酶，在50℃～60℃条件下恒温振荡2～3Hr，得到裂解混合液。3.根据权利要求2所述的动物组织提取DNA方法，其特征在于，每1升所述裂解液中，含有20ml 1M Tris-HCl(pH8.0)、10ml 0.5M EDTA、23.376g NaCl、100ml 10％SDS，余量为蒸馏水。4.根据权利要求2所述的动物组织提取DNA方法，其特征在于，所述蛋白酶为蛋白酶K。5.根据权利要求1所述的动物组织提取DNA方法，其特征在于，在所述向所述裂解混合液中加入盐-炭混合液，混匀后依次冰浴、离心，得到上清液的步骤中：所述离心过程是在12000rpm条件下离心10...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐中林，范新浩，李奎，周荣，杨亚岚，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11