一种基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺，包括以下步骤：(1)预处理，将小黄鱼鱼鳞冲洗干净，以5％的氢氧化钠浸泡22h；用自来水冲洗至洗液为中性，以10％的柠檬酸浸泡2h；再用水冲洗至洗液为中性，置于40℃电热恒温鼓风干燥箱中恒温处理8h，最后置于粉碎机中粉碎至粉末，获得小黄鱼鱼鳞粉；(2)将小黄鱼鱼鳞粉，分别按1:13质量体积比的料液比于:66.5℃恒温水浴锅中浸提246min，得到胶原蛋白浸提液；(3)分离得到小黄鱼鱼鳞胶原蛋白粗提产物。本发明专利技术的优点是能基本保持了其原有的蛋白质结构且胶原蛋白提取纯度高。

An extraction process of small yellow croaker fish based on collagen

The invention discloses a method for extraction of small yellow croaker fish based on collagen, which comprises the following steps: (1) pretreatment, the small yellow croaker fish washed, soaked with sodium hydroxide 22h 5%; rinse with tap water to wash to neutral, with 10% citric acid soaked with water to wash rinse 2H; neutral temperature 8h in 40 C Electric thermostatic drying oven, finally placed in the crushing to obtain powder, small yellow croaker fish powder; (2) the small yellow croaker fish powder, liquid respectively according to the 1:13 quality volume ratio than: constant temperature of 66.5 DEG C water bath extraction 246min, obtained collagen extracts (; 3) isolated small yellow croaker collagen crude products. The invention has the advantages of basically maintaining the original protein structure and high purity of collagen extraction.

【技术实现步骤摘要】
一种基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺
本专利技术涉及一种生物提取工艺，具体是指基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺。
技术介绍
近年来，胶原蛋白因具有独特的生物学特性，既与细胞的分化、增生和伤口愈合等有关，同时也与生物免疫特性等有关而成为国内外研究的热点之一。水产品中胶原蛋白含量占鱼体总蛋白含量的25-30％，主要分布于鱼鳞和鱼皮中，且鱼鳞、鱼皮中的粗胶原蛋白就约占80％，而一般水产加工企业却往往将这部分作为下脚料扔掉；同时大部分低值鱼虾也含有丰富的蛋白质，因此蛋白源的开发利用已成为低值鱼虾和水产加工下脚料深度利用的主要途径。研究表明，将鱼鳞脱色后，经过酸碱处理等工艺，就可将鱼鳞胶原蛋白加工成具有滋阴止血和润肺补肾等独特功能的鱼鳞明胶。另外，利用蛋白酶水解鱼鳞后，可以得到寡肽和游离氨基酸制品。研究表明这类鱼鳞酶解液具有抗氧化、防衰老、降血压和降低胆固醇的功能。因而，利用我国丰富的鱼鳞资源，加大鱼鳞胶原蛋白的研发，对促进我国鱼鳞胶原蛋白产品产业化发展具有现实积极意义。随着我国科技进步与产业发展，鱼鳞胶原蛋白具有广阔的发展前途与应用前景。目前鱼鳞胶原蛋白的提取方法概括起来分为五种：即热水浸提、酸法浸提、碱法浸提、盐法与酶法浸提等。其基本原理都是根据胶原蛋白的特性改变蛋白质所在的外界环境，把胶原蛋白质从其它蛋白质中分离出来，在实际的提取过程中这几种方法之间有结合。小黄鱼(Larimichthyspolyactis)又名小黄花鱼，脊椎动物，硬骨鱼纲，石首鱼科，又名：小鲜、大眼、花色、小黄瓜、古鱼、黄鳞鱼、小春色、金龙、厚鳞仔，也叫“黄花鱼”、“小黄花”。体形似大黄鱼，但头较长，眼较小，鳞片较大，尾柄短而宽，背鳍起点至侧线间具5-6行鳞，金黄色。小黄鱼作为我国东部地区的重要的水产品，而大量出现在市民的餐桌，但是有关小黄鱼的鱼鳞的胶原蛋白提取工艺却未有研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种能基本保持了其原有的蛋白质结构且胶原蛋白提取纯度高的基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺。为实现上述目的，本专利技术的技术方案是一种基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺，该方法为一种热水法提取，包括以下步骤：(1)预处理，将小黄鱼鱼鳞冲洗干净，以5％的氢氧化钠浸泡22h；用自来水冲洗至洗液为中性，以10％的柠檬酸浸泡2h；再用水冲洗至洗液为中性，置于40℃电热恒温鼓风干燥箱中恒温处理8h，最后置于粉碎机中粉碎至粉末，获得小黄鱼鱼鳞粉；(2)将小黄鱼鱼鳞粉，分别按1:13质量体积比的料液比于:66.5℃恒温水浴锅中浸提246min，得到胶原蛋白浸提液；(3)对胶原蛋白浸提液进行4000rpm离心20min，将清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液最终NaCl浓度为0.9mol/L，搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃冰箱中静置6h后在4℃，4000rpm下离心20min，得到沉淀物，沉淀物是提取出的粗胶原蛋白，再将沉淀物用0.05mol/L的柠檬酸溶解并在截留分子量为1.4kD的透析袋中透析3天，至用0.1mol/L的HgN03检验外液中无Cl-为止，透析外液为纯净水，最后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，则得到小黄鱼鱼鳞胶原蛋白粗提产物。本专利技术还提供了一种基于酶解法的胶原蛋白提取方案，其技术方案是包括以下步骤：(1)预处理，将小黄鱼鱼鳞冲洗干净，以5％的氢氧化钠浸泡22h；用自来水冲洗至洗液为中性，以10％的柠檬酸浸泡2h；再用水冲洗至洗液为中性，置于40℃电热恒温鼓风干燥箱中恒温处理8h，最后置于粉碎机中粉碎至粉末，获得小黄鱼鱼鳞粉；(2)将小黄鱼鱼鳞粉，分别按0.433％的质量比的胃蛋白酶酶浓度于38℃恒温水浴锅中浸提10.8h，得到胶原蛋白浸提液；(3)对胶原蛋白浸提液进行4000rpm离心20min，将清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液最终NaCl浓度为0.9mol/L，搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃冰箱中静置6h后在4℃，4000rpm下离心20min，得到沉淀物，沉淀物是提取出的粗胶原蛋白，再将沉淀物用0.05mol/L的柠檬酸溶解并在截留分子量为1.4kD的透析袋中透析3天，至用0.1mol/L的HgN03检验外液中无Cl-为止，透析外液为纯净水，最后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，则得到小黄鱼鱼鳞胶原蛋白粗提产物。本专利技术的工艺促进海水鱼加工废弃物的综合利用、降低海水鱼加工的成本，开发新型胶原蛋白资源，本实施例对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取工艺进行了研究，以期为鱼鳞加工的产业化提供技术参考和理论依据，同时为减少环境污染和资源浪费做出贡献。本专利技术的优点是专利技术人经过系统性的研究和创新性思考，结合多个参量和数学模型获得了热水法提取小黄鱼鱼鳞胶原蛋白的的最佳工艺条件为料液比为1:13，提取时间为246min，提取温度为66.5℃。酶解法的最佳工艺条件为胃蛋白酶酶浓度为0.433％，胃蛋白酶酶提时间为10.8h，胃蛋白酶酶提温度为38℃。具体参数和实验数据见实施例。此外，本专利技术所提供的两种工艺各自具有各自的优势，热水法提取的鱼鳞胶原蛋白的起泡性，吸油性优于酶法提取的鱼鳞胶原蛋白，但酶法提取的鱼鳞胶原蛋白的气泡稳定性和纯度优于水法提取的鱼鳞胶原蛋白。下面结合说明书附图和具体实施方式对本专利技术做进一步介绍。附图说明图1羟脯氨酸标准曲线测定图；图2料液比对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取影响的测试图；图3提取温度对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取影响的测试图；图4提取时间对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取影响的测试图；图5热水法的响应面图；图6酶浓度对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取影响的测试图；图7酶解时间对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取率影响的测试图；图8酶解温度对小黄鱼鱼鳞胶原蛋白提取率影响的测试图；图9酶解法的响应面图；图10热提法胶原蛋白紫外光谱图；图11酶提法胶原蛋白紫外光谱图；图12小黄鱼鱼鳞胶原蛋白的电泳图，图12中，1:蛋白质marker；2：水溶性胶原蛋白；3：酶溶性胶原蛋白。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体的描述，只用于对本专利技术进行进一步说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述专利技术的内容对本专利技术作出一些非本质的改进和调整。1材料与方法1.1材料及来源小黄鱼鱼鳞，由浙江温州香海食品有限公司提供。1.2试验主要仪器与设备HHS型电热恒温水浴锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；LT1002E电子天平(常熟市天量仪器有限公司)；AR2140电子天平(梅特勒托利多仪器上海有限公司)；BCD-226SDCZ冰箱(海尔集团)；DHG-9246A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；高速多功能粉碎机(永康市天琪盛世工贸有限公司)；Beta1-8LDplus冷冻干燥机(德国christ公司)；TD5A型离心机(长沙英泰仪器有限公司)；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；KDN-08B定氮仪(上海洪纪仪器设备有限公司)；SZF-06C型粗脂肪测定仪(浙江托普仪器有限公司)；DYCZ-24D垂直板电泳槽(北京市六一仪器厂)；JY-SCZ2型电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司)；DC-B型马弗炉(北京独创科技有限公司)。1.3试剂氯化钠、氢氧化钠、柠檬酸、无水乙酸钠、浓硫酸、正丙醇、氯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺，其特征在于包括以下步骤：(1)预处理，将小黄鱼鱼鳞冲洗干净，以5％的氢氧化钠浸泡22h；用自来水冲洗至洗液为中性，以10％的柠檬酸浸泡2h；再用水冲洗至洗液为中性，置于40℃电热恒温鼓风干燥箱中恒温处理8h，最后置于粉碎机中粉碎至粉末，获得小黄鱼鱼鳞粉；(2)将小黄鱼鱼鳞粉，分别按1:13质量体积比的料液比于:66.5℃恒温水浴锅中浸提246min，得到胶原蛋白浸提液；(3)对胶原蛋白浸提液进行4000rpm离心20min，将清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液最终NaCl浓度为0.9mol/L，搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃冰箱中静置6h后在4℃，4000rpm下离心20min，得到沉淀物，沉淀物是提取出的粗胶原蛋白，再将沉淀物用0.05mol/L的柠檬酸溶解并在截留分子量为1.4kD的透析袋中透析3天，至用0.1mol/L的HgN03检验外液中无Cl

【技术特征摘要】
1.一种基于小黄鱼鱼鳞的胶原蛋白提取工艺，其特征在于包括以下步骤：(1)预处理，将小黄鱼鱼鳞冲洗干净，以5％的氢氧化钠浸泡22h；用自来水冲洗至洗液为中性，以10％的柠檬酸浸泡2h；再用水冲洗至洗液为中性，置于40℃电热恒温鼓风干燥箱中恒温处理8h，最后置于粉碎机中粉碎至粉末，获得小黄鱼鱼鳞粉；(2)将小黄鱼鱼鳞粉，分别按1:13质量体积比的料液比于:66.5℃恒温水浴锅中浸提246min，得到胶原蛋白浸提液；(3)对胶原蛋白浸提液进行4000rpm离心20min，将清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液最终NaCl浓度为0.9mol/L，搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃冰箱中静置6h后在4℃，4000rpm下离心20min，得到沉淀物，沉淀物是提取出的粗胶原蛋白，再将沉淀物用0.05mol/L的柠檬酸溶解并在截留分子量为1.4kD的透析袋中透析3天，至用0.1mol/L的HgN03检验外液中无Cl-为止，透析外液为纯净水，最后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，则得到小黄鱼鱼鳞胶原蛋白粗提产物。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏凤贤，张百刚，杨意，杜琨，邹盈，
申请(专利权)人：温州科技职业学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33