一种甘草素的分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及药物提取技术领域，公开了一种甘草素的分离纯化方法。本发明专利技术所述方法向甘草原料中加入1.4‑二氧六环和一号溶剂的混合溶剂或1.4‑二氧六环回流提取，过滤后，浓缩得甘草素富集液，加入二号溶剂，结晶，得甘草素粗品；接着将甘草素粗品加三号溶剂至完全溶解，然后加入四号溶重结晶过滤，获得甘草素。本发明专利技术以1.4‑二氧六环和其他适宜溶剂组成分离纯化甘草素的溶剂体系，通过简单有效的溶剂提取工艺实现了较高纯度和收率的甘草素制备过程，整个方法对设备及试剂要求低，所用试剂常见易得，设备简单，工艺容易实现标准化、自动化，可以实现产业化生产。

A method for separation and purification of glycyrrhizin

The present invention relates to the field of drug extraction, and discloses a separation and purification method of glycyrrhizin. Mixed solvent or 1.4 two oxygen six ring reflux of the method of the invention is adding 1.4 two six oxygen ring and a solvent to licorice in raw material extraction, filtration, concentration of glycyrrhizin enriched liquid, adding two solvent, crystallization, liquorice crude extract; then crude glycyrrhizin plus three solvent to dissolve completely, then add four dissolution recrystallization filtration, obtain glycyrrhizin. The invention takes 1.4 two oxygen six rings and other suitable solvents for separation and purification of glycyrrhizic acid solvent system, process to achieve a higher purity and yield of glycyrrhizin preparation process through a simple and effective method of solvent extraction, the equipment and reagents required low reagents used in common, simple equipment, easy realization process standardization, automation, can realize the industrialization of production.

【技术实现步骤摘要】
一种甘草素的分离纯化方法
本专利技术涉及药物提取
，具体涉及一种甘草素的分离纯化方法。
技术介绍
甘草素是从甘草中提取的一种二氢黄酮单体化合物，其在甘草中的含量为0.4％左右，其结构式为：甘草素作为甘草黄酮的一种，研究表明具有多种功效：(1)罗康和谢思柔研究表明甘草素能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞以及人宫颈癌Hela细胞的增殖,并能通过PI3K/Akt信号通路抑制人肺癌A549细胞的体外迁移能力，同时甘草素能抑制黑色素瘤在C57BL/6小鼠体内的侵袭转移,其机制可能是甘草素通过阻碍PI3K/Akt/NF-KB通路,降低肿瘤中MMP2/9的蛋白表达水平。(2)刘宪光采用体外培养人舌癌Cal-27细胞,用不同浓度的甘草素作用不同时间表明甘草素能够明显抑制人舌癌Cal-27细胞的增殖,并能够诱导细胞凋亡,并且呈现浓度和时间依赖性,有一定的剂量-效应关系。(3)ShigeoT研究表明甘草素不仅有抗溃疡作用而且有显著的抑制单胺氧化酶从而可治疗抑郁性精神病。(4)日本的奥田拓男教授和宫本宽治助教授研究发现甘草素是甘草中对艾滋病病毒(HIV)增殖有抑制作用的三种化学黄酮成分之一，其作用是甘草甜素的25倍。1989年日本学者申请关于甘草中黄酮类化合物治疗艾滋病(AIDS)的专利中指出甘草素具有治疗艾滋病的作用。(5)ZouKun和FuNaiwu表明甘草素有抗氧、抗过敏、抗霉菌、防止皮肤老化、有效清除超氧离子等作用。(6)此外王建新在《天然活性化妆品》一书中指出甘草素还是良好的美白化妆品原料，能较好的抑制酪氨酸酶活性，0.01μmol/L的甘草素即可抑制黑色素的形成，在美白化妆品中用量为1％。目前在医药
，甘草素作为不同形式制剂在抗肿瘤，治疗肺炎、肝病等方面申请了多次专利技术专利并实际应用。目前，甘草素提取纯化报道较少：(1)王建国等人将粉碎的甘草用甲醇浸提两天，依次用石油醚、苯、乙酸乙酯萃取，再经过聚酰胺柱层析、硅胶柱层析和乙醇-水的重结晶等步骤得到甘草素。(2)牛犇等人把粉碎的甘草用95％的乙醇萃取，再分别用石油醚、乙酸乙酯三次萃取，再用用乙酸乙醋一石油醚(1:7)洗脱，最终得到甘草素。(3)李国钟采用超临界萃取法萃取甘草素，研发结果显示，不同萃取体系对甘草素取率的影响。只用CO2溶剂，不用夹带剂时，不可萃取出甘草素；使用CO2-H2O体系，可以萃取出甘草素；若使用CO2-H2O-C2H5OH萃取体系，则萃取率明显提高，且随着乙醇浓度的增大，甘草素的萃取率增大，温度及固液比均对甘草素萃取率有一定的影响。综上所述几种制备甘草素的方法，为分离纯化甘草素提供了很好的借鉴。但现存技术存在耗时长，生产成本高，步骤繁琐，产品纯度不高，未对原材料进行充分有效利用，无法大规模生产等缺点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种甘草素的分离纯化方法，使得本专利技术能够以简便易行的工序从甘草原料中获得高收率和高纯度的甘草素。本专利技术的另外一个目的在于提供一种甘草素的分离纯化方法，使得甘草素粗品仅需一次重结晶即能够达到大于98％的高纯度的成品。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种甘草素的分离纯化方法，包括：步骤1、向甘草原料中加入1.4-二氧六环和一号溶剂的混合溶剂或1.4-二氧六环回流提取，过滤后，浓缩得甘草素富集液，加入二号溶剂，结晶，得甘草素粗品；步骤2、将甘草素粗品加三号溶剂至完全溶解，然后加入四号溶重结晶过滤，获得甘草素；其中，一号溶剂为烷烃、芳香烃、石油醚中的一种或两种；二号溶剂和四号溶剂独立选自氯代烃类溶剂中的一种或两种以上；三号溶剂为醚类溶剂中的一种或两种以上。针对现有甘草素提取分离工艺普遍较为繁琐复杂以及纯度和收率不高的问题，本专利技术以1.4-二氧六环为主要提取溶剂进行富集，同时以恰当的溶剂组合进行粗结晶和重结晶，实现了通过简便工艺即可获得高收率和高纯度的甘草素的目的。其中，作为优选，所述烷烃为戊烷、己烷、庚烷、壬烷中的一种或两种以上，在本专利技术的具体实施方式中可选择戊烷；作为优选，所述芳香烃为苯、甲苯、二甲苯等中的一种或两种以上。在本专利技术的具体实施方式中可选择苯；作为优选，所述氯代烃类溶剂包括二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷，氯丁烷和氯苯，在本专利技术具体实施方案中可选择为二氯甲烷、四氯化碳、氯丁烷、氯苯及1,2-二氯乙烷；更具体地，二号溶剂和四号溶剂可进行如下组合搭配使用：(1)二号溶剂：二氯甲烷；四号溶剂：四氯化碳；(2)二号溶剂：四氯化碳；四号溶剂：二氯甲烷；(3)二号溶剂：氯丁烷；四号溶剂：1,2-二氯乙烷；(4)二号溶剂：氯苯；四号溶剂：二氯甲烷；作为优选，所述醚类溶剂包括四氢呋喃、1.4-二氧六环、甲基叔丁基醚和苯甲醚，在本专利技术具体实施方式中可以选择四氢呋喃、1.4-二氧六环或甲基叔丁基醚，以及苯甲醚和1.4-二氧六环的组合溶剂，组合溶剂中苯甲醚和1.4-二氧六环的体积比为1:5。作为优选，所述1.4-二氧六环与一号溶剂体积比为(1:5)～(5:1)，在本专利技术具体实施方式中可以选择为5:1、3:1、1:1、1:2或1:5。作为优选，步骤1所述甘草原料与混合溶剂或1.4-二氧六环的质量比为(1:1)～(1:30)，在本专利技术具体实施方式中可以为1:15、1:10、1:8或1:22。作为优选，所述甘草素富集液与二号溶剂体积比为(1:1)～(1:10)，在本专利技术具体实施方式中可以选择为1:5、1:6或1:8。作为优选，所述三号溶剂体积用量为甘草素粗品体积的2～8倍，在本专利技术的具体实施方式中可以为3倍、5倍或8倍。作为优选，所述四号溶剂体积用量为三号溶剂体积的1～10倍，在本专利技术的具体实施方式中可以为5倍或10倍。作为优选，本专利技术所述回流提取的时间为0.5～2.5h，重结晶通过搅拌方式进行，搅拌时间为0.5～4h。此外，在本专利技术具体实施方式中，各溶剂的组合可采用如下方式之一：(1)1.4-二氧六环和戊烷(一号溶剂)、二氯甲烷(二号溶剂)、四氢呋喃(三号溶剂)、四氯化碳(四号溶剂)；(2)1.4-二氧六环和石油醚(一号溶剂)、四氯化碳(二号溶剂)、1.4-二氧六环(三号溶剂)、二氯甲烷(四号溶剂)；(3)1.4-二氧六环(一号溶剂)、氯丁烷(二号溶剂)、甲基叔丁基醚(三号溶剂)、1,2-二氯乙烷(四号溶剂)；(4)1.4-二氧六环和苯(一号溶剂)、氯苯(二号溶剂)、苯甲醚和1.4-二氧六环(三号溶剂)、二氯甲烷(四号溶剂)；在本专利技术对不同提取溶剂的对比试验中，结果表明只有在本专利技术的溶剂和配比范围下才能同时实现较高的甘草素粗品收率和纯度。与此同时，本专利技术通过对比试验意外发现，二号溶剂和三号溶剂的组合使用情形影响到使用四号溶剂重结晶的次数和纯度，在相关的试验中证明在本专利技术限定的溶剂组合情形下，仅需一次重结晶就可以达到高于98％的纯度，而其他溶剂组合无法达到这种优异的效果。由以上技术方案可知，本专利技术以1.4-二氧六环和其他适宜溶剂组成分离纯化甘草素的溶剂体系，通过简单有效的溶剂提取工艺实现了较高纯度和收率的甘草素制备过程，整个方法对设备及试剂要求低，所用试剂常见易得，设备简单，工艺容易实现标准化、自动化，可以实现产业化生产。具体实施方式本专利技术公开了一种甘草素的分离纯化方法，本领域技术人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘草素的分离纯化方法，其特征在于，包括：步骤1、向甘草原料中加入1.4‑二氧六环和一号溶剂的混合溶剂或1.4‑二氧六环回流提取，过滤后，浓缩得甘草素富集液，加入二号溶剂，结晶，得甘草素粗品；步骤2、将甘草素粗品加三号溶剂至完全溶解，然后加入四号溶剂重结晶过滤，获得甘草素；其中，一号溶剂为烷烃、芳香烃、石油醚中的一种或两种；二号溶剂和四号溶剂独立选自氯代烃类溶剂中的一种或两种以上；三号溶剂为醚类溶剂中的一种或两种以上。

【技术特征摘要】
1.一种甘草素的分离纯化方法，其特征在于，包括：步骤1、向甘草原料中加入1.4-二氧六环和一号溶剂的混合溶剂或1.4-二氧六环回流提取，过滤后，浓缩得甘草素富集液，加入二号溶剂，结晶，得甘草素粗品；步骤2、将甘草素粗品加三号溶剂至完全溶解，然后加入四号溶剂重结晶过滤，获得甘草素；其中，一号溶剂为烷烃、芳香烃、石油醚中的一种或两种；二号溶剂和四号溶剂独立选自氯代烃类溶剂中的一种或两种以上；三号溶剂为醚类溶剂中的一种或两种以上。2.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述烷烃为戊烷、己烷、庚烷、壬烷中的一种或两种以上。3.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述芳香烃为苯、甲苯、二甲苯等中的一种或两种以上。4.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述氯代烃类溶剂包括二氯甲烷、...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆俊才，李宗龙，于晓丽，
申请(专利权)人：青岛新昆仑生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37