用于治疗癌症的被遗传修饰的NK‑92细胞和单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及患有或怀疑患有癌症的受试者的治疗，其包括向受试者施用单克隆抗体和表达Fc受体的NK‑92。

For the treatment of cancer by genetic modification of NK cells and 92 monoclonal antibody

The present invention relates to the treatment with or suspected cancer subjects, including the subjects to express application of monoclonal antibody and Fc receptor of NK 92.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗癌症的被遗传修饰的NK-92细胞和单克隆抗体相关申请的交叉引用本申请要求2015年3月27日提交的美国临时申请NO.62/139,258的优先权权益，其通过引用并入本文。
技术介绍
单克隆抗体(mAbs)的抗癌治疗已经显著改善癌症患者的临床结果，特别是当与化学疗法组合时。然而，患者经常最终复发。自然杀伤细胞也可以用作细胞毒性效应细胞用于基于细胞的免疫治疗。NK-92是在患有非霍奇金淋巴瘤的受试者的血液中发现，且然后离体永生化的细胞溶解性癌细胞系。NK-92细胞来源于NK细胞，但缺乏正常NK细胞展示的主要抑制性受体，同时保留大部分活化受体。然而，NK-92细胞不攻击正常细胞，也不在人类中引起不可接受的免疫排斥反应。NK-92细胞系的表征在WO1998/49268和美国专利申请公布No.2002-0068044中公开了。NK-92细胞也被评估为治疗某些癌症的潜在治疗剂。尽管NK-92细胞保留了与NK细胞相关的几乎所有活化受体和细胞溶解途径，但它们在其细胞表面上不表达CD16。CD16是Fc受体，其识别并结合抗体的Fc部分以激活NK细胞用于抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。由于没有CD16受体，NK-92细胞不能通过ADCC机制裂解靶细胞。本专利技术通过向需要抗癌治疗的受试者同时或随后施用表达Fc受体的NK-92细胞，增强一些分子抗体的细胞毒性作用，提供了上述问题的解决方案。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术包括向需要抗癌治疗的受试者共同施用对靶癌细胞具有细胞毒性作用的单克隆抗体和被工程化以表达Fc受体的NK-92细胞。这种组合协同NK细胞的抗癌作用与治疗性抗体的抗癌作用。因此，在一个实施方式中，本专利技术提供了用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用对靶癌细胞具有细胞毒性作用的单克隆抗体和表达FcR的NK-92细胞。在一些实施方式中，FcR是CD16。在本专利技术的一个方面，NK-92细胞被遗传修饰以表达编码与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性的多肽的Fc受体(在第158位具有苯丙氨酸的FCγRIII-A或CD16(F-158)；或与SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性的多肽的Fc受体(在第158位具有缬氨酸的CD16(F158V)，更高亲和力形式)。在典型的实施方式中，CD16多肽在158位具有缬氨酸。在另外的实施方式中，NK-92细胞被另外地修饰以表达细胞因子，例如IL-2。在一些实施方式中，细胞因子靶向内质网。在具体实施方式中，细胞因子是靶向内质网的白细胞介素-2或其变体。在一些实施方式中，NK-92细胞被修饰以表达具有SEQIDNO:7的序列的多肽。在其它实施方式中，NK-92细胞被进一步修饰以表达自杀基因。在一个方面，自杀基因是iCas9。本专利技术的组合物可用于治疗癌症，包括但不限于癌症如多发性骨髓瘤，白血病，淋巴瘤，转移性乳腺癌或胃癌。被施用于患者的单克隆抗体可以是裸单克隆抗体，缀合单克隆抗体或双特异性单克隆抗体。在一些实施方式中，单克隆抗体是阿仑单抗，利妥昔单抗，曲妥珠单抗，替伊莫单抗(ibritumomab)，吉妥珠单抗(gemtuzumab)，本妥昔单抗(brentuximab)，阿曲坦单抗(adotranstuzumab)，blinatunomab，daratumumab或埃罗妥珠单抗(elotuzumab)。在一些实施方式中，单克隆抗体和表达FcR的NK-92细胞被同时施用于受试者。在其它实施方式中，受试者被施用单克隆抗体，并随后在施用单克隆抗体后，例如在24小时内，或在24至72小时内，被施用表达FcR的NK-92细胞。在一些方面，本专利技术涉及被遗传修饰以表达FcR(例如CD16)的NK-92细胞与细胞毒性单克隆抗体一起治疗癌症的用途。因此，在一些实施方式中，本专利技术提供被遗传修饰以表达CD16的NK-92细胞与细胞毒性单克隆抗体一起用于患有癌症的患者的用途。在一些实施方式中，Fc受体是在CD16的成熟形式的第158位具有缬氨酸的CD16。在一些实施方式中，Fc受体包含编码与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性的多肽的多核苷酸序列或编码SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的多核苷酸。在一些实施方式中，表达FcR的NK-92细胞被遗传修饰以表达细胞因子，例如白细胞介素-2或其变体。在一些实施方式中，白细胞介素-2靶向内质网。在一些实施方式中，表达FcR的NK-92细胞被修饰以表达如SEQIDNO:7所示的白细胞介素-2序列。在一些实施方式中，Fc受体和至少一种细胞因子由不同的载体编码。或者，Fc受体和至少一种细胞因子由相同的载体编码。在一些实施方式中，Fc受体包含在第158位具有V的CD16多肽，并且NK-92细胞被进一步遗传修饰以表达人白细胞介素-2，其中白细胞介素2靶向内质网。表达FcR的NK-92细胞还可以被进一步修饰以表达自杀基因，例如iCas9。在一些实施方式中，癌症是白血病，非霍奇金淋巴瘤，转移性乳腺癌或胃癌。单克隆抗体可以是裸单克隆抗体，缀合单克隆抗体或双特异性单克隆抗体。在一些实施方式中，单克隆抗体是阿仑单抗，利妥昔单抗，曲妥珠单抗，替伊莫单抗，本妥昔单抗，吉妥珠单抗，阿曲坦单抗，blinatunomab，avelumamab，daratumumab或埃罗妥珠单抗。在一些实施方式中，单克隆抗体和表达FcR的NK-92细胞被同时施用于受试者。在一些实施方式中，受试者被施用单克隆抗体，并随后被用被遗传修饰的表达FcR的NK-92细胞治疗。在一些实施方式中，单克隆抗体被静脉内注射到受试者。在其他实施方式中，被遗传修饰的表达FcR的NK-92细胞被注射到骨髓中。前述一般描述和以下详细描述是示例性和说明性的，并且旨在提供所要求保护的本专利技术的进一步解释。从本专利技术的以下详细描述，其他目的、优点和新颖特征对于本领域技术人员将是显而易见的。附图说明在结合附图考虑时，参考下列公开内容，本专利技术的目的、特征和优点将更容易理解。图1显示了表达IL-2的修饰形式与ERRS(内质网保留信号)和CD16的质粒的示意图。图2a和2b提供了说明性数据，其显示在约2周(图2a)和约4周(图2b)时，使用图1所示的质粒载体，在被修饰以表达CD16的NK-92细胞中的CD16表达。图3提供了说明性数据，其显示被修饰的NK-92细胞中的CD16表达，所述NK-92细胞被冷冻储存，然后解冻培养。图4提供了说明性数据，其显示与单克隆抗体组合使用的表达CD16的NK-92细胞的ADCC活性。具体实施方式在一个方面，本公开涉及被修饰以表达FcR的NK-92细胞和单克隆抗体在有需要的受试者中治疗癌症的用途。恶性细胞能够发展出逃避先天免疫细胞(如树突状细胞和天然杀伤细胞)和适应性免疫细胞(如T细胞和B细胞)提供的免疫保护的机制。因此，迫切需要减少患有癌症或怀疑患有癌症的受试者的肿瘤复发的发生率。NK-92细胞呈现出有吸引力的特征，即它们可以容易地在体外繁殖和扩增。然而，它们不表达IgGFc受体FcγRIII，因此这些细胞不能通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)起作用。本专利技术是基于使NK-92细胞表达IgGFc受体FcγRIII的遗传转化将增强NK-肿瘤细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用具有细胞毒性作用的单克隆抗体和被遗传修饰以表达FcR的NK‑92细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.27 US 62/139,2581.一种用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用具有细胞毒性作用的单克隆抗体和被遗传修饰以表达FcR的NK-92细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Fc受体是CD16多肽，其在所述CD16的成熟形式的第158位具有缬氨酸。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述Fc受体包含编码与SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性并在第158位包含缬氨酸的多肽的多核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述Fc受体包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述表达FcR的NK-92细胞被遗传修饰以表达细胞因子。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞因子是白细胞介素-2。7.根据权利要求8所述的方法，其中所述白细胞介素-2靶向内质网。8.根据权利要求5所述的方法，其中所述Fc受体和至少一种细胞因子由不同的载体编码。9.根据权利要求5所述的方法，其中所述Fc受体和至少一种细胞因子由相同的载体编码。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述Fc受体包含包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的CD16多肽，并且所述NK-92细胞被进一步遗传修饰以表达人白细胞介素-2，其中所述白细胞介素2靶向内质网。11.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·李，H·G·克林格曼，B·J·西蒙，L·博伊赛尔，
申请(专利权)人：南克维斯特公司，
类型：发明
国别省市：美国,US