利用限制了反应场的蛋白酶水解反应由抗体得到肽片段的方法技术

本发明专利技术提供一种使来自靶单克隆抗体的、包含该抗体的Fab区或可变区或者其一部分的肽片段的收量增加的方法以及该方法中使用的试剂盒。所述方的特征在于，其包含如下工序：对于固定化在多孔体的细孔内表面的靶单克隆抗体和固定化在纳米颗粒的表面的蛋白酶，以使其在液体中保持均匀分散的程度的、低于100rpm的低速进行搅拌或轻敲旋转搅拌而使其接触，从而进行前述靶单克隆抗体的消化，所述纳米颗粒具有大于前述多孔体的平均细孔直径的平均粒径；其中，前述多孔体的平均细孔直径为10nm～200nm的范围，前述纳米颗粒的平均粒径为50nm～500nm的范围。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用限制了反应场的蛋白酶水解反应由抗体得到肽片段的方法
本专利技术涉及用于使用质谱分析检测单克隆抗体的、利用限制反应场的蛋白酶水解反应由靶单克隆抗体得到包含特异性序列的肽片段的方法、优选增加收量地得到前述肽片段的方法。
技术介绍
伴随着在医疗现场利用曲妥珠单抗(商品名：Herceptin)等抗体药物进行治疗的展开，获知患者血液中的抗体浓度与患者的生存率有显著的相关性，要求高精度地对血液中的抗体浓度进行定量。此外，在药代动力学等的品质管理、确认仿制药在临床试验等中与原型药物(originaldrug)的等效性等方面，对抗体药物的鉴定、其血液中浓度的定量的需求日益增加。就蛋白质的定量法而言，除了酶抗体测定法、荧光抗体测定法、放射免疫测定法等以外，还已知使用液相色谱-串联质谱分析(LCMS)装置的方法等(例如，专利文献1、专利文献2等)。LCMS法中，将LC法和MS法组合，对用蛋白酶消化靶蛋白质后生成的肽片段进行定量。专利文献1中记载了：在确定生物学样品中的抗体量的方法中，在用蛋白酶消化样品中的非免疫球蛋白后，通过胃蛋白酶样蛋白酶处理而生成至少包含CDR区的抗体片段，通过LCMS法对其进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由靶单克隆抗体得到包含该抗体的Fab区或可变区或者其一部分的肽片段的方法，其包含如下工序：对于固定化在多孔体的细孔内表面的靶单克隆抗体、和固定化在纳米颗粒的表面的蛋白酶，以使其在液体中保持均匀分散的程度的速度进行搅拌或轻敲旋转搅拌而使其接触，从而利用所述蛋白酶消化所述靶单克隆抗体，所述纳米颗粒具有大于所述多孔体的平均细孔直径的平均粒径。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.10 JP 2015-0477401.一种由靶单克隆抗体得到包含该抗体的Fab区或可变区或者其一部分的肽片段的方法，其包含如下工序：对于固定化在多孔体的细孔内表面的靶单克隆抗体、和固定化在纳米颗粒的表面的蛋白酶，以使其在液体中保持均匀分散的程度的速度进行搅拌或轻敲旋转搅拌而使其接触，从而利用所述蛋白酶消化所述靶单克隆抗体，所述纳米颗粒具有大于所述多孔体的平均细孔直径的平均粒径。2.一种使来自靶单克隆抗体的、包含该抗体的Fab区或可变区或者其一部分的肽片段的收量增加的方法，其特征在于，其包含如下工序：对于固定化在多孔体的细孔内表面的靶单克隆抗体、和固定化在纳米颗粒的表面的蛋白酶，以使其在液体中保持均匀分散的程度的、低于100rpm的低速进行搅拌或轻敲旋转搅拌而使其接触，从而利用所述蛋白酶消化所述靶单克隆抗体，所述纳米颗粒具有大于所述多孔体的平均细孔直径的平均粒径，其中，所述多孔体的平均细孔直径为10nm～200nm的范围，所述纳米颗粒的平均粒径为50nm～500nm的范围。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述纳米颗粒的平均粒径为多孔体的平均细孔直径的1.5倍～4倍大小。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，以50rpm以下的低速进行所述搅拌或轻敲旋转搅拌。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶选自由胰蛋白酶、Lys-C、Arg-C、Asp-N、糜蛋白酶、V8蛋白酶、和它们中的2种以上的组合组成的组。6.根据权利要求1～5中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：嶋田崇史，岩本典子，
申请(专利权)人：株式会社岛津制作所，
类型：发明
国别省市：日本,JP