一组抑菌肽及其制备方法技术

本发明专利技术属于医药领域，涉及一组抑菌肽及其制备方法，具体而言涉及一组具有广谱抗菌活性的阳离子抗菌肽、肽衍生物、环肽及其制备方法和应用。本发明专利技术的抗菌肽对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌、耐药鲍曼不动杆菌、耐药铜绿假单胞菌均具有显著的杀菌效果，具有广谱、高效的特点。

A set of antimicrobial peptides and their preparation methods

The invention belongs to the field of medicine, a group of antibacterial peptide and preparation method thereof, in particular to a group of broad-spectrum antimicrobial cationic antimicrobial peptides, peptide derivatives, cyclic peptide and preparation method and application thereof. The antibacterial peptide of the invention all has bactericidal effect on Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Candida albicans, Bauman resistant Acinetobacter, Pseudomonas aeruginosa, has the characteristics of broad spectrum, efficient.

【技术实现步骤摘要】
一组抑菌肽及其制备方法
本专利技术属于医药领域，具体而言涉及一组具有广谱抗菌活性的阳离子抗菌肽、肽衍生物、环肽及其制备方法和应用。
技术介绍
自从青霉素发现以来，抗生素一直是人类治疗病原微生物感染的有力武器，但随着传统抗生素的滥用，越来越多的病原菌开始对传统抗生素产生耐药性，所以急需寻找一类全新的抗菌药物来替代抗生素进行使用。天然抗菌肽是基因编码或大分子蛋白水解产生的小分子多肽，一般是由12-50个氨基酸残基组成的阳离子型(富含赖氨酸和精氨酸)多肽，是宿主对抗外来微生物的防御机制之一。传统抗生素通过消除微生物生长或生存必不可少的条件，如使酶变性，来达到杀菌的目的，但细菌只要一种基因突变后就可以抵抗此类抗生素的攻击。抗菌肽的作用靶点是细菌的细胞膜，通过中和电荷的方法与细菌细胞膜相互作用，以此穿透杀死细菌，极大地减少了细菌产生耐药性的可能。此外，抗菌肽还具有广谱抗菌、抗病毒、抗原虫及抗肿瘤等活性，具有较高的成药价值。但天然的阳离子抗菌肽并非完美无缺，部分抗菌肽对真核生物有一定的毒性，对病原物高杀灭活性的同时往往伴随着对真核生物的溶血作用，而且线性抗菌肽在体内易被各类蛋白酶水解，半衰期短。因此如何提高其活性并最大程度延长半衰期、降低其毒性是目前抗菌肽药物开发的难点和希望所在。
技术实现思路
本专利技术涉及一组多肽或其药学上可接受的盐，其序列通式为：R1-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11；其中R1为芴甲氧羰基、一氯乙酰基或缺失；Xaa1为Phe、D-Phe、4-碘苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸或2,3,4,5,6-五氟苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸、4,4-联苯丙氨酸或一氯乙酰基；Xaa2为Lys或Arg、4-三氟甲基苯丙氨酸；Xaa3为Arg、Lys、D-Lys或D-Arg；Xaa4为Met、Lys、Ile或Leu；Xaa5为Lys、D-Lys、Leu或D-Leu；Xaa6为Lys或Cys；Xaa7为Leu、Lys、Ile、D-Leu或D-Lys；Xaa8为Met、Lys、ILe或Leu；Xaa9为Lys、Arg、D-Arg或D-Lys；Xaa10为Lys或Cys；Xaa11为Cys、Phe、D-Phe、4-碘苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸或4,4-联苯丙氨酸。作为本专利技术的一种优选方案，上述多肽或其药学上可接受的盐具有以下序列通式：R1-Xaa1-Lys-Arg-Leu-Lys-Xaa6-Leu-Leu-Lys-Lys-iF；其中R1为一氯乙酰基或缺失，Xaa1为4-碘苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸或2,3,4,5,6-五氟苯丙氨酸；Xaa6为Lys或Cys，当Xaa6为Cys时，Cys和R1位的一氯乙酰基发生环化。在某些特定的实施方式中，上述多肽或其药学上可接受的盐其氨基酸序列为：iF-Lys-Arg-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2(SEQIDNO:1)；brF-Lys-Arg-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2(SEQIDNO:2)；5fF-Lys-Arg-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2(SEQIDNO:3)；环(Caa-iF-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2(SEQIDNO:4)；环(Caa-brF-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2(SEQIDNO:5)；环(Caa-5fF-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2(SEQIDNO:6)。作为本专利技术的另一种优选方案，上述多肽或其药学上可接受的盐具有以下序列通式：Caa-Xaa1-Lys-Xaa3-Leu-Xaa5-Cys-Xaa7-Leu-Xaa9-Lys-Xaa11；其中Xaa1为Phe或D-Phe，Xaa3为Arg或D-Arg，Xaa5为Lys或D-Lys，Xaa7为Leu或D-Leu，Xaa9为Lys或D-Lys，Xaa11为Phe或D-Phe，上述序列中Cys可以与一氯乙酰基发生环化。在某些特定的实施方式中，上述多肽或其药学上可接受的盐其氨基酸序列为：Caa-D-Phe-Lys-D-Arg-Leu-D-Lys-Cys-D-Leu-Leu-D-Lys-Lys-D-Phe-NH2(SEQIDNO:7)；Caa-Phe-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-NH2(SEQIDNO:8)；环(Caa-D-Phe-Lys-D-Arg-Leu-D-Lys-Cys)-D-Leu-Leu-D-Lys-Lys-D-Phe-NH2(SEQIDNO:9)；环(Caa-Phe-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-NH2(SEQIDNO:10)。作为本专利技术的又一种优选方案，上述多肽或其药学上可接受的盐中，具有以下序列：Phe-Lys-Arg-Met-Lys-Lys-Leu-Met-Lys-Lys-Phe-NH2(SEQIDNO:11)；Fmoc-Phe-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Phe-NH2(SEQIDNO:12)；D-Phe-Lys-D-Lys-Leu-D-Leu-Lys-D-Lys-Leu-D-Arg-Cys-D-Phe-NH2(SEQIDNO:13)；环(Caa-Phe-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-Leu-Arg-Lys-Cys)(SEQIDNO:14)；环(Caa-Phe-Lys-Arg-Ile-Lys-Lys-Ile-Ile-Lys-Lys-Cys)(SEQIDNO:15)；环(Caa-fmF-Lys-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Cys)-fmF-NH2(SEQIDNO:16)；环(Caa-dpF-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Cys)-dpF-NH2(SEQIDNO:17)。本专利技术所涉及的氨基酸残基包括天然氨基酸，也包括非天然氨基酸。本专利技术所涉及的天然氨基酸所对应的三字母代码表如表1所示，本专利技术说涉及的非天然氨基酸所对应的代码表及结构如表2所示。本专利技术所涉及的所有氨基酸若不特别限定其结构，代表L型氨基酸。本专利技术所涉及的多肽，既可以是线性肽，也可以是环肽。当肽链中同时存在Cys和一氯乙酰时，在碱性水溶液条件下，肽链可以发生分子内取代反应，脱去巯基上的氢和一氯乙酰氨基上的氯，形成硫醚键，使线性肽链环化。本专利技术所涉及的多肽为线性肽时，其C末端既可以是羧酸的形式，也可以是酰胺的形式，优选以酰胺的形式存在。表1天然氨基酸三字母代码表表2非天然氨基酸和N末端基团的代码表及结构本专利技术还提供了上述多肽的制备方法，可以采用本领域技术人员熟悉的固相化学合成技术制备线性肽以及利用上述部分多肽在碱性水相中自身环化的特性制备环肽。固相化学合成技术的制备方法如下：(1)在树脂上固相合成多肽；(2)将步骤(1)的产物在三氟乙酸或氢氟酸中进行裂解，优选三氟本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组多肽，其序列通式为：R1‑Xaa1‑Xaa2‑Xaa3‑Xaa4‑Xaa5‑Xaa6‑Xaa7‑Xaa8‑Xaa9‑Xaa10‑Xaa11；其中R1为芴甲氧羰基、一氯乙酰基或缺失；Xaa1为Phe、D‑Phe、4‑碘苯丙氨酸、4‑溴苯丙氨酸或2,3,4,5,6‑五氟苯丙氨酸、4‑三氟甲基苯丙氨酸、4,4‑联苯丙氨酸或一氯乙酰基；Xaa2为Lys或Arg、4‑三氟甲基苯丙氨酸；Xaa3为Arg、Lys、D‑Lys或D‑Arg；Xaa4为Met、Lys、Ile或Leu；Xaa5为Lys、D‑Lys、Leu或D‑Leu；Xaa6为Lys或Cys；Xaa7为Leu、Lys、Ile、D‑Leu或D‑Lys；Xaa8为Met、Lys、ILe或Leu；Xaa9为Lys、Arg、D‑Arg或D‑Lys；Xaa10为Lys或Cys；Xaa11为Cys、Phe、D‑Phe、4‑碘苯丙氨酸、4‑三氟甲基苯丙氨酸或4,4‑联苯丙氨酸。

【技术特征摘要】
1.一组多肽，其序列通式为：R1-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11；其中R1为芴甲氧羰基、一氯乙酰基或缺失；Xaa1为Phe、D-Phe、4-碘苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸或2,3,4,5,6-五氟苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸、4,4-联苯丙氨酸或一氯乙酰基；Xaa2为Lys或Arg、4-三氟甲基苯丙氨酸；Xaa3为Arg、Lys、D-Lys或D-Arg；Xaa4为Met、Lys、Ile或Leu；Xaa5为Lys、D-Lys、Leu或D-Leu；Xaa6为Lys或Cys；Xaa7为Leu、Lys、Ile、D-Leu或D-Lys；Xaa8为Met、Lys、ILe或Leu；Xaa9为Lys、Arg、D-Arg或D-Lys；Xaa10为Lys或Cys；Xaa11为Cys、Phe、D-Phe、4-碘苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸或4,4-联苯丙氨酸。2.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有以下序列通式：R1-Xaa1-Lys-Arg-Leu-Lys-Xaa6-Leu-Leu-Lys-Lys-iF；其中R1为一氯乙酰基或缺失，Xaa1为4-碘苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸或2,3,4,5,6-五氟苯丙氨酸；Xaa6为Lys或Cys。3.权利要求2的多肽，其中所述R1为一氯乙酰基，Xaa6为Cys，且Xaa6位的Cys和R1位的一氯乙酰基发生环化。4.权利要求2或3的多肽，其中所述多肽氨基酸序列为：iF-Lys-Arg-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2；brF-Lys-Arg-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2；5fF-Lys-Arg-Leu-Lys-Lys-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2；环(Caa-iF-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2；环(Caa-brF-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2；环(Caa-5fF-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys)-Leu-Leu-Lys-Lys-iF-NH2。5.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有以下序列通式：Caa-Xaa1-Lys-Xaa3-Leu-Xaa5-Cys-Xaa7-Leu-Xaa9-Lys-Xaa11；其中Xaa1为Phe或D-Phe，Xaa3为Arg或D-Arg，Xaa5为Lys或D-Lys，Xaa7为Leu或D-Leu，Xaa9为Lys或D-Lys，Xaa11为Phe或D-Phe。6.权利要求5的多肽，其中所述多肽氨基酸序列为：Caa-D-Phe-Lys-D-Arg-Leu-D-Lys-Cys-D-Leu-Leu-D-Lys-Lys-D-Phe-NH2；Caa-Phe-Lys-Arg-Leu-Lys-Cys-Leu-Leu-Lys-Lys-Phe-NH2；...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯军，张喜全，唐汉卿，东圆珍，李亚茹，徐一帆，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，正大天晴药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31